【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及一种降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体及其制备方法与应用。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、催化抗体是一种不仅能与特定抗原结合，还能催化相应化学反应的抗体。第一个催化抗体是在1989年从支气管哮喘患者的血浆中发现的，随后，在患有各种疾病或健康的个体中发现多个催化抗体。此外，催化抗体可以通过免疫原或过渡态类似物的免疫获得。催化抗体的效果可以通过定向进化或理性设计进一步增强。
3、幽门螺杆菌是唯一一个能在人胃这种强酸环境下生存的细菌，大量研究证实幽门螺杆菌是慢性胃炎，胃溃疡和十二指肠溃疡的主要病因，并与胃癌的发生密切相关。催化抗体的轻链ua15-l能够切割幽门螺杆菌脲酶的肽键，从而抑制幽门螺杆菌的传播。轻链可变区(vl)执行蛋白酶功能，而轻链恒定区(cl)有助于维持溶解度和热稳定性，因此不直接发挥作用。去除轻链恒定区可以将蛋白质大小减少一半，从而有效地增加相同蛋白质质量的药物效力，并为药物递送提供优势。与完整抗体或整个轻链相比，ua15-l的vl(即ua15-vl)表现出相对较差的热稳定性和溶解度，这阻碍了其治疗应用。因此，增强这种催化抗体的热稳定性和溶解度是必要的。
技术实现思路
1、为了克服上述问题，本专利技术提供了一种降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体及其制备方法与应用。
3、本专利技术的第一个方面，提供一种降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体，选自下组中的任意一个或多个位点发生突变：
4、l9e、t14q、i15p、i48c、g64c、l54r；
5、其中，氨基酸残基编号采用seq id no.1(野生型降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体(ua15-l(wt))的氨基酸序列，mgsshhhhhhssglvprgshmdvvmtqtpltlsvtigqpasisckssqsllds dgktylnwllqrpgqspkrliylvskldsgvpdrftgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycwqgthfpqtfgggtkleik)。
6、所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体在上述所示的野生型降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体基础上进行突变，并且所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体选自下组中的突变体：
7、突变体1：l9e-i48c-g64c；(氨基酸序列如seq id no.2所示)；
8、seq id no.2所示氨基酸序列为：
9、mgsshhhhhhssglvprgshmdvvmtqtpetlsvtigqpasisckssqsl ldsdgktylnwllqrpgqspkrlcylