【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及天然成分提取技术，尤其涉及一种乙酰化金针菇多糖及其制备方法与应用。
技术介绍
1、晚期糖基化末端产物（advanced glycation end products，ages）是美拉德反应的产物之一。在食品加工工业，常通过糖基化反应改善食品的风味、色泽和口感，但食品体系或食品蛋白在糖基化过程中也会形成对人体有害的ages，研究发现，长期摄入富含ages的食物，会导致ages在机体中的积累，ages对人体潜在危害性大，与糖尿病、肾部疾病、动脉粥样硬化、心血管疾病以及阿尔茨海默症（alzheimer disease）等有着密切的关系，添加ages抑制剂降低食品在热加工过程中的形成是提高食品安全，促进人体健康的有效方法之一。ages抑制剂包括合成和天然化合物两类，其中植物来源的天然ages抑制剂因其种类多、效果较好、副作用小等优点已成为国内外的研究热点。焙烤食品加工过程中ages引起食品安全问题，是在加工过程体系中产生的，因此开展焙烤食品加工过程中ages阻断、抑制等控制关键技术，进一步构建焙烤食品安全制造全局控制模式和技术体系具有重要意义。
2、金针菇（flammulina. velutipes）又叫朴菇、冬菇、构菌、金钱菌等，属于伞菌目、口蘑科、金钱菌属。金针菇多糖（flammulina. velutipes polysaccharide, fvp）是金针菇中重要的活性成分之一，刘晓敏等采用响应面法优化了热水提取金针菇多糖的工艺。罗文锋等采用酶解预处理-微波辅助提取金针菇多糖，通过响应面法优化提取工艺。金
3、金针菇多糖能提高自由基清除能力，减少自由基对细胞膜的损害，防止脂质过氧化反应，能通过诱导肝药物代谢酶的活性，使肝脏清除自由基的能力加强，具有显著的抗氧化作用。刘肖肖等研究发现金针菇子实体多糖fvpb1 能激活小鼠t细胞，具有良好的免疫调节作用。meng 等通过将金针菇多糖直接添加到肿瘤细胞培养基中，发现金针菇多糖可以显著降低体外肝癌细胞的有丝分裂指数。苏安祥等研究发现，金针菇蛋白聚糖1-1能够有效抑制脂多糖诱导的人结肠腺癌细胞（caco-2）、巨噬细胞（raw264.7）共培养模型炎症反应。李怡芳等研究发现，金针菇多糖对ccl4诱导的急性肝损伤具有一定的保护作用，能显著降低ccl4致急性肝损伤小鼠血清的alt、ast活性，提高肝匀浆超氧化物歧化酶的活性，降低丙二醛的含量。田雪文等研究发现金针菇多糖具有显著的抗疲劳效果，可有效增加大鼠血液中乳酸脱氢酶的活力，进一步提升大鼠运动后恢复期清除血乳酸的速度。黄琼等采用纸片扩散法研究了金针菇多糖对8种细菌和真菌的抑菌效果，结果发现金针菇多糖对真菌的抑制作用强于对细菌的抑制作用。
4、综上所述，目前对金针菇多糖的研究主要集中在粗多糖的提取、初步纯化及生物活性，但是对金针菇多糖单一组分的纯化、结构修饰及活性评价研究鲜见报道。因此本专利技术研究开发一种金针菇单一多糖组分乙酰化修饰产物及其新的用途，对提高金针菇附加值、开发乙酰化金针菇多糖作为一种新的抗氧化剂及焙烤类食品曲奇生产过程中晚期糖基化末端产物抑制剂具有重要意义。
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术需要解决的技术问题是提供一种乙酰化金针菇多糖，以提高金针菇的附加值，同时也为食品领域提供一种新的食品抗氧化剂及糖基化末端产物抑制剂。
2、本专利技术还要解决的技术问题是提供上述乙酰化金针菇多糖的制备方法。
3、本专利技术还要解决的技术问题是提供上述乙酰化金针菇多糖在食品抗氧化剂领域中的应用。
4、本专利技术最后要解决的技术问题是提供述乙酰化金针菇多糖作为糖基化末端产物抑制剂在焙烤类食品加工中的应用。
5、一种乙酰化金针菇多糖的制备方法，包括下述步骤：
6、（1）粗多糖的提取：将金针菇洗净、干燥并粉碎，按照料液比为1g:50ml-1g:20ml加入水，在40℃-100℃温度下提取40min-120min后离心得上清液；在30℃温度条件下减压浓缩，浓缩后向浓缩液加入五倍体积无水乙醇，在4℃ 条件下静置48h，然后离心，离心条件为5000r/min、20min，后收集得到沉淀，沉淀经过冷冻干燥48h后得到金针菇粗多糖；
7、（2）粗多糖的纯化：将金针菇粗多糖配制成浓度10mg/ml的溶液，加入sevag试剂（正丁醇:三氯甲烷=1:4）脱蛋白5次后通过透析袋透析48h，透析液冷冻干燥得到初步纯化的金针菇纯化多糖；
8、（3）金针菇多糖组分的分离：将纯化多糖配置成浓度5mg/ml的溶液，上样至deae-cellulose 52 离子柱（2.5cm×45cm），依次用去离子水、浓度为0.1mol/l、0.3mol/l、0.6mol/l、0.8mol/l的nacl溶液洗脱，洗脱流速为2ml/min，自动收集洗脱液5ml/管，苯酚-硫酸法检测od490后绘制洗脱曲线，选择性收集峰面积最大的主峰对应的洗脱液，即合并0.6mol/l的nacl溶液所对应的洗脱液，用去离子水对洗脱液透析24h，冷冻干燥得金针菇多糖组分一次纯化物fvp-0.6；
