【技术实现步骤摘要】
本申请涉及化学分析检测，具体涉及一种纳米酶基比色探针测定钾的方法及其探针和应用。
技术介绍
1、钾离子(k+)在生物过程中发挥多种作用，包括神经传递、维持肌力和细胞外渗透压、酶的激活、细胞的凋亡、调节血压、ph和活细胞中其他离子的浓度等。由于k+浓度异常是多种疾病的症状，包括肾脏疾病、酗酒、厌食、暴食、心脏病、糖尿病、艾滋病和癌症等；灵敏检测k+已成为一个非常重要的问题。钾也是烟草中最重要的元素之一，其含量对烟草质量有重要影响，因而烟草中钾含量的测定具有重要意义。常用方法有全钾离子选择电极分析法、亚硝酸钴钠法、四苯硼钠容量法、比浊法、原子吸收光度法、火焰光度法和连续流动分析法等。虽然连续流动分析法的准确度、高精密度好、简便快速。但现行yct 217-2007烟草及烟草制品钾的测定连续流动法，是基于火焰光度计的连续流动法，涉及用到煤气，造成一定安全隐患。而yy/t 1202-2013钾测定试剂盒(酶法)用到了天然酶，受到成本、稳定性等制约。比色法简单、易操作，但目前报道的也只是用到了适配体法，同样存在成本高及不稳定的困扰。因此，有必要探索更安全且灵敏的测定钾的方法。
技术实现思路
1、本申请提供一种纳米酶基比色探针测定钾的方法及其探针和应用，该方法选择性高，没有共存的其他物质干扰，可用于烟草、血液及环境中钾离子测定。
2、本申请的第一个目的是提供一种纳米酶基比色探针测定钾的方法，以磷钨酸、硝酸铈和氯化铜为前驱体，水热法合成含铜、铈磷钨酸纳米酶，以其为探针对不同浓度的k+标
3、优选地，其步骤包括：
4、(1)将所述磷钨酸溶于水中，加入所述氯化铜和所述硝酸铈混合均匀，然后在150-250℃条件下加热10-12h，冷却至室温后离心，过滤掉上层液体，冷冻干燥，得到cu,ce-pws纳米酶；
5、(2)将所述cu,ce-pws纳米酶溶于水中制成cu,ce-pws纳米酶溶液，加入四苯硼钠、2,4-dp、4-ap及h2o2进行反应，再加入不同浓度的所述k+标准溶液，测定其吸光度值，建立吸光度与k+浓度的定量关系，绘制所述标准曲线，得到所述回归方程；
6、(3)另在所述cu,ce-pws纳米酶溶液中加入所述四苯硼钠、所述2,4-dp、所述4-ap及所述h2o2进行反应，再加入不同浓度的所述样品测定液标准溶液，测定其吸光度值，通过所述回归方程得到所述样品的k+含量。
7、优选地，步骤(1)中所述磷钨酸的质量与所述水的体积比为0.005-0.0075g/ml。
8、优选地，步骤(1)中所述磷钨酸、所述氯化铜和所述硝酸铈的质量比为(5-6)：(4-5)：(3-4)。
9、优选地，步骤(2)中所述cu,ce-pws纳米酶溶液的浓度为1mg/ml，所述四苯硼钠的浓度为0.05mol/l，所述2,4-dp的浓度为1mg/ml，所述4-ap的浓度为40mg/ml，所述h2o2的浓度为50mmol/l，所述cu,ce-pws纳米酶溶液、所述四苯硼钠、所述2,4-dp、所述4-ap和所述h2o2的用量比为(5-10)：(5-10)：(5-10)：(5-10)：(2-5)。
10、优选地，步骤(2)中所述k+标准溶液的浓度范围在0.05-20μg/ml。
11、优选地，步骤(2)中在505nm波长处测定吸光度值。
12、优选地，步骤(3)中在505nm波长处测定吸光度值。
13、本申请的第二个目的是提供一种测定钾的纳米酶基比色探针，其为任一上述的纳米酶基比色探针测定钾的方法中的所述含铜、铈磷钨酸纳米酶。
14、本申请的第三个目的是提供任一上述的纳米酶基比色探针测定钾的方法在烟草及烟草制品检测中的应用。
15、目前，磷钨酸类漆酶纳米酶多用于检测重金属离子。
16、本申请的方法以磷钼酸、硝酸铈及氯化铜为前驱，水热法合成在中性环境中具有类漆酶纳米酶活性的含铜铈磷钨酸纳米酶(cu,ce-pws)，在h2o2存在下，cu,ce-pws氧化2,4二氯酚及4-氨基安替比林产生红色体系，利用四苯硼钠对cu,ce-pws纳米酶的抑制作用，同时利用在弱碱性介质中，钾离子与四苯硼钠溶液形成稳定化合物，使体系的类漆酶活性得到恢复，导致体系吸光度增加，从而建立了钾离子的光度法快速检测方法。
17、本申请具有的有益效果在于：
18、1、本申请的方法利用具有高负电荷、独特螯合性质和多样结构的钨钼杂多酸与ce4+及cu2+为原料制备纳米酶(cu,ce-pws)，ce原子和cu原子的协同作用产生了强的模拟酶漆酶活性，在h2o2存在下其活性进一步提升。
19、2、本申请的方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速安全等特点。
20、3、本申请的探针对钾离子选择性高，灵敏度高。
