【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种无乳链球菌荚膜多糖及其纯化方法。
技术介绍
1、无乳链球菌是新生儿感染性疾病的主要致病菌，可导致新生儿肺炎、败血症和脑膜炎，也是导致新生儿死亡的重要因素之一，同时，无乳链球菌还能引起孕妇败血症及皮肤感染，使机体抵抗力下降，成人发生感染性疾病。无乳链球菌的致病力主要与荚膜多糖抗原等有关，目前已有纯化工艺制备无乳链球菌荚膜多糖，用于制备控制无乳链球菌疾病发生的疫苗。
2、现有荚膜多糖纯化技术多为苯酚萃取技术，使用苯酚对粗糖中的蛋白质进行变性沉淀，通过离心去除蛋白，后续使用多步分级乙醇沉淀去除核酸及沉淀精糖，多糖直接冷冻干燥，以此达到纯化及收获荚膜多糖的目的。但是缺点在于：1)人体危害：苯酚是一种有毒的化学物质，对人体和环境有多种潜在的危害，生产使用高浓度苯酚对人体皮肤、眼睛、呼吸系统、中枢神经、肝肾均有影响或损坏，且长期接触存在致癌性和致突变性；2)环境危害：有水生生物毒性，泄漏环境会对土壤及水源造成污染；3)多糖纯化工艺上使用，由于苯酚非完全不溶于水，萃取过程中部分多糖溶于苯酚出现损失，且由于苯酚萃取为多次重复进行，对于蛋白含量较高的型别多糖损失较大，回收率较低；4)容易造成最终产品苯酚残留影响质量；5)使用苯酚提取法进行多糖纯化工艺复杂且耗时较长。
3、公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
1、
2、为了实现上述目的，本专利技术一具体实施例提供的技术方案如下：
3、一种无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，包括以下步骤：
4、s1、前处理：将粗糖溶于缓冲液中，加入脱氧胆酸钠，搅拌混合，再加入了氯化钙，孵育一定时间后离心，取上清液；
5、s2、超滤换液：对s1所得上清液进行超滤换液；
6、s3、层析：采用串联的强阴离子交换层析和弱阴离子交换层析对s2所得溶液进行层析，收集层析液；
7、s4、超滤脱盐：对s3所得层析液进行超滤，浓缩，得多糖浓缩液；
8、s5、多糖沉淀：使用沉淀剂对多糖浓缩液进行沉淀，然后离心，收集沉淀；
9、s6、洗糖冻干：对s5所得沉淀进行洗涤，然后冷冻干燥，得无乳链球菌荚膜多糖。
10、在本专利技术的一个或多个实施例中：步骤s1中，向溶液中加入脱氧胆酸钠至溶液中脱氧胆酸钠质量分数为0.1～1％。
11、在本专利技术的一个或多个实施例中，步骤s1中，向溶液中加入氯化钙溶液至溶液中氯化钙浓度为0.25～1mol/l。
12、在本专利技术的一个或多个实施例中，步骤s2中，使用切向流方式进行超滤，超滤所用超滤膜的截留分子量为10～50kda。
13、在本专利技术的一个或多个实施例中，步骤s3中，强阴离子交换层析介质采用captoadhere，弱阴离子交换层析介质采用capto deae。
14、在本专利技术的一个或多个实施例中，步骤s4中，使用切向流方式进行超滤，超滤所用超滤膜的截留分子量为10～50kda。
15、在本专利技术的一个或多个实施例中，步骤s5中，沉淀剂为氯化钠和乙醇，向多糖浓缩液中添加氯化钠溶液至氯化钠终浓度为0.3～1.0mol/l，添加乙醇至乙醇终浓度为70～80％，搅拌混匀，于2℃～8℃静置12～24h。
16、在本专利技术的一个或多个实施例中，步骤s6中洗涤操作为：
17、s61、将沉淀与无水乙醇以质量比1：(2～10)混合，均质、分散，离心，收集沉淀；
18、s62、将s61沉淀与丙酮以质量比1：(2～10)混合，均质、分散，离心，收集沉淀；再重复此步骤多次；
19、s63、将s62所得沉淀与乙醚以质量比1：(2～10)混合，均质、分散，离心，收集沉淀。
20、在本专利技术的一个或多个实施例中，步骤s6中冷冻干燥操作为：压力为80pa以下，温度为-35～-60℃，时间为12～48h。
21、本专利技术另一具体实施例提供的技术方案如下：
22、一种无乳链球菌荚膜多糖，由上述无乳链球菌荚膜多糖纯化方法制备得到。
23、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
24、(1)本专利技术使用脱氧胆酸钠作为粗糖前处理试剂，由于发酵灭菌工艺可使用脱盐胆酸钠作为杀菌剂，使用脱盐胆酸钠进行前处理没有引入新的杂质，后续可统一去除；
25、(2)本专利技术使用capto adhere复合模式串联capto deae层析作为主要的杂质去除手段，剔除了传统荚膜多糖纯化工艺中苯酚的使用，减少了对环境及人员的危害；同时使用的层析模式为流穿模式，配合脱氧胆酸钠-氯化钙杂质前处理进行载量优化，可以大量的并快速高效的纯化多糖溶液；
26、(3)使用切向流超滤换液并浓缩多糖溶液进行多糖沉淀可以减少乙醇使用量；
27、(4)由于多糖黏性较强，容易因黏性问题造成损失或后续工艺段取用不方便，使用有机溶剂梯度洗糖并配合均质乳化机可以对精糖进行有效脱水并分散均匀，冻干后可以得到均匀、分散、含水量极低的精糖粉末，且后续工艺段取用方便。
28、(5)强阴离子及弱阴离子层析模式组合配合有机溶剂梯度洗糖使得多糖色素去除及内毒素去除效果优异。
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1.一种无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于：步骤S1中，向溶液中加入脱氧胆酸钠至溶液中脱氧胆酸钠质量分数为0.1～1％。
3.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，步骤S1中，向溶液中加入氯化钙溶液至溶液中氯化钙浓度为0.25～1mol/L。
4.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，步骤S2中，使用切向流方式进行超滤，超滤所用超滤膜的截留分子量为10～50kDa。
5.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，步骤S3中，强阴离子交换层析介质采用Capto adhere，弱阴离子交换层析介质采用Capto DEAE。
6.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，步骤S4中，使用切向流方式进行超滤，超滤所用超滤膜的截留分子量为10～50kDa。
7.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，步骤S5中，沉淀剂为氯化钠和乙醇，向多
8.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，步骤S6中洗涤操作为：
9.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，步骤S6中冷冻干燥操作为：压力为80Pa以下，温度为-35～-60℃，时间为12～48h。
10.一种无乳链球菌荚膜多糖，其特征在于，由权利要求1-9任一项所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法制备得到。
...【技术特征摘要】
1.一种无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于：步骤s1中，向溶液中加入脱氧胆酸钠至溶液中脱氧胆酸钠质量分数为0.1～1％。
3.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，步骤s1中，向溶液中加入氯化钙溶液至溶液中氯化钙浓度为0.25～1mol/l。
4.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，步骤s2中，使用切向流方式进行超滤，超滤所用超滤膜的截留分子量为10～50kda。
5.根据权利要求1所述的无乳链球菌荚膜多糖纯化方法，其特征在于，步骤s3中，强阴离子交换层析介质采用capto adhere，弱阴离子交换层析介质采用capto deae。
6.根据权利要求1所述的无乳链...
【专利技术属性】
技术研发人员：慕婷，朱航，刘家辉，贾浩伦，王一晓，张凡，
申请(专利权)人：艾美探索者生命科学研发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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