【技术实现步骤摘要】
本申请属于生物医药，具体涉及一种检测抗体半衰期的方法以及药物体外药代评价筛选方法。
技术介绍
1、抗体分子的转胞吞作用（transcytosis）是一种特殊的细胞内吞和运输过程，它允许抗体分子在细胞间进行跨膜运输，而不会被降解。这一过程在抗体偶联药物（adc）的治疗作用中尤为重要，因为它涉及到药物如何进入细胞内部并发挥药效。
2、已有研究报道fcrn对于免疫球蛋白g（igg）抗体在体内的分布、运输和持续等动态行为中起着关键作用。鉴于抗体的半衰期主要受到fcrn受体的调节；当前通过测定抗体分子与fcrn受体的亲和力，来评价抗体的半衰期（姚江宁, 律.,张迎珺, 抗体成药性筛选流程及评价策略.生物工程学报,2024.40（2）:p.507-516.）。然而此方法有一定的局限性。抗体的理化性质如电荷特性会改变mab的pk行为，有研究表明pi较高的mab的清除速率快于pi较低的mab （igawa ,t .等人 ,2010 ,protein eng des sel 23（5）:385-392；boswell等人）。
3、虽然传统技术中有记载通过采用体外构建mdck-fcrn工程细胞株进一步模拟不同抗体分子转运能力，用于评价不同的抗体转胞吞强弱与在人体临床中代谢相关性，但其测试时，加入待测抗体后孵育时长较长且过程繁琐，不利于药物早期开发大量分子的快速筛选。
技术实现思路
1、基于此，本申请一实施例提供一种检测抗体半衰期的方法以及药物体外药代评价筛选方法。
3、第二次孵育结束后，取所述包含内外腔室培养器皿的外室中的培养液，进行定量检测，测量转抗体由内室转运至外室的量，根据测量的抗体量的数值反应抗体半衰期。
4、所述mdck-fcrn工程细胞株能够同时表达human fcrn基因与beta 2-m基因。
5、在其中一个实施例中，所述human fcrn的基因序列如seq id no.1所示，所述beta2-m的基因序列如seq id no.2所示。
6、在其中一个实施例中，所述mdck-fcrn工程细胞株的接种密度为0.8×105个细胞/孔~2.0×105个细胞/孔。
7、在其中一个实施例中，第一次孵育的条件包括：温度为36.5℃~37.5℃，co2浓度为4.8 v/v%~5 v/v%，时间为22h~24h。
8、在其中一个实施例中，第二次孵育的条件包括：温度为36.5℃~37.5℃，co2浓度为4.8 v/v%~5 v/v%，时间为6h~10h。
9、在其中一个实施例中，所述定量检测包括elisa定量检测。
10、在其中一个实施例中，所述elisa定量检测包括：混合所述包含内外腔室培养器皿的外室中的培养液、检测抗体以及生物素，制备混合液。
11、将所述混合液加入培养器皿中，进行第一次反应，制备第一反应液。
12、将所述第一反应液转移到链霉亲和素预包被的结合器皿上，进行第二次反应，制备第二反应液。
13、混合所述第二反应液与过氧化物酶标记的二抗，进行第三次反应；以及
14、洗去多余的二抗，加入显色剂，测量吸光度。
15、在其中一个实施例中，第一次反应的条件包括：温度为24℃~26℃，转速为140 rpm~160 rpm的条件下摇晃孵育10h~14h。
16、在其中一个实施例中，第二次反应的条件包括：温度为24℃~26℃，转速为140 rpm~160 rpm的条件下摇晃孵育0.8h~1.2h。
17、第三次反应的条件包括：温度为24℃~26℃，转速为140 rpm~160 rpm的条件下摇晃孵育0.8h~1.2h。
18、在其中一个实施例中，所述包含内外腔室的细胞培养器皿包括transwell培养室。
19、在其中一个实施例中，所述transwell培养室为96孔转运板、24孔转运板和6孔转运板中的一种或多种。
20、本申请另一方面提供一种药物体外药代评价筛选方法，其特征在于，包括所述的检测抗体半衰期的方法中的步骤。
21、本申请的一个或多个实施例细节在下面的描述中提出，本申请的其他特征、目的和优点将从说明书及其权利要求书变得明显。
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1.一种检测抗体半衰期的方法，其特征在于，包括：将MDCK-FcRn工程细胞株置于包含内外腔室的培养器皿的内室中进行第一次孵育；加入待测抗体于内室，进行第二次孵育；
2.根据权利要求1所述的检测抗体半衰期的方法，其特征在于，所述Human FcRn的基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述Beta 2-M的基因序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的检测抗体半衰期的方法，其特征在于，所述MDCK-FcRn工程细胞株的接种密度为0.8×105个细胞/孔~2.0×105个细胞/孔。
4.根据权利要求1所述的检测抗体半衰期的方法，其特征在于，
5.根据权利要求1所述的检测抗体半衰期的方法，其特征在于，所述定量检测包括Elisa定量检测。
6.根据权利要求5所述的检测抗体半衰期的方法，其特征在于，所述Elisa定量检测包括：
7.根据权利要求6所述的检测抗体半衰期的方法，其特征在于，
8.根据权利要求7所述的检测抗体半衰期的方法，其特征在于，所述包含内外腔室的细胞培养器皿包括Tran
9.根据权利要求7所述的检测抗体半衰期的方法，其特征在于，所述Transwell培养室为96孔转运板、24孔转运板和6孔转运板中的一种或多种。
10.一种药物体外药代评价筛选方法，其特征在于，包括权利要求1~9中任一项所述的检测抗体半衰期的方法中的步骤。
...【技术特征摘要】
1.一种检测抗体半衰期的方法，其特征在于，包括：将mdck-fcrn工程细胞株置于包含内外腔室的培养器皿的内室中进行第一次孵育；加入待测抗体于内室，进行第二次孵育；
2.根据权利要求1所述的检测抗体半衰期的方法，其特征在于，所述human fcrn的基因序列如seq id no.1所示，所述beta 2-m的基因序列如seq id no.2所示。
3.根据权利要求1所述的检测抗体半衰期的方法，其特征在于，所述mdck-fcrn工程细胞株的接种密度为0.8×105个细胞/孔~2.0×105个细胞/孔。
4.根据权利要求1所述的检测抗体半衰期的方法，其特征在于，
5.根据权利要求1所述的检测抗体...
【专利技术属性】
技术研发人员：周加滔，胡慧敏，王禧妍，简艺雯，张婵，邓最祥，钟山，周祥山，
申请(专利权)人：华润生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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