21、4、本申请的方法选择性高，没有共存的其他物质干扰，例如so42-、nh4+、na+(100)、ca2+、no3-、al3+、po43-、mg2+(80)，fe3+、co2+、mo(ⅵ)，ni2+、sio32-(10)，zn2+、mn2+、as(ⅲ)、cl-、cu2+(1)，适用于烟草及烟草制品检测。
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1.一种纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，以磷钨酸、硝酸铈和氯化铜为前驱体，水热法合成含铜、铈磷钨酸纳米酶，以其为探针对不同浓度的K+标准溶液的吸光度进行检测，建立吸光度与K+浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程，再对不同浓度的样品测定液标准溶液的吸光度进行检测，通过所述回归方程得到样品的K+含量。
2.根据权利要求1所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，其步骤包括：
3.根据权利要求2所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，步骤(1)中所述磷钨酸的质量与所述水的体积比为0.005-0.0075g/mL。
4.根据权利要求2所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，步骤(1)中所述磷钨酸、所述氯化铜和所述硝酸铈的质量比为(5-6)：(4-5)：(3-4)。
5.根据权利要求2所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，步骤(2)中所述Cu,Ce-PWs纳米酶溶液的浓度为1mg/mL，所述四苯硼钠的浓度为0.05mol/L，所述2,4-DP的浓度为1mg/mL，所述4-AP的浓度为40mg/m
6.根据权利要求2所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，步骤(2)中所述K+标准溶液的浓度范围在0.05-20μg/mL。
7.根据权利要求2所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，步骤(2)中在505nm波长处测定吸光度值。
8.根据权利要求2所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，步骤(3)中在505nm波长处测定吸光度值。
9.一种测定钾的纳米酶基比色探针，其特征在于，其为权利要求1-8任一所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法中的所述含铜、铈磷钨酸纳米酶。
10.权利要求1-8任一所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法在烟草及烟草制品检测中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，以磷钨酸、硝酸铈和氯化铜为前驱体，水热法合成含铜、铈磷钨酸纳米酶，以其为探针对不同浓度的k+标准溶液的吸光度进行检测，建立吸光度与k+浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程，再对不同浓度的样品测定液标准溶液的吸光度进行检测，通过所述回归方程得到样品的k+含量。
2.根据权利要求1所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，其步骤包括：
3.根据权利要求2所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，步骤(1)中所述磷钨酸的质量与所述水的体积比为0.005-0.0075g/ml。
4.根据权利要求2所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，步骤(1)中所述磷钨酸、所述氯化铜和所述硝酸铈的质量比为(5-6)：(4-5)：(3-4)。
5.根据权利要求2所述的纳米酶基比色探针测定钾的方法，其特征在于，步骤(2)中所述cu,ce-pws纳米酶溶液的浓度为1mg/ml，所述四苯硼钠的浓度为0.05mol/l，...
【专利技术属性】
技术研发人员：顾健龙，蔡洁云，高莉，刘宇晨，孟红明，马静，杨兵，龙杰，张轲，宗达，卢瑾，李郸，魏佳，
申请(专利权)人：云南省烟草质量监督检测站，
类型：发明
国别省市：
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