【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物活性肽制备，具体涉及一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法。
技术介绍
1、抗菌肽是一类存在于大多数生物体内的两亲性、带正电的小分子多肽，具有广谱抗菌活性。根据肽链的结构特征可将抗菌肽分为两类：一种是富含半胱氨酸呈螺旋状的开放性的线形肽；另一种是自身连接成环的环形肽，且这两种肽链结构通过与酰基连接的脂肪酸形成脂肽。由环形肽和脂肪酸组成的脂肽，具有抗菌谱广、作用迅速强大、不易产生耐药性等优点，在医药、化妆品、食品和农业等领域具有广阔的应用前景。芽孢杆菌属细菌广泛地存在于生物体和环境中，是一类在农业、工业及医药卫生等领域具有重要应用价值的细菌，其中枯草芽孢杆菌是一种公认的益生菌，已被广泛使用。芽孢杆菌属细菌在防治植物病害领域中，是常规农药的最有前途的替代品，能够促进植物生长，诱导植物自身抗性，抑制不同病害，以及通过竞争空间和营养成分直接对微生物病原体造成拮抗作用。虽然芽孢杆菌的有益保护作用涉及多种机制，但抗菌脂肽化合物的产生是影响其生防活性的最重要因素之一。
2、芽孢杆菌可以产生多种抗菌物质，主要包括表面活性素（surfactin）、伊枯草菌素类（iturin）和丰原素（fengycin）等脂肽类抗生素。表面活性素、伊枯草菌素和丰原素是一类主要由革兰氏阳性芽胞杆菌通过非核糖体合成途径产生的抗菌脂肽，一般是由1个β-羟基脂肪酸与7~10个氨基酸肽链以酰胺键连接而成。脂肽的制备一般是通过放大培养发酵芽孢杆菌得到发酵液，对发酵液分离纯化得到。
3、专利cn116082470a公开了一种贝莱斯芽孢杆菌
4、专利cn116496357a公开了一种伊枯草菌素a抗菌脂肽及其制备方法，该专利技术枯草芽孢杆菌为脂肽生产菌株，通过优化发酵培养基及发酵条件，使优化后的发酵培养基产的抗菌脂肽与纯豆粕发酵培养相比，含量得到了较大的提升。
5、专利cn110790820a公开了一种芽孢杆菌菌株fjat-52631产生的脂肽及其制备方法，该专利技术通过活化、发酵和冻干等步骤，制备得到了脂肽粉末。
6、抗菌脂肽由于结构上的特点，使其比一般的小分子肽要更加耐受高温，有时候放置在60℃~100℃的温度环境中，仍然保持良好的抑菌活性状态。尽管不能放置在高温环境中较长时间，但是与普通的寡肽相比，已经具有了很好的耐高温性质。脂肽实际应用中，根据应用环境和存储等的要求，需要对其干燥固化成粉末状，以便于运输、存储和随时用随时配制等目的。喷雾干燥是一种常用的物料干燥技术，广泛应用于食品、制药和化工等行业，其基本原理是将液态物料送入干燥室雾化，再与热空气接触的过程中，水分迅速汽化，使得液态物料转变为干燥粉末，具有成本低、干燥迅速和适合大批量生产等优势。冷冻干燥也是将液态物料处理为固态粉末的一种干燥方法，其利用冰晶升华的原理而实现干燥。和喷雾干燥相比，运行费用高，冷冻干燥时间远长于喷雾干燥。因此在实际使用时，喷雾干燥的应用范围更为广泛。脂肽虽然具有耐高温的性质，但是由于喷雾干燥的温度较高，通常需要达到150℃~180℃，有时候甚至需要更高的干燥温度，而这对脂肽无疑具有较大的破坏作用，虽然可以实现干燥，但是活性被破坏，会导致抗菌效果较差。
7、因此对发酵得到的脂肽混合物进行耐高温保护，使其在高温的干燥过程中，保留较高的抗菌活性，具有重要意义。
技术实现思路
1、根据现有技术的不足，本专利技术将发酵得到的脂肽混合物与改性磷脂化合物、胆固醇进行混合，构建一种耐高温的复合脂肽脂质体混悬液，经高温喷干后，得到的复合脂肽仍然具有良好的抗菌活性，解决了
技术介绍
中提出的技术问题。具体地，本专利技术的技术方案包括以下内容：
2、一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
3、改性磷脂化合物、胆固醇和氯仿混合溶解后经40℃~45℃旋蒸40min~50min得到脂质薄膜；
4、所述脂质薄膜、脂肽混合物和磷酸盐缓冲液混合振摇后，经200w~300w超声功率处理2min~3min得到复合脂肽脂质体混悬液；
5、所述复合脂肽脂质体混悬液经喷雾干燥得到复合脂肽粉末。
6、进一步地，所述改性磷脂化合物的制备方法包括以下步骤：
7、端氨基磷脂化合物、醛基交联剂和氯仿混合搅拌形成混合分散液；
8、所述混合分散液和乙酸混合后经微波处理得到混合液，所述混合液经减压蒸发和洗涤干燥得到所述改性磷脂化合物。
9、进一步地，所述端氨基磷脂化合物包括1-棕榈酰-2-油酰基磷脂酰乙醇胺或1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。
10、进一步地，所述醛基交联剂包括乙二醛。
11、进一步地，所述端氨基磷脂化合物：醛基交联剂：氯仿的质量比为1：0.2~0.3：1000~1500。
12、进一步地，所述乙酸的加入量为每毫克所述混合分散液加入0.4μl~0.8μl。
13、进一步地，所述微波处理的条件包括温度40℃~50℃、功率200w~300w、转速50r/min~100r/min和处理时间10min~15min。
