【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药用真菌人工栽培，尤其涉及一种高三萜多糖含量灵芝孢子粉的培育方法。
技术介绍
1、灵芝作为一种具有丰富药用价值的传统中药材，历来被广泛用于增强免疫力、抗肿瘤、抗衰老等多种健康保健领域。其中，灵芝孢子粉因其含有多种生物活性成分而被认为是灵芝的精华部分，尤其是其中的三萜类化合物和多糖成分。三萜类化合物被认为对抗癌、抗炎和抗氧化具有显著作用，多糖则主要被认为具备免疫调节、抗病毒、抗肿瘤等效果。因此，提升灵芝孢子粉中三萜和多糖的含量对于提高其药效具有重要意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种高三萜多糖含量灵芝孢子粉的培育方法，能够提升灵芝孢子粉中三萜和多糖的含量。
2、本专利技术通过以下技术手段解决上述技术问题：
3、本专利技术提供了一种高三萜多糖含量灵芝孢子粉的培育方法，包括以下步骤：
4、s1.在种子液培养基接种灵芝菌种，培养得到种子液；
5、s2.将种子液接种至发酵培养基，培养得到发酵液；
6、s3.发酵液进行振荡-静置循环培养，菌液分离得到菌丝体；
7、s4.将菌丝体接种于栽培种培养基中培养，得到灵芝栽培种；
8、s5.在代料培养基上移植灵芝栽培种，培养得到灵芝；
9、s6.对灵芝进行套网罩，收集灵芝孢子粉。
10、优选的，所述步骤s1的种子液培养基包括以下成分：葡萄糖18-22g/l，酵母粉3-5g/l，磷酸二氢钾1-2g/l，七水硫酸
11、进一步优选的，所述步骤s1的培养条件为温度25-27℃，140-160r/min摇床培养。
12、种子液培养基通过科学配比葡萄糖、酵母粉、磷酸二氢钾、七水硫酸镁和牛磺胆酸钠等成分，为灵芝菌种提供全面的营养支持。这些成分分别作为碳源、氮源、磷源、镁源以及生物活性添加剂，不仅支撑了灵芝菌丝体的快速生长与生物量积累，还促进了其代谢活性，特别是次生代谢产物的合成。显著提升了灵芝菌丝体的生长速率、增强了胞外次生代谢产物（如三萜和多糖）的分泌，并提高了菌体对各种应激条件的耐受性和活性。高质量的种子液制备确保了发酵过程的高效与稳定，同时也为后续的栽培种和代料培养提供了优质的菌种资源，从而有助于实现最终产品中高三萜和多糖含量的目标，极大地优化了整个生产流程。
13、优选的，所述步骤s2的发酵培养基包括以下成分：低聚果糖10-25g/l、改性壳聚糖5-20g/l、蛋白胨5-10g/l、酵母粉0.5-8g/l、磷酸二氢钾0.1-1.0g/l、七水合硫酸镁1-2g/l、维生素b1 0.05-0.1g/l、血红素肽0.01-0.05g/l。
14、进一步优选的，所述步骤s2的培养条件为温度19-23℃、湿度55-65%下恒温避光培养。
15、发酵培养基通过精确配比功能性碳源（如低聚果糖和改性壳聚糖）、氮源（蛋白胨与酵母粉）、无机盐（磷酸二氢钾与七水合硫酸镁）、维生素（维生素b1）以及生物活性因子（血红素肽），为灵芝菌体提供了一个优化的生长环境。这些成分协同作用，不仅支持了菌丝体的能量代谢、蛋白质合成及细胞分裂等基本生理活动，还通过特定的代谢调控机制增强了胞外次生代谢产物（如三萜和多糖）的合成效率。培养基中的特殊成分改性壳聚糖和血红素肽有效增强了菌体对潜在毒性元素的耐受性，并改善了其抗氧化能力，确保了发酵过程的稳定性和高效性
16、优选的，所述改性壳聚糖的制备步骤包括：
17、a1.将壳聚糖溶于质量浓度为0.5%-1.5%的醋酸溶液中，加入环糊精，再加入抗坏血酸，在ph为9-10和55-65℃的条件下搅拌反应5-7小时，洗涤产物，干燥后得到初步改性壳聚糖；
18、a2.初步改性壳聚糖溶解于蒸馏水中制备质量浓度为0.5%-1.5%的溶液，在搅拌下缓慢加入质量浓度为20%-30%的agno3溶液调节溶液ph至6.5-7.0，控制温度22-28℃搅拌反应1-3小时，洗涤，冷冻干燥形成复合物；
19、a3.复合物溶解于pbs中，形成质量浓度为0.5%-1.5%溶液，在搅拌条件下缓慢加入乳铁蛋白溶液，在3-5℃条件下搅拌混合11-13小时，洗涤，冷冻干燥形成所述改性壳聚糖。
20、优选的，所述步骤a1中环糊精和壳聚糖的质量比为5:1，抗坏血酸和壳聚糖的质量比为1:3。
21、改性壳聚糖的制备通过化学改性和复合技术，包括使用环糊精和抗坏血酸进行初步改性以提升其溶解性和稳定性，并生成稳定的抗氧化结构；随后与银离子结合形成壳聚糖-银复合物，利用银离子的抗菌性能增强其在复杂生物环境中的应用效果；最后引入乳铁蛋白，通过氢键和静电作用进一步强化复合物的抗菌能力和微生物亲和性。这一系列步骤不仅提高了壳聚糖的功能性，还特别增强了其抗菌活性及对灵芝菌丝生长的支持能力。
22、优选的，所述步骤s3的振荡-静置循环培养具体为振荡2-3天，静置7-8天，再振荡0.5-1天，静置2-4小时。
23、振荡-静置循环培养是一种结合动态和静态操作的发酵方法，旨在为灵芝菌丝生长提供最优环境。通过振荡阶段增加氧气溶解度和营养物质的均匀分布，促进初期快速生长；而在静置阶段，则提供一个稳定的低扰动环境，有利于菌丝体的定向伸展及胞外多聚物如多糖和三萜类化合物的生成。优化后的循环模式包括前期长时间振荡激活生长、中期较长静置促进代谢产物积累、后期短时间振荡改善氧供，以及最终短暂静置确保菌液分离的操作条件，从而全面支持灵芝菌丝的健康生长和高效代谢。
