【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫磁珠制备，特别是涉及一种用于分离红细胞的免疫磁微球及其制备方法和应用。
技术介绍
1、在临床检查中的血液样本检查需要按照检测项目的需求将患者血液样本进行血清或者血浆分离来适应检测需求，其主要原因是红细胞存在会干扰免疫学检测方法的抗体捕获抗原，且红细胞破裂导致胞内大量血红蛋白，酶，离子等细胞内容物释放引起强烈干扰，大大降低标本质量和检测的准确性。临床检验中全血分离红细胞获得血清或血浆的方法主要为离心法。离心法操作除了需要离心设备还可能造成血细胞的破裂会降低样本质量且离心时间约为5min(枸橼酸钠抗凝剂全血样本，3000rpm)。对于许多急性病症检测项目如炎症，心肌梗塞等，快速准确地进行血液样本处理和检测，有利于为患者争取治疗时间窗口。
2、随着临床检测技术的发展，免疫学检测逐渐成为临床医生判断病情的手段，其核心在于满足临床治疗或家用监护的快速诊断需求，及时获得准确的检测结果。免疫磁微粒技术通过在磁微粒表面偶联包被抗体进行抗原抗体反应，与抗原表面结合形成免疫复合物，在强磁作用下使抗原-抗体-磁微粒免疫复合物分离，实现细胞筛选或者去除标记的抗原。通过使用免疫磁微粒技术快速分离红细胞获得血浆，应用于免疫学检测，能更好的服务与临床诊断。
3、现有技术为了提高磁微粒与抗体的结合力，均采用的是经化学键修饰的磁微粒，例如：
4、现有技术中，中国专利cn200710305363.6公开了使用包被了凝集素或抗红细胞抗体的磁性微球分离全血中的红细胞的方法，但是分离时间需要10min。
6、中国专利cn202010128026.x公开了使用抗红细胞抗体或凝集素化学偶联直径为1～4μm的免疫磁微粒生产方法，100μl全血样本中红细胞吸附分离时间为1min。但原料太贵，生产复杂。
7、中国专利cn202010490280.4公开了一种用于分离红细胞的免疫磁微粒及其制备方法和应用，该免疫磁微粒的制备方法包括：步骤s1、用活化剂对磁微粒进行活化，所述磁微粒与活化剂的重量比例为1:0.1-5；所述活化的时间为5-30min；步骤s2、将抗红细胞抗体加入步骤s1得到的活化产物中，进行超声处理；步骤s3、将封闭剂加入步骤s2得到的产物中进行封闭，强磁分离，得到用于分离红细胞的免疫磁微粒；所述的磁微粒为包裹有四氧化三铁的聚苯乙烯微球。所述的磁微粒的粒径为1-5μm。该专利使用真空干燥的方式制备冻干免疫磁微粒，500ul全血样本在中红细胞吸附分离时间为2min，但该方法所能分离的全血样本体积受到限制，不能灵活调节，且血细胞的分离时间过长。
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种用于分离红细胞的免疫磁微球，缩短全血样本中红细胞吸附分离时间，提高检测效率，延长试剂保存时间。
2、为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
3、一种用于分离红细胞的免疫磁微球，包括磁微球和抗红细胞抗体，所述磁微粒包被抗红细胞抗体；所述磁微球为未被修饰过的磁性颗粒微球；所述磁性颗粒微球为四氧化三铁、三氧化二铁、氧化亚铁、铁粉或铁钛粉中的任意一种；所述抗红细胞抗体与磁微球的质量比为1:20～400。
4、在其中一个优选的实施例中，所述免疫磁微球的直径不超过1000nm。
5、在其中一个优选的实施例中，所述免疫磁微球的直径为10～1000nm。
6、直径大于1000nm的免疫磁微球，吸附效率不足，处理能力偏弱。
7、而免疫磁微球的粒径过小的话，一方面是市售小于10nm的粒径的产品几乎没有，成本较高，且粒径过小，磁吸时间会变长。
8、在其中一个优选的实施例中，所述抗红细胞抗体与磁微球的质量比为1:20～100。
9、所述抗红细胞抗体与磁微球的质量比过大，单位质量磁微粒上的有效抗体数量变少，处理能力会降低。
10、所述抗红细胞抗体与磁微球的质量比过小，生产的抗体投料量变大，成本会增加较多。
11、本专利技术为了增加磁性，磁微球的添加量远大于现有技术。通过在单位质量磁微球上吸附少量的抗体，实现对红细胞的分离。但由于加入的磁微球的量远大于现有技术中修饰过的磁微球，因此，抗体的实际的总添加量与现有技术相当。但由于磁微球的单位成本仅为修饰后的磁微球的万分之一，因此，本专利技术磁微球的添加不仅大幅降低了成本。且由于修饰过的磁微球表面被大量的化学键修饰，单位质量含有的磁性物质较少，因此，磁性较低。且由于其成本较高，增加数量则引起成本显著增加。而本专利技术的未修饰的磁微球相比较而言，增加了磁性，从而提高了分离速度。
