【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫组织化学检测领域，具体涉及一种trop2免疫组化检测质控品或参考品，及其制备方法和应用。
技术介绍
1、免疫组织化学(immunohistochemistry,ihc,简称免疫组化)是一种利用抗原和抗体之间的特异性结合来定位检测细胞和组织层面中靶标蛋白的技术。一般需要由专业的病理医师在光学显微镜下进行观察和判读。目前已经成为病理学临床诊断的重要辅助技术，免疫组织化学染色也越来越多地用于提供预测和预后信息。
2、最初免疫组化技术作为一种定性分析的工具，质量控制方面要求同时进行阴性和阳性质控组织的染色，以避免假阳性或假阴性情况的发生。而随着此项技术在临床诊断中的广泛深入应用，由最初的定性分析逐步演变出定量/半定量的分析需求。对于阳性染色的识别也被细分为弱阳性(1+)、中阳性(2+)和强阳性(3+)，而凭借人眼主观地对不同染色强度的细胞进行计数则会带来较大偏差，导致病理判读结果不可信。因此质量控制的设置也应进一步优化。
3、滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigen-2,trop2)最初报道为滋养层细胞的表面标志物，但后续在许多实体瘤中均发现trop2表达升高，而在某些正常组织中表达较低。它通过多种信号通路调控肿瘤的生长、侵袭和扩散。研究表明，trop2在百余种肿瘤中均呈阳性，尤其是各种来源的鳞状细胞癌、尿路上皮癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌和卵巢癌等，其高表达与肿瘤患者生存期缩短及不良预后密切相关。
4、实验中多选用扁桃体作为trop2
5、当前扁桃体/皮肤正常组织质控，仅可粗略对阴阳性进行质控，而无法对具体的染色强度进行质控。而通过选取不同表达强度的肿瘤组织作为对照样本，又受到样本来源、可持续供应等限制，此外处于肿瘤异质性的考虑，同一组织蜡块的前后稳定性可能不佳。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服上述正常/肿瘤组织质控的不足之处而提供一种用于对trop2的0、1+、2+、3+染色强度进行质控的细胞石蜡样本，尤其涉及到对肿瘤组织中trop2染色结果进行h-score判读的应用，在临床上提供可信赖的实验依据。
2、技术方案：
3、本专利技术一方面提出一种trop2免疫组化检测质控品，所述质控品为细胞系石蜡切片，所述质控品包括：所述阴性质控品为mda-mb-231细胞系石蜡切片，来源于人乳腺癌细胞；所述弱阳性质控品为mda-mb-453细胞系石蜡切片，来源于人乳腺癌细胞；所述中阳性质控品为mcf-7细胞系石蜡切片，来源于人乳腺癌细胞；所述强阳性质控品为t-47d细胞系石蜡切片，来源于人乳腺管癌细胞。
4、本专利技术还提出一种trop2免疫组化检测质控品的制备方法，步骤为：s1：histogel预处理，将histogel融化后，置于65℃的水浴锅中保持液态；
5、s2：细胞收集，离心收集细胞，得到细胞悬液；
6、s3：细胞清洗，取步骤s2中的细胞悬液，离心去上清，再加入pbs缓冲液并混匀，再次离心收集细胞团；
7、s4：细胞固定，在细胞团中加入中性福尔马林固定；
8、s5：制作细胞凝胶柱，对固定完成的细胞离心去上清，再加入pbs缓冲液清洗，收集细胞团后，加入熔化的histogel，得到细胞悬液，将细胞悬液加入模具中，等待histogel凝固，制成细胞凝胶柱；
9、s6：细胞脱水，将细胞凝胶柱置于长条孔包埋盒，流水缓慢冲洗，而后顺次将细胞凝胶柱投入50％、75％、85％、95％乙醇中浸泡，100％乙醇浸泡；
10、s7：细胞透明，细胞脱水后的细胞凝胶柱投入二甲苯中；
11、s8：细胞浸蜡，将脱水、透明后细胞凝胶柱置于融化的液态石蜡中浸泡；s9：细胞包埋，将细胞凝胶柱转移固定于不锈钢包埋盒底模模具中，盖上塑料包埋盒，灌入石蜡，置于冷台上使蜡块凝固，细胞蜡块制作完成；
12、s10：切片制备，将细胞蜡块置于切片机，进行切片，得到的细胞白片进行捞片、烤片；
13、s11：免疫组化染色；
14、s12：切片脱水；
15、s13：切片透明；
16、s14：封片。
