【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测领域，具体涉及具有宽检测范围的aupdnps@go-mwcnts复合材料，还涉及aupdnps@go-mwcnts复合材料的应用。
技术介绍
1、根据who公布的最新统计数据显示，心血管疾病是全球的头号死因——每年死于心血管疾病的人数多于任何其他疾病，因此心血管疾病研究是世界公共卫生需要攻克的重要难题。动脉粥样硬化(as)是以动脉壁硬化及内膜粥样斑块形成为特征的一种疾病，是心脑血管事件的主要原因。近年来，发达国家心脑血管疾病的死亡率逐渐下降，而发展中国家的疾病患病率却呈上升趋势。据报道，发展中国家负担了全球80％的心脑血管疾病。as具有复杂的病理生理机制，因早期临床表现隐蔽而易被忽视，在as引起并发症之前，其进展期可长达十年。因此，早期诊断和动态监测as发生发展过程是减少潜在的临床并发症和心脑血管事件总负担的关键。
2、目前，早期诊断及评估as的方法主要有血清学指标检测、影像学技术及其他技术。由于之前的as的早期诊断方法虽然准确率较高，但也存在一定局限。如影像学技术检测价格昂贵，且常常需要联合其他方法一起诊断。传统血清学检测常收集人血清做elisa实验，检测耗时长、样本需求量大、且需要标记(早期往往采用荧光标记方法等)。不同方法各有其优缺点，临床应综合多种手段实现对as的早期诊断和监测。
3、对于疾病研究，生物标志物是一个特征性的病理或生理过程的生化指标，它具有足够的准确性和再现性，寻找和发现有价值的生物标志物已经成为目前研究的一个重要热点。动脉粥样硬化(as)是一种炎症性反应，而众多研
4、电化学检测方法是一个有用的工具，由于它具有选择性强、容易操作和响应迅速等特点，被广泛用于食品安全控制、环境检测以及医药分析等领域。其中，玻碳电极(gce)被广泛用于生物传感器的开发，玻璃碳电极的优点是导电性好，化学稳定性高，热胀系数小，质地坚硬，气密性好，电势适用范围宽(约从-1～1v，相对于饱和甘汞电极)，可制成圆柱、圆盘等电极形状，用它作基体还可制成汞膜玻碳电极和化学修饰电极等。在电化学实验或电分析化学中得到日益广泛的应用。到目前为止，基于gce电极检测脂蛋白磷脂酶a2的电化学方法还未见报道。所以，开发一个基于gce的生物传感器检测脂蛋白磷脂酶a2的方法是非常有必要的。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的开发一种aupdnps@go-mwcnts增强的基于gce的脂蛋白磷脂酶a2免疫复合材料，以满足as临床早期诊断的需要；通过抗原抗体的特异性结合检测脂蛋白磷脂酶a2；研究结果表明，开发的免疫传感器平台可以有效，准确的检测临床样本中的脂蛋白磷脂酶a2含量，具有一定的应用潜力；本专利技术的目的之二在于提供所述aupdnps@go-mwcnts复合材料在制备电化学免疫传感器中的应用；本专利技术的目的之三在于提供含有所述aupdnps@go-mwcnts复合材料的电化学免疫传感器；本专利技术的目的之四在于提供利用所述电化学免疫传感器检测脂蛋白磷脂酶a2的方法。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、具有宽检测范围的aupdnps@go-mwcnts复合材料，述复合材料由氧化石墨烯和羧基化mwcnts分散于溶液中，在冰水浴中以100khz连续超声反应0.5h后，以20℃，12000rpm离心0.5h后得到go-mwcnts复合物，然后将aupdnps溶液滴加到go-mwcnts薄膜上，待其风干形成aupdnps@go-mwcnts复合材料。
4、本专利技术优选的，所述go-mwcnts复合物是向浓度为2.5mg/ml的氧化石墨烯中加入羧基化多臂碳纳米管至终浓度为2.5mg/ml，在冰水浴中超声反应1h后离心除去上清液，沉淀在-70℃放置12h后，真空干燥得到go-mwcnts复合物。
5、本专利技术优选的，所述aupdnps的制备方法如下：将浓度为20mm的k2pdcl4溶液，h2o，浓度为6.0m的hcl和pluronic f127按体积质量比为0.6ml：3ml：60ul：60.0mg混合，待pluronic f127完全溶解后，在上述溶液中加入与h2o等体积的浓度为0.1m的抗坏血酸溶液，将混合溶液在45℃水浴中超声处理3h，向反应体系中加入你浓度为10mm的haucl4.4h2o溶液，超声1h，得到产物通过乙醇和水的三次洗涤，离心收集得到aupdnps。
6、2、所述aupdnps@go-mwcnts复合材料在制备电化学免疫传感器中的应用。
7、3、含有所述aupdnps@go-mwcnts复合材料的电化学免疫传感器，所述电化学免疫传感器的工作电极先用go-mwcnts复合物在玻碳电极上成膜，在滴加aupdnps溶液风干得到aupdnps@go-mwcnts/gce，再用n,n′-羰基二咪唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺配置的活化液活化复合材料修饰后，电极在1ml含2μg/ml检测抗体的溶液中浸泡过夜，最后用5％脱脂奶粉封闭得到aupdnps@go-mwcnts修饰的免疫传感器。
8、本专利技术优选的，所述检测抗体为脂蛋白磷脂酶a2单克隆抗体。
9、本专利技术优选的，将脂蛋白磷脂酶a2单克隆抗体固定在工作电极的aupdnps@go-mwcnts复合材料上，然后在1ml待测样品中，孵育30min，根据然后5mm[fe(cn)6]3-/4-+0.1mkcl溶液中以50mv.s-1的扫描速率在-0.5至+0.8v的电压范围内扫描cv。