24、优选的，所述s4步骤的栽培种培养基包括以下重量份的原料：玉米秸秆40-60份、木屑20-30份、菜籽粕5-15份、腐植酸5-8份、蜜环菌发酵液8-10份、葡萄糖5-10份、低聚果糖1-3份、石膏1-3份、硫酸锌0.2-0.5份、硫酸镁0.5-1份、硒化钠0.01-0.02份，培养基含水量60-65%。
25、进一步优选的，所述步骤s4的培养条件为温度19-23℃、湿度55-65%下恒温培养；前期9-11天避光培养，后期光照强度为1000-1500lx。
26、通过使用玉米秸秆与木屑提供碳源及纤维素，菜籽粕供应氮源，配合功能性添加剂如腐植酸和低聚果糖以改善基质结构和促进微生物代谢活性，同时添加硫酸锌、硫酸镁和硒化钠等微量元素来支持代谢酶活化及增强抗氧化能力。此外，适量的葡萄糖作为快速利用的碳源保障初期能量供给，而蜜环菌发酵液的引入不仅帮助分解复杂有机物，还增强了基质微生态环境。
27、优选的，所述s5步骤的代料培养基包括以下重量份的原料：黄芪药渣30-40份、甘草药渣30-40份、麦麸20-24份、石膏1-3份、酵母粉6-8份、磷酸二氢钾0.3-0.6份，培养基含水量60-65%。
28、优选的，所述黄芪药渣和甘草药渣的预处理方法为：选择新鲜的药渣，混合均匀后，堆制发酵并干燥，粉碎，过40-60目筛。
29、进本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高三萜多糖含量灵芝孢子粉的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤S1的种子液培养基包括以下成分：葡萄糖18-22g/L，酵母粉3-5g/L，磷酸二氢钾1-2g/L，七水硫酸镁1-2g/L、牛磺胆酸钠2-3g/L。
3.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤S2的发酵培养基包括以下成分：低聚果糖10-25g/L、改性壳聚糖5-20g/L、蛋白胨5-10g/L、酵母粉0.5-8g/L、磷酸二氢钾0.1-1.0g/L、七水合硫酸镁1-2g/L、维生素B1 0.05-0.1g/L、血红素肽0.01-0.05g/L。
4.根据权利要求3所述的培育方法，其特征在于，所述改性壳聚糖的制备步骤包括：
5.根据权利要求4所述的培育方法，其特征在于，所述步骤A1中环糊精和壳聚糖的质量比为5:1。
6.根据权利要求5所述的培育方法，其特征在于，所述步骤S3的振荡-静置循环培养具体为振荡2-3天，静置7-8天，再振荡0.5-1天，静置2-4小时。
7.根据权利
8.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述S5步骤的代料培养基包括以下重量份的原料：黄芪药渣30-40份、甘草药渣30-40份、麦麸20-24份、石膏1-3份、酵母粉6-8份、磷酸二氢钾0.3-0.6份，培养基含水量60-65%。
9.根据权利要求8所述的培育方法，其特征在于，所述黄芪药渣和甘草药渣的预处理方法为：选择新鲜的药渣，混合均匀后，堆制发酵并干燥，粉碎，过40-60目筛。
10.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述S5步骤还包括喷洒复合诱导剂，复合诱导剂包括醋酸钠、水杨酸和茉莉酸甲酯，混合比例为1:1:1。
...【技术特征摘要】
1.一种高三萜多糖含量灵芝孢子粉的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤s1的种子液培养基包括以下成分：葡萄糖18-22g/l，酵母粉3-5g/l，磷酸二氢钾1-2g/l，七水硫酸镁1-2g/l、牛磺胆酸钠2-3g/l。
3.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤s2的发酵培养基包括以下成分：低聚果糖10-25g/l、改性壳聚糖5-20g/l、蛋白胨5-10g/l、酵母粉0.5-8g/l、磷酸二氢钾0.1-1.0g/l、七水合硫酸镁1-2g/l、维生素b1 0.05-0.1g/l、血红素肽0.01-0.05g/l。
4.根据权利要求3所述的培育方法，其特征在于，所述改性壳聚糖的制备步骤包括：
5.根据权利要求4所述的培育方法，其特征在于，所述步骤a1中环糊精和壳聚糖的质量比为5:1。
6.根据权利要求5所述的培育方法，其特征在于，所述步骤s3的振荡-静置循环培养具体为振荡2-3天，静置7-8天，再振荡0.5-1天...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆国胜，周慧娟，楼永增，陈安平，林荣华，赵虎军，廖琬滢，
申请(专利权)人：浙江尖峰健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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