14、进一步地，所述脂肽混合物的制备方法包括以下步骤：
15、芽孢杆菌活化后接种于种子液体培养基并经37℃培养24h得到种子液；
16、所述种子液接按照5%的接种量接种于发酵培养基并经30±1℃培养40h得到发酵液；
17、所述发酵液调酸至ph为2.0并分离得到沉淀，所述沉淀经纯化得到所述脂肽混合物。
18、进一步地，所述芽孢杆菌为菌株编号cicc 10732的枯草芽孢杆菌、菌株编号cicc21890的短小芽孢杆菌和菌株编号cicc 10103地衣芽孢杆菌。
19、进一步地，所述种子液体培养基由蛋白胨5g、牛肉浸粉2.5g、酵母浸膏2.5g、氯化钠7.5g、葡萄糖5g、加蒸馏水补足至1l组成。
20、进一步地，所述发酵培养基由葡萄糖20g、l-谷氨酸钠5g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、磷酸二氢钾1g、硫酸亚铁0.15mg、硫酸铜0.16mg、加蒸馏水补足至1l组成。
21、进一步地，所述磷酸盐缓冲液的ph为5.0~5.8。
22、进一步地，所述改性磷脂化合物：胆固醇：氯仿：脂肽混合物：磷酸盐缓冲液的重量份之比为10~25：2.5~10：1000~2000：1：450~1000。
23、进一步地，所述喷雾干燥的条件包括进料速率10ml~12ml/min和进风温度140℃~150℃和出风温度50~55℃。
24、与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
25、本专利技术采用脂质体包裹的思路，利用脂质体的核心结构磷脂双分子层，磷脂双分子层含有疏水结构层和亲水结构层，可以实现对亲水和疏水物质的包裹。但是由于仅仅采用现有技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述改性磷脂化合物的制备方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述端氨基磷脂化合物包括1-棕榈酰-2-油酰基磷脂酰乙醇胺或1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。
4.根据权利要求2所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述醛基交联剂包括乙二醛。
5.根据权利要求2所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述端氨基磷脂化合物：醛基交联剂：氯仿的质量比为1：0.2~0.3：1000~1500。
6.根据权利要求2所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述乙酸的加入量为每毫克所述混合分散液加入0.4μL~0.8μL。
7.根据权利要求2所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述微波处理的条件包括温度40℃~50℃、功率200W~300W、转速5
8.根据权利要求1所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述脂肽混合物的制备方法包括以下步骤：
9.根据权利要求1所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH为5.0~5.8。
10.根据权利要求1所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述改性磷脂化合物：胆固醇：氯仿：脂肽混合物：磷酸盐缓冲液的重量份之比为10~25：2.5~10：1000~2000：1：450~1000。
...【技术特征摘要】
1.一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述改性磷脂化合物的制备方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述端氨基磷脂化合物包括1-棕榈酰-2-油酰基磷脂酰乙醇胺或1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。
4.根据权利要求2所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述醛基交联剂包括乙二醛。
5.根据权利要求2所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于，所述端氨基磷脂化合物：醛基交联剂：氯仿的质量比为1：0.2~0.3：1000~1500。
6.根据权利要求2所述一种防止高温失活的复合脂肽的制备方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：王俊，高亦，张伟，
申请(专利权)人：慧明嘉兴生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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