9、称取5g金针菇多糖组分一次纯化物fvp-0.6，溶于200ml去离子水中，上样至sephadex g-200 凝胶柱（1.5 cm×100 cm），用去离子水洗脱，洗脱流速为2ml/min，自动收集洗脱液5ml/管，苯酚-硫酸法检测od490后绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线，得到三个洗脱峰，选择性收集峰面积最大的主峰对应的洗脱液，用去离子水对洗脱液透析24h，冷冻干燥得到金针菇多糖均一单糖组分fvp-0.6-c，即用作进一步乙酰化修饰的多糖底物；
10、所述金针菇中均一单糖组分fvp-0.6-c的分子量为357486da，其单糖组成为摩尔比6.02:1.00:1.09:1.71:3.25的阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖与半乳糖；
11、（4）金针菇多糖均一单糖组分fvp-0.6-c的乙酰化修饰：称量金针菇多糖均一单糖组分fvp-0.6-c 0.3g，加入到15ml蒸馏水中，室温下搅拌溶解；用0.5mol /l naoh溶液调节溶液ph值至9.0后，添加1-6ml的乙酸酐，在50-80℃温度下反应1-5h，待反应完毕后，用5mol/l hcl溶液调ph至7，将反应液置于透析袋中，用去离子水透析24h。透析液经浓缩、醇沉、冷冻干燥，即得乙酰化金针菇多糖ac-fvp-0.6-c，即最终产物，其乙酰化取代度为0.277-0.463。
12、优选的，步骤（1）中，金针菇与水的料液比为1 g:30 ml。
13、优选的，步骤（1）中，在70℃温度下提取80min后离心得上清液。
14、优选的，步骤（2）中，所述的通过透析袋透析，其透析袋的截留分子量为3000da。
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1.一种乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，金针菇与水的料液比为1 g:30 mL。
3.根据权利要求1所述的乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，在70℃温度下提取80min后离心得上清液。
4.根据权利要求1所述的乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述洗脱液透析是采用透析袋透析，所述透析袋的截留分子量为5000Da。
5.根据权利要求1所述的乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述的离子交换柱为DEAE-Cellulose 52 离子交换柱，所述的凝胶色谱柱为Sephadex G-200凝胶色谱柱。
6.根据权利要求1所述的乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，乙酸酐的添加量为3.3mL，反应时间为3.1h，反应温度64.4°C。
7.根据权利要求1所述的乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，乙酰化金针菇多糖的乙酰化取代度为
8.权利要求1~7任一所述乙酰化金针菇多糖制备方法制备得到的乙酰化金针菇多糖。
9.权利要求8所述乙酰化金针菇多糖在食品抗氧化剂领域中的应用。
10.权利要求9所述乙酰化金针菇多糖作为糖基化末端产物抑制剂在焙烤类食品加工中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，金针菇与水的料液比为1 g:30 ml。
3.根据权利要求1所述的乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，在70℃温度下提取80min后离心得上清液。
4.根据权利要求1所述的乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述洗脱液透析是采用透析袋透析，所述透析袋的截留分子量为5000da。
5.根据权利要求1所述的乙酰化金针菇多糖的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述的离子交换柱为deae-cellulose 52 ...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈义勇，徐寒雯，周南南，彭英云，郑茂强，朱东兴，张蒙琪，柏雪，金源，
申请(专利权)人：常熟理工学院，
类型：发明
国别省市：
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