【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体是高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法。
技术介绍
1、胶质瘤是中枢神经系统常见的复发率及死亡率极高的原发性恶性肿瘤[1]，临床治疗原则是最大范围安全切除肿瘤，缓解临床症状延长生存期。在较少损伤正常脑组织的前提下，尽可能的清除瘤体和降低复发率已成为恶性脑肿瘤治疗需要解决的难题，亟待开发新的治疗方式。
2、热疗是应用不同的物理手段提高肿瘤组织和(或)全身的温度，利用高温杀伤及其继发效应来治疗肿瘤，已发展为手术、放疗、化疗及生物治疗之后的第5种肿瘤治疗手段[2]。其中微波消融术(mwa)具有侵入性小，可以实现靶向多次操作的优势，已在脑胶质瘤治疗中取得良好的治疗效果。然而，单独应用mwa所发挥的微弱的远隔效应并不足以降低肿瘤的复发率[3]。既往研究发现不同的热疗方式及不同程度热量作用在细胞产生的效果也不同，43℃左右温度(mildhyperthermia,mht)已被证明对肿瘤治疗有效[4]，并且会显著影响肿瘤组织中的需氧糖酵解和肿瘤细胞中核酸和蛋白质的合成[5,6]，增加细胞外泌体的释放[7]。同时，研究发现外泌体携带独特的组织或细胞特异性蛋白质和遗传物质[8]，能够改变肿瘤微环境[9]、影响周围细胞活性[10]。这也为弥补mwa对于微转移灶及残余病灶的治疗不足提供了新思路。
3、然而，胶质瘤细胞在受到热刺激后释放外泌体对周围细胞的直接作用少有研究。mwa在临床抑制胶质瘤的进展和转移中仍是临床治疗的一大挑战[11]，因此，针对以上现状，迫切需要开发高温诱导外泌体发挥远
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，包括以下步骤：
4、步骤1、将胶质瘤细胞置于高温环境中进行刺激，持续一段时间，以促使胶质瘤细胞释放外泌体；
5、步骤2、分离并纯化所述释放的外泌体，得到高温诱导的h-exos；
6、步骤3、将所述h-exos应用于胶质瘤的远隔效应治疗中，以抑制远处肿瘤细胞的生长、迁移和侵袭。
7、作为本专利技术进一步的方案：在步骤1中，所述胶质瘤细胞为大鼠脑胶质瘤细胞c6，将大鼠脑胶质瘤细胞c6在完全生长培养基中培养。
8、作为本专利技术进一步的方案：取1.0×107个所述胶质瘤细胞加入不含血清的培养基中，并置于43℃的恒温箱中持续高温刺激60min。
9、作为本专利技术进一步的方案：在步骤2中，分离并纯化外泌体的操作步骤包括有超速离心、纳米颗粒跟踪分析、电镜观察和蛋白质印迹分析，最终得到h-exos。
10、作为本专利技术进一步的方案：在步骤3中，所述h-exos通过静脉注射、局部注射或其他给药方式应用于胶质瘤的远隔效应治疗中。
11、作为本专利技术进一步的方案：还包括：在高温刺激后评估h-exos对胶质瘤细胞的生物学作用，包括细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的检测。
12、作为本专利技术进一步的方案：还包括：在对胶质瘤进行mwa治疗后，将所述h-exos应用于远隔效应治疗中，以进一步抑制远处肿瘤细胞的生长。
13、作为本专利技术进一步的方案：所述h-exos在mwa治疗后的第3天、14天、21天和28天这四个时间点进行给药治疗。
14、一种用于胶质瘤远隔效应治疗的药物组合物，包含上述所述的h-exos和药学上能够接受的载体。
15、作为本专利技术进一步的方案：所述药物组合物还包含微波消融术的治疗方案。
16、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
17、本申请明确了43℃左右温度(mildhyperthermia,mht)对细胞外泌体所发挥的直接生物效应。通过建立双侧皮下荷瘤鼠模型以模拟临床脑肿瘤弥漫性生长的生物学特性，采用mwa消融一侧肿瘤，随后创新性的联合应用肿瘤细胞mht所产生外泌体(h-exos)，观察联合治疗对远处肿瘤生长的影响，为后续深入探讨热疗联合外泌体作为胶质瘤特别是高级别胶质瘤的治疗策略提供基础支持。
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1.高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，在步骤1中，所述胶质瘤细胞为大鼠脑胶质瘤细胞C6，将大鼠脑胶质瘤细胞C6在完全生长培养基中培养。
3.根据权利要求2所述的高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，取1.0×107个所述胶质瘤细胞加入不含血清的培养基中，并置于43℃的恒温箱中持续高温刺激60min。
4.根据权利要求1所述的高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，在步骤2中，分离并纯化外泌体的操作步骤包括有超速离心、纳米颗粒跟踪分析、电镜观察和蛋白质印迹分析，最终得到H-Exos。
5.根据权利要求1所述的高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，在步骤3中，所述H-Exos通过静脉注射、局部注射或其他给药方式应用于胶质瘤的远隔效应治疗中。
6.根据权利要求1所述的高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其
7.根据权利要求1所述的高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，还包括：在对胶质瘤进行MWA治疗后，将所述H-Exos应用于远隔效应治疗中，以进一步抑制远处肿瘤细胞的生长。
8.根据权利要求7所述的高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，所述H-Exos在MWA治疗后的第3天、14天、21天和28天这四个时间点进行给药治疗。
9.一种用于胶质瘤远隔效应治疗的药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的H-Exos和药学上能够接受的载体。
10.根据权利要求9所述的用于胶质瘤远隔效应治疗的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包含微波消融术的治疗方案。
...【技术特征摘要】
1.高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，在步骤1中，所述胶质瘤细胞为大鼠脑胶质瘤细胞c6，将大鼠脑胶质瘤细胞c6在完全生长培养基中培养。
3.根据权利要求2所述的高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，取1.0×107个所述胶质瘤细胞加入不含血清的培养基中，并置于43℃的恒温箱中持续高温刺激60min。
4.根据权利要求1所述的高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，在步骤2中，分离并纯化外泌体的操作步骤包括有超速离心、纳米颗粒跟踪分析、电镜观察和蛋白质印迹分析，最终得到h-exos。
5.根据权利要求1所述的高温诱导外泌体发挥远隔效应用于胶质瘤联合治疗的方法，其特征在于，在步骤3中，所述h-exos通过静脉注射、局部注射或其他给药方式应用于胶质...
【专利技术属性】
技术研发人员：李睿，陈昱均，辜义鸿，邢英琦，
申请(专利权)人：首都医科大学宣武医院，
类型：发明
国别省市：
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