【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种能够以高效率非常特异地抑制双调蛋白表达的双链寡核苷酸，优选包含rna/rna、dna/dna或dna/rna杂合序列的双链寡核苷酸；一种包含所述双链寡核苷酸的双链寡核苷酸结构；一种包含所述双链寡核苷酸结构的纳米颗粒；以及其在预防或治疗纤维化或呼吸系统疾病中的用途。
技术介绍
1、1995年，guo和kemphues报道了，不仅有义rna，而且反义rna也有效抑制秀丽隐杆线虫(c.elegans)中的基因表达，并且从那时起，进行了研究以鉴定其原因。1998年，fire等人首先描述了一种现象，其中注射双链rna(dsrna)通过特异性降解与其对应的mrna而抑制基因表达。这种现象称为rna干扰(rnai)。rnai是一种用于抑制基因表达的过程，可以以简单的方式以低成本展现出独特的抑制基因表达的作用，并且因此这种技术的应用领域变得更加多样。
2、由于这种抑制基因表达的技术可以调节特定基因的表达，因此它可以在mrna水平上去除与癌症、遗传疾病等相关的特定基因，并且可以用作开发用于疾病治疗的治疗剂和验证靶标的重要工具。作为用于抑制靶基因表达的常规技术，已经公开了针对靶基因引入转基因的技术。这些技术包括相对于启动子在反义方向上引入转基因的方法和相对于启动子在反义方向上引入转基因的方法。
3、这种靶向rna的rna疗法是针对靶rna使用寡核苷酸去除感兴趣的基因的功能的方法，并且可以被认为与其中治疗剂(诸如抗体和小分子)主要靶向蛋白质的常规方法不同。用于靶向rna的方法大致分为两种类型：双链rna介导的
4、反义寡核苷酸(在下文中称为“aso”)是一种短的合成dna，其被设计成根据watson-crick碱基配对与靶基因结合，并且可以特异性地抑制基因的特定核苷酸序列的表达。因此，反义寡核苷酸已被用于研究基因的作用以及开发能够在分子水平上治疗疾病(诸如癌症)的治疗剂。这些aso具有能够通过设定各种抑制基因表达的靶标而容易地产生的优点，并且为了抑制癌基因表达和癌细胞生长，已经对aso的使用进行了研究。通过将aso结合到互补的mrna序列以诱导rnase h活性并且去除所述mrna，或者通过干扰用于蛋白质翻译的核糖体复合物的形成和进展来完成通过aso抑制特定基因表达的过程。此外，据报道，aso与基因组dna结合以形成三螺旋结构，从而抑制基因转录。aso具有如上所述的潜力，但为了在临床实践中使用aso，需要提高aso对核酸酶的稳定性，并且将aso有效地递送到靶组织或细胞中，以便特异性地结合靶基因的核苷酸序列。此外，遗传mrna的二级和三级结构是aso特异性结合的重要因素，并且其中mrna二级结构的形成减少的区域对于aso的进入非常有利。因此，在合成aso之前，已经作出努力通过系统地分析其中mrna二级结构的形成减少的区域来不仅在体外而且在体内有效地实现基因特异性抑制。这些aso比sirna(一种rna)更稳定，并且具有易溶于水和生理盐水的优点。迄今为止，联邦药品管理局(fda)已批准了三种aso(jessica,c.,j postdoc res.,4:35-50,2016)。
5、由于发现了rna干扰(在下文中称为“rnai”)的作用，因此已经发现rnai在各种类型的哺乳动物细胞中作用于序列特异性mrna(barik,s.,jmol.med.(2005)83:764-773)。当双链rna的长链被递送到细胞中时，所递送的双链rna被dicer核酸内切酶转化为加工成21至23个碱基对(bp)的小干扰rna(在下文中称为“sirna”)。sirna与rna诱导的沉默复合物(risc)结合，并且通过其中引导(反义)链识别并且降解靶mrna的过程以序列特异性方式抑制靶基因表达。使用sirna抑制基因表达的技术被用于抑制靶细胞中的靶基因表达并且观察由此产生的变化，并且有效地用于鉴定靶细胞中的靶基因的功能的研究。特别地，抑制传染性病毒或癌细胞中的靶基因的功能可以有效地用于开发针对感兴趣的疾病的治疗方法。作为使用实验动物进行体外研究和体内研究的结果，已经报道了通过sirna抑制靶基因表达是可能的。
6、bertrand等人报道，sirna在体外和体内对mrna表达的抑制作用好于针对相同靶基因的反义寡核苷酸(aso)，并且这种作用持续更久。此外，关于作用机理，sirna通过与靶mrna互补结合以序列特异性方式调节靶基因表达。因此，sirna优于常规的基于抗体的药物或化学药物(小分子药物)，因为sirna适用的受试者的范围可以显著扩大(m.a.behlke,molecular therapy.2006 13(4):664-670)。
7、sirna具有优异的作用，并且可以用于各种应用中，但为了将sirna开发为治疗剂，应改善sirna的体内稳定性及其细胞递送效率，使得sirna可以有效递送到细胞(f.y.xie,drug discov.today.2006年1月；11(1-2):67-73)。为了提高体内稳定性并且解决与sirna的非特异性先天免疫刺激相关的问题，已积极尝试通过修饰sirna的一些核苷酸或其骨架以具有核酸酶抗性，或使用病毒载体、脂质体或纳米颗粒来对其进行研究。
