【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探针组合物、试剂盒及检测方法。
技术介绍
1、人乳头瘤病毒(human papillomavirus，hpv)属于乳头瘤病毒科，是一种小分子的、无被膜包被的环状双链dna病毒。对于感染生殖道和肛门的hpv，根据各基因型别致病力大小或致癌危险性大小可分为低危型和高危型两大类。有报道称，在99.7％的宫颈癌患者体内检测到高危型hpv dna的存在，其中hpv16型、18型、45型和31型感染占80％，低危型hpv一般与尖锐湿疣或低度鳞状上皮内病变相关。子宫颈癌已成为严重威胁女性健康的公共卫生问题。因此，快速、准确的检测出hpv高危型的感染对于早期治疗和降低宫颈癌的发病率和死亡率等具有重要的意义。
2、hpv基因检测作为宫颈癌的一种筛查手段得到了更广泛的应用。分子检测方法比较传统的细胞学检测方式，不需要等到细胞出现变化时才分辨出hpv感染，可以在病毒感染细胞但尚未出现症状的潜伏期，在病毒感染的最早期阶段筛查出这一病毒。目前hpv基因分型检测方法有：1、原位杂交技术：以核酸探针(dna或rna)与样本进行原位杂交反应，原位杂交的优点是可对可疑细胞进行定位，同时具备半定量的功能；不足之处为敏感性低、样本质量要求高、劳动量大、花费较大，而且每种类型hpv都需要相应的探针。2、pcr反向点杂交法：采用pcr体外扩增和dna反向点杂交相结合。利用hpv的基因特点设计特异引物，可以扩增出包含hpv基因型的目的片段，再将扩增产物与固定在膜条上的分型探针进行杂交，依据杂交信
3、市面上现有的hpv检测产品中，部分产品不具有分型功能，而hpv荧光分型产品中，每条通道只能检测一种靶标，单次检测样本通量少，极大地增加了试剂成本和人工成本。现有获批的熔解曲线分型检测产品较少，且灵敏度不高，检测限在500 1000拷贝/反应，显著低于其它方法学检测产品。因此，现有技术普遍存在检测时间偏长、分型数量不足、分型不清晰、灵敏度低等缺点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探针组合物、试剂盒及检测方法，解决了上述
技术介绍
中的问题。
2、本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：提供了一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探针组合物，包括通用引物组和探针组；所述通用引物组的序列如seq idno.1～no.10：
3、表1通用引物组的序列
4、
5、
6、所述探针组的序列如seq id no.11～no.30：
7、表2探针组的序列
8、 编号 hpv型别 探针名称 探针序列 seq id no.11 hpv-6 hpv-6-p1 aactacatcttccaca seq id no.12 hpv-39 hpv-39-p1 ctatagagtcttccataccttctaca seq id no.13 hpv-53 hpv-53-p7 ctttctgcaaccacacagtctatgtcc seq id no.14 hpv-11 hpv-11-p1 ctgtgtctaaatctgc seq id no.15 hpv-45 hpv-45-p1 aaatcctgtgccaagtacatat seq id no.16 hpv-56 hpv-56-p3 ctgctacagaacagttaagtaaatatgatg seq id no.17 hpv-16 hpv-16-p1 ccatatctacttcagaaa seq id no.18 hpv-51 hpv-51-p2 cggtttccccaacatttac seq id no.19 hpv-73 hpv-73-p2 tacacaggctagtagctcta seq id no.20 hpv-35 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探针组合物，其特征在于：包括通用引物组和探针组；所述通用引物组的序列如SEQ ID No.1～No.10；所述探针组的序列如SEQIDNo.11～No.30。
2.根据权利要求1所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探针组合物，其特征在于：其中，
3.根据权利要求1所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探针组合物，其特征在于：还包括人β-globin基因内参引物探针序列如SEQ ID No.31～No.33。
4.一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的试剂盒，其特征在于：包括如权利要求1～3任一项所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探针组合物。
5.根据权利要求4所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的试剂盒，其特征在于：包括HPV-A组反应液和HPV-B组反应液，其中：所述HPV-A组反应液包括序列如SEQ IDNo.11～No.20的探针；所述HPV-B组反应液包括序列如SEQ ID No.21～No.30的探针。
6.一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测方法，其
7.根据权利要求6所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测方法，其特征在于：步骤S4中，PCR反应体系的配制包括10～20μL核酸扩增反应液、10～20μL引物探针反应液和1～5μL待测样本核酸。
8.根据权利要求6所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测方法，其特征在于：扩增程序为：预变性94℃4min；预扩增阶段变性、退火、延伸及检测荧光条件为：94℃20s，58℃30，71℃30s，15cycles；PCR循环阶段变性、退火、延伸及检测荧光条件为：94℃20s，55℃30，71℃30s，30cycles，71℃时荧光检测；熔解段72℃4min，95℃2min，40℃20s，40℃～80℃收集荧光，1cycles。
9.根据权利要求6所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测方法，其特征在于：步骤S5中的分型方法具体为：
10.根据权利要求6所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测方法，其特征在于：步骤S5中判读标准为：
...【技术特征摘要】
1.一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探针组合物，其特征在于：包括通用引物组和探针组；所述通用引物组的序列如seq id no.1～no.10；所述探针组的序列如seqidno.11～no.30。
2.根据权利要求1所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探针组合物，其特征在于：其中，
3.根据权利要求1所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探针组合物，其特征在于：还包括人β-globin基因内参引物探针序列如seq id no.31～no.33。
4.一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的试剂盒，其特征在于：包括如权利要求1～3任一项所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探针组合物。
5.根据权利要求4所述的一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的试剂盒，其特征在于：包括hpv-a组反应液和hpv-b组反应液，其中：所述hpv-a组反应液包括序列如seq idno.11～no.20的探针；所述hpv-b组反应液包括序列如seq id no.21～no.30的探针。
【专利技术属性】
技术研发人员：虞波，吴帅帅，王宇轩，袁韵馨，许秀梅，
申请(专利权)人：杭州艾维克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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