【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生化测试用的试剂盒，具体涉及一种降低聚乙二醇浓度用量并保持载脂蛋白e检测试剂盒检测效果的技术。
技术介绍
1、载脂蛋白e(apoe)是一种可溶性碱性糖基化分泌蛋白，是体内最重要的脂质转运蛋白，也是对脂质代谢影响最大的载脂蛋白。apoe来源于多种组织器官，可参与脂蛋白的合成，临床上常用于对脂代谢紊乱疾病的风险评估以及心脑血管疾病的辅助诊断。
2、免疫比浊法是载脂蛋白e检测的常见方法，基本原理为：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。
3、然后，在现有的载脂蛋白e的检测试剂盒中，经常会加入聚乙二醇(peg)，加入这种物质的作用主要是更容易使得位点暴露而使得载脂蛋白与试剂盒中的抗体结合；即peg作为一种高分子亲水物质，可以改善抗体与抗原之间的结合效率。文献表明，在elisa中，peg能够屏蔽不必要的非特异性结合，减少背景噪声，从而使目标抗原(如apoe)与特异性抗体的结合更为有效。例如在现有技术，一种载脂蛋白e检测试剂盒的专利号201410429303.5中，加入了聚乙二醇，其浓度为10—40g/l；一种载脂蛋白e检测试剂盒及其制备方法的专利号201210291683.1中，该专利给出了5-10mmol/l聚乙二醇，换算为质量
4、因此，现有检测用的试剂盒中，聚乙二醇加入的量通常较高，其加入量通常为10-100g/l，这样的浓度过大，究其原因是因为没有形成特异性结合，其聚乙二醇是分散性质的，没有特异性地结合附着到溶液中的抗体位置，这样就使得作用效能大大降低，无法提高特异性。另外，关于聚苯乙烯与apoe的结合性在现有技术有相关记载，例如在cn201780062562.0的中国专利技术专利关于载脂蛋白e4的检测方法中提到了关于apoe结合到聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯和玻璃管的说明。
技术实现思路
1、为解决上述技术中存在的问题，本专利技术提供一种通过引入聚苯乙烯从而吸附固定抗体，这样使得聚乙二醇能够特异性与抗体靠近结合，避免了现有的聚乙二醇分散加入到溶液试剂中消耗量大的问题。
2、本专利技术提供的一种专利技术提供一种载脂蛋白e检测试剂盒，其包括：试剂r1和试剂r2；其中试剂r1包括缓冲液、表面活性剂和防腐剂，试剂r1还包括聚乙二醇-聚苯乙烯嵌段聚合物；试剂r2包括缓冲液、表面活性剂和防腐剂，并且试剂r2中还包括apoe抗体；apoe抗体的浓度为20mg/l至50mg/l，聚乙二醇-聚苯乙烯嵌段聚合物的浓度为10mg/l至20mg/l。
3、优选地，聚苯乙烯的分子量为5000至20000，聚乙二醇的分子量为2000至20000。
4、优选地，缓冲液为磷酸缓冲液，缓冲液的浓度为20—30mmo l/l；表面活性剂为吐温20，表面活性剂的浓度为0.05—0.1％质量分数；防腐剂为叠氮钠，防腐剂浓度为0.05％至0.15％质量分数。
5、优选地，聚乙二醇-聚苯乙烯嵌段聚合物为杭州新乔生物或者s i gma-a l dr ich西格玛提供，聚合物材料的pd i小于1.3。
6、本专利技术提供的载脂蛋白e检测试剂盒的使用方法，其包括下面的步骤：
7、步骤1：向待测样品中加入试剂r1混合均匀，待测样品与试剂r1的体积比例为1-10：300，37℃环境下孵育，特定波长下吸光度a1；
8、步骤2：向步骤1的混合液中加入试剂r2混匀，试剂r2与试剂r1按体积比为1：1至6加入，37℃环境下孵育，特定波长下吸光度a2；
9、步骤3:得出吸光度△a，△a＝a2-a1；
10、步骤4：使用校准品在全自动生化分析仪上通过内置曲线拟合模式拟合标准曲线，根据吸光度自动计算出待测样品中载脂蛋白e的含量。
11、本专利技术的有益效果如下：采用聚苯乙烯和聚乙二醇嵌段聚合物加入到检测试剂中，聚苯乙烯与检测用的apoe抗体具有很好的结合依附性质，而聚乙二醇与聚苯乙烯为一体聚合物，这样就使得聚乙二醇与抗原靠近，这样聚乙二醇能够直接作用于抗原和抗体结合的分子构成中，特异性的结合使得整个消耗量降低，并且保证了聚乙二醇固有的作用效果。
12、聚苯乙烯和聚乙二醇嵌段聚合物在r1试剂中，当在检测中把r1试剂和r2试剂混合之后，则聚苯乙烯和聚乙二醇嵌段聚合物就快速和apoe抗体结合，以使得位点暴露，以有利于检测过程。
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1.一种载脂蛋白E检测试剂盒，其特征在于，包括：试剂R1和试剂R2；其中试剂R1包括缓冲液、表面活性剂和防腐剂，试剂R1还包括聚乙二醇-聚苯乙烯嵌段聚合物；试剂R2包括缓冲液、表面活性剂和防腐剂，并且试剂R2中还包括ApoE抗体；ApoE抗体的浓度为20mg/L至50mg/L，聚乙二醇-聚苯乙烯嵌段聚合物的浓度为10mg/L至20mg/L。
2.根据权利要求1所述的载脂蛋白E检测试剂盒，其特征在于，聚苯乙烯的分子量为5000至20000，聚乙二醇的分子量为2000至20000。
3.根据权利要求1所述的载脂蛋白E检测试剂盒，其特征在于，缓冲液为磷酸缓冲液或者HEPES缓冲液，缓冲液的浓度为20—30mmol/L；表面活性剂为吐温20，表面活性剂的浓度为0.05—0.1％质量分数；防腐剂为叠氮钠，防腐剂浓度为0.05％至0.15％质量分数。
4.根据权利要求1所述的载脂蛋白E检测试剂盒，其特征在于，聚乙二醇-聚苯乙烯嵌段聚合物为杭州新乔生物或者Sigma-Aldrich西格玛提供，聚合物材料的PDI小于1.3。
5.根据权利要求1至4
...【技术特征摘要】
1.一种载脂蛋白e检测试剂盒，其特征在于，包括：试剂r1和试剂r2；其中试剂r1包括缓冲液、表面活性剂和防腐剂，试剂r1还包括聚乙二醇-聚苯乙烯嵌段聚合物；试剂r2包括缓冲液、表面活性剂和防腐剂，并且试剂r2中还包括apoe抗体；apoe抗体的浓度为20mg/l至50mg/l，聚乙二醇-聚苯乙烯嵌段聚合物的浓度为10mg/l至20mg/l。
2.根据权利要求1所述的载脂蛋白e检测试剂盒，其特征在于，聚苯乙烯的分子量为5000至20000，聚乙二醇的分子量为2000至20000。
3.根据权利要求1所述的载...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙文勇，孙小梅，
申请(专利权)人：东软威特曼生物科技南京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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