8、包含病毒载体(诸如腺病毒或逆转录病毒)的递送系统具有高转染功效，但具有高免疫原性和致癌性。另一方面，含有纳米颗粒的非病毒递送系统具有比病毒递送系统更低的细胞递送效率，但具有优点，包括体内高安全性、靶标特异性递送、rnai寡核苷酸向细胞或组织中的有效摄取和内化、以及低细胞毒性和免疫刺激。因此，非病毒递送系统目前被认为是比病毒递送系统更有前景的递送方法(akhtar s,j clin invest.2007年12月3日；117(12):3623-3632)。
9、在非病毒递送系统中，使用纳米载体的方法是其中使用各种聚合物(诸如脂质体和阳离子聚合物复合物)形成纳米颗粒并且其中将sirna装载到此类纳米颗粒(即，纳米载体)中并且递送到细胞的方法。在使用纳米载体的方法中，常用的方法包括使用聚合物纳米颗粒、聚合物胶束、脂质复合物(lipoplex)等的方法。其中，脂质复合物由阳离子脂质构成，并且功能是与细胞内体的阴离子脂质相互作用以诱导内体的不稳定，从而允许细胞外递送外来体。
10、此外，已知可以通过将化合物等缀合至到sirna的随从(有义)链的末端区域以赋予其改善的药代动力学特征来提高体内sirna的效率(j.soutschek,nature 11；432(7014):173-8,2004)。在这种情况下，sirna的稳定性取决于与sirna的有义(随从)链或反义(指导)链的末端缀合的化学化合物的特性而变化。例如，与聚合物化合物(诸如聚乙二醇(peg))缀合的sirna在阳离子化合物存在下与sirna的阴离子磷酸基团相互作用以形成复合物，从而提供具有提高的sirna稳定性的载体(s.h.kim,j.control.re本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种化合物，其具有结构式(3)或结构式(4)的结构：
2.根据权利要求1所述的化合物，其中S为双调蛋白特异性DNA有义链。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中S为具有选自SEQ ID NO:1-14的序列的DNA有义链，并且AS为具有与所述DNA有义链互补的序列的RNA反义链。
4.根据权利要求2所述的化合物，其中S为具有SEQ ID NO:10、11或12的序列的DNA有义链。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中S为具有SEQ ID NO:12的序列的DNA有义链。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中所述DNA有义链或所述RNA反义链包含化学修饰。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中所述化学修饰选自由如下组成的组：
8.根据权利要求1所述的化合物，其中X和Y表示的所述共价键为不可降解键或可降解键。
9.根据权利要求8所述的化合物，其包含不可降解键，其中所述不可降解键是酰胺键或磷酸酯键。
10.根据权利要求9所述的化合物，其包含可降解键，其中所述可降解键选自下组
11.根据权利要求1所述的化合物，其还包含与A缀合的己糖胺、糖或碳水化合物。
12.根据权利要求1所述的化合物，其还包含与A缀合的N-乙酰半乳糖胺(NAG)。
13.根据权利要求1所述的化合物，其还包含与A缀合的葡萄糖或甘露糖。
14.一种纳米颗粒，其包含根据权利要求1所述的化合物。
15.根据权利要求14所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒包含双链寡核苷酸的混合物，其中每个双链寡核苷酸具有有着唯一序列的DNA有义链。
16.一种药物组合物，其包含根据权利要求1所述的化合物作为活性成分。
17.一种药物组合物，其包含根据权利要求14所述的纳米颗粒作为活性成分。
...【技术特征摘要】
1.一种化合物，其具有结构式(3)或结构式(4)的结构：
2.根据权利要求1所述的化合物，其中s为双调蛋白特异性dna有义链。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中s为具有选自seq id no:1-14的序列的dna有义链，并且as为具有与所述dna有义链互补的序列的rna反义链。
4.根据权利要求2所述的化合物，其中s为具有seq id no:10、11或12的序列的dna有义链。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中s为具有seq id no:12的序列的dna有义链。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中所述dna有义链或所述rna反义链包含化学修饰。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中所述化学修饰选自由如下组成的组：
8.根据权利要求1所述的化合物，其中x和y表示的所述共价键为不可降解键或可降解键。
9.根据权利要求8所述的化合物，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：金泰琳，尹坪伍，高映浩，裵暶姝，朴翰浯，孙承燮，朴俊泓，尹成一，
申请(专利权)人：柏业公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。