17、优选的，所述s3细胞清洗步骤中细胞悬液中的细胞数量至少为108数量级。
18、优选的，所述s4细胞固定步骤中，通过离心去除福尔马林和pbs。
19、优选的，所述s5制作细胞凝胶柱步骤中，细胞与histogel的比例关系为每1×108个细胞中加入0.3～0.6ml熔化的histogel。
20、优选的，所述s7细胞透明步骤中，需观察是否出现二甲苯浑浊，若出现二甲苯浑浊，需要返回细胞脱水步骤，采用100％乙醇重新脱水。
21、优选的，所述s10切片制备步骤中，切片的厚度为3-5μm。
22、本专利技术还提出一种trop2免疫组化试剂盒，包括所述的质控品。
23、所述试剂盒，还包括二甲苯、乙醇、抗原修复液、过氧化氢、免疫显色试剂、dab显色试剂、苏木素、中性树胶中的一种或多种。
24、有益效果：
25、1.本专利技术首次提出以细胞系石蜡切片制成的0、1+、2+、3+染色强度的细胞质控品(细胞质控片)，为trop2免疫组化判读结果提供了一个标准的参考点，使得染色轮次间的差异可以被精准监控，减少假阳性和假阳性结果的发生。
26、2.组织质控片由于个体之间的生物差异性，乃至同一石蜡样本前后的异质性，从某种程度上无法精准提供染色质控参考。而细胞质控片一般具有高度的均一性和异质性，不存在此问题。
27、3.细胞质控片可以批量生产并易于储存使用，减少了制备和处理的复杂性。
28、4.从伦理角度，细胞质控品减少了对人体组织的依赖，从而降低了获取组织样本时可能涉及的伦理问题。
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1.一种TROP2免疫组化检测质控品，其特征在于，所述质控品为细胞系石蜡切片，
2.一种如权利要求1所述的TROP2免疫组化检测质控品的制备方法，其特征在于，步骤为：
3.根据权利要求2所述的TROP2免疫组化检测质控品的制备方法，其特征在于，所述S3细胞清洗步骤中细胞悬液中的细胞数量至少为108数量级。
4.根据权利要求2所述的TROP2免疫组化检测质控品的制备方法，其特征在于，所述S4细胞固定步骤中，通过离心去除福尔马林和PBS。
5.根据权利要求2所述的TROP2免疫组化检测质控品的制备方法，其特征在于，所述S5制作细胞凝胶柱步骤中，细胞与HistoGel的比例关系为每1×108个细胞中加入0.3～0.6mL熔化的HistoGel。
6.根据权利要求2所述的TROP2免疫组化检测质控品的制备方法，其特征在于，所述S7细胞透明步骤中，需观察是否出现二甲苯浑浊，若出现二甲苯浑浊，需要返回细胞脱水步骤，采用100％乙醇重新脱水。
7.根据权利要求2所述的TROP2免疫组化检测质控品的制备方法，其特征在于，所述
8.一种TROP2免疫组化试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的质控品。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包括二甲苯、乙醇、抗原修复液、过氧化氢、免疫显色试剂、DAB显色试剂、苏木素、中性树胶中的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种trop2免疫组化检测质控品，其特征在于，所述质控品为细胞系石蜡切片，
2.一种如权利要求1所述的trop2免疫组化检测质控品的制备方法，其特征在于，步骤为：
3.根据权利要求2所述的trop2免疫组化检测质控品的制备方法，其特征在于，所述s3细胞清洗步骤中细胞悬液中的细胞数量至少为108数量级。
4.根据权利要求2所述的trop2免疫组化检测质控品的制备方法，其特征在于，所述s4细胞固定步骤中，通过离心去除福尔马林和pbs。
5.根据权利要求2所述的trop2免疫组化检测质控品的制备方法，其特征在于，所述s5制作细胞凝胶柱步骤中，细胞与histogel的比例关系为每1×108个细胞中...
【专利技术属性】
技术研发人员：周梦佳，刘杨，罗紫薇，
申请(专利权)人：苏州百道医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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