10、本专利技术的有益效果在于：本专利技术成功合成了aupdnps@go-mwcnts复合材料，通过对复合材料的羧基进行活化后可结合一定量脂蛋白磷脂酶a2单克隆抗体。通过这种方法，可以放大免疫反应，实现对脂蛋白磷脂酶a2的高灵敏检测。在优化的条件下，所制备的免疫传感器具有良好的检测脂蛋白磷脂酶a2的性能，线性范围宽(已覆盖临床需求)，检出限低。此外，该免疫传感器还具有良好的稳定性和选择性。并且，可通过该免疫传感器所检测出来的δi的值大小，来初步判断样本中的脂蛋白磷脂酶a2的含量。总的来说，这种方法具有很大的应用潜力，为动脉粥样硬化的生物标志物分析方法和早期疾病诊断的应用构建了一个快速、灵敏的生物传感平台。我们未来的研究将集中在通过测试更多的来自动脉粥样硬化患者的血清标本本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.具有宽检测范围的AuPdNPs@GO-MWCNTs复合材料，其特征在于：所述复合材料由氧化石墨烯和羧基化MWCNTs分散于溶液中，在冰水浴中以100kHZ连续超声反应0.5h后，以20℃，12000rpm离心0.5h后得到GO-MWCNTs复合物，然后将AuPdNPs溶液滴加到GO-MWCNTs薄膜上，待其风干形成AuPdNPs@GO-MWCNTs复合材料。
2.根据权利要求1所述具有宽检测范围的AuPdNPs@GO-MWCNTs复合材料，其特征在于：所述GO-MWCNTs复合物是向浓度为2.5mg/mL的氧化石墨烯中加入羧基化多臂碳纳米管至终浓度为2.5mg/mL，在冰水浴中超声反应1h后离心除去上清液，沉淀在-70℃放置12h后，真空干燥得到GO-MWCNTs复合物。
3.根据权利要求1所述具有宽检测范围的AuPdNPs@GO-MWCNTs复合材料，其特征在于：所述AuPdNPs的制备方法如下：将浓度为20mM的K2PdCl4溶液，H2O，浓度为6.0M的HCl和pluronic F127按体积质量比为0.6ml：3ml：60ul：60.0mg混合
4.权利要求1～3任一项所述AuPdNPs@GO-MWCNTs复合材料在制备电化学免疫传感器中的应用。
5.含有权利要求1～3任一项所述AuPdNPs@GO-MWCNTs复合材料的电化学免疫传感器，其特征在于：所述电化学免疫传感器的工作电极先用GO-MWCNTs复合物在玻碳电极上成膜，在滴加AuPdNPs溶液风干得到AuPdNPs@GO-MWCNTs/GCE，再用N,N′-羰基二咪唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺配置的活化液活化复合材料修饰后，电极在1mL含2ug/mL检测抗体的溶液中浸泡过夜，最后用5％脱脂奶粉封闭得到AuPdNPs@GO-MWCNTs修饰的免疫传感器。
6.根据权利要求5所述的电化学免疫传感器，其特征在于：所述检测抗体为脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体。
7.利用权利要求5或6所述电化学免疫传感器检测脂蛋白磷脂酶A2的方法，其特征在于：将脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体固定在工作电极的AuPdNPs@GO-MWCNTs复合材料上，然后在1mL待测样品中，孵育30min，根据然后5mM[Fe(CN)6]3-/4-+0.1M KCl溶液中以50mV.S-1的扫描速率在-0.5至+0.8V的电压范围内扫描CV。
...【技术特征摘要】
1.具有宽检测范围的aupdnps@go-mwcnts复合材料，其特征在于：所述复合材料由氧化石墨烯和羧基化mwcnts分散于溶液中，在冰水浴中以100khz连续超声反应0.5h后，以20℃，12000rpm离心0.5h后得到go-mwcnts复合物，然后将aupdnps溶液滴加到go-mwcnts薄膜上，待其风干形成aupdnps@go-mwcnts复合材料。
2.根据权利要求1所述具有宽检测范围的aupdnps@go-mwcnts复合材料，其特征在于：所述go-mwcnts复合物是向浓度为2.5mg/ml的氧化石墨烯中加入羧基化多臂碳纳米管至终浓度为2.5mg/ml，在冰水浴中超声反应1h后离心除去上清液，沉淀在-70℃放置12h后，真空干燥得到go-mwcnts复合物。
3.根据权利要求1所述具有宽检测范围的aupdnps@go-mwcnts复合材料，其特征在于：所述aupdnps的制备方法如下：将浓度为20mm的k2pdcl4溶液，h2o，浓度为6.0m的hcl和pluronic f127按体积质量比为0.6ml：3ml：60ul：60.0mg混合，待pluronic f127完全溶解后，在上述溶液中加入与h2o等体积的浓度为0.1m的抗坏血酸溶液，将混合溶液在45℃水浴中超声处理3h，向反应体系中加入你浓度为10mm的haucl...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴胜昔，叶文桥，曾政，董春霞，骆璐，凌洪权，黄恒，陈忠琼，黄奕兰，胡健，黄琳，黄春华，董昌杰，喻鲜，席颢宁，
申请(专利权)人：重庆理工大学，
类型：发明
国别省市：
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