12、常规认为更小粒径的磁微粒，由于分散性更好，在沉降吸附时间更长，如在中国专利202010490280.4中指出，磁微粒粒径大于5μm不利于抗体偶联，磁微粒粒径小于1μm不利于强磁分离。
13、同等质量的磁微球下，磁铁强度越大，分离时间越快。而同强度的磁铁下，磁微粒质量越大，分离时间越短。本专利技术在优化的抗体和磁微球的质量比例下，小粒径的磁微球(≤1μm)由于具有更大的比表面积，具有更多的抗体载量，分散性更好，表现出更优异的吸附红细胞和强磁分离效率。
14、在其中一个优选的实施例中，所述免疫磁微球还包括缓冲液，所述缓冲液中含有1～4wt％牛血清白蛋白。1～4wt％牛血清白蛋白为缓冲液中主要成分，所述免疫磁微球中包括牛血清白蛋白可促进免疫磁微粒冻干微球的溶解。
15、所述免疫磁微球通过液氮冷冻真空干燥制得。本专利技术采用液氮冷冻真空干燥，可控制制得的免疫磁微球的具体质量，便于直接定量添加。每颗免疫磁微球具有固定的质量，可通过控制加入的免疫磁微球的具体数量或者体积，来控制加入的免疫磁微球的质量。本专利技术制备的免疫磁微球，可在高温下储存30天，常温保存2年。
16、本专利技术还要求保护一种用于分离红细胞的免疫磁微球的制备方法，其包括以下步骤：
17、s1、在磁微球中加入缓冲液和抗红细胞抗体搅拌均匀，抗红细胞抗体与磁微粒的质量比为1:20～400；
18、s2、将s1得到的产物进行强磁分离，并加入冷冻的缓冲液，混合均匀后进行液氮冷冻真空干燥，制得免疫磁微球。
19、强磁分离后得到上清液和沉淀，撇去上清液，在沉淀中加入冷冻的缓冲液。
20、液氮冷冻是常规操作，即将液滴滴入液氮(-196℃)中进行急速冷冻，一方面是使液滴快速冷冻，同时也可以快速成型，形成冷冻试剂液滴球。真空冷冻干燥为液氮冷冻之后的操作，其主要目的是升华液氮冷冻试剂液本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于分离红细胞的免疫磁微球，其特征在于，包括磁微球和抗红细胞抗体，所述磁微粒包被抗红细胞抗体；所述磁微球为未被修饰过的磁性颗粒微球；所述磁性颗粒微球为四氧化三铁、三氧化二铁、氧化亚铁、铁粉或铁钛粉中的任意一种；所述抗红细胞抗体与磁微球的质量比为1:20~400。
2.根据权利要求1所述的用于分离红细胞的免疫磁微球，其特征在于，所述免疫磁微球的直径不超过1000nm；优选的，所述免疫磁微球的直径为10~1000nm。
3.根据权利要求1所述的用于分离红细胞的免疫磁微球，其特征在于，所述抗红细胞抗体与磁微球的质量比为1:20~100。
4.根据权利要求1所述的用于分离红细胞的免疫磁微球，其特征在于，所述免疫磁微球还包括1~4 wt%牛血清白蛋白。
5.一种制备权利要求1-4任一项所述的免疫磁微球的方法，其特征在于，其包括以下步骤：
6.一种制备权利要求1-4任一项所述的免疫磁微球的方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.根据权利要求1-4任一项所述的用于分离红细胞的免疫磁微球在分离血浆中的红细胞的应用。p>
8.一种分离血浆中的红细胞的方法，其特征在于，包括：将如权利要求1-4任一项所述的免疫磁微球加入到全血样本中，充分摇匀后静置于强磁板上分离。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述免疫磁微球与全血样本的质量体积比为10mg/500μL以上。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述免疫磁微球与全血样本的质量体积比不小于50mg/500μL。
...【技术特征摘要】
1.一种用于分离红细胞的免疫磁微球，其特征在于，包括磁微球和抗红细胞抗体，所述磁微粒包被抗红细胞抗体；所述磁微球为未被修饰过的磁性颗粒微球；所述磁性颗粒微球为四氧化三铁、三氧化二铁、氧化亚铁、铁粉或铁钛粉中的任意一种；所述抗红细胞抗体与磁微球的质量比为1:20~400。
2.根据权利要求1所述的用于分离红细胞的免疫磁微球，其特征在于，所述免疫磁微球的直径不超过1000nm；优选的，所述免疫磁微球的直径为10~1000nm。
3.根据权利要求1所述的用于分离红细胞的免疫磁微球，其特征在于，所述抗红细胞抗体与磁微球的质量比为1:20~100。
4.根据权利要求1所述的用于分离红细胞的免疫磁微球，其特征在于，所述免疫磁微球还包括1~4 wt%牛血清白蛋白。...
【专利技术属性】
技术研发人员：邬鹏程，程宁，陈立杰，谢凯，
申请(专利权)人：湖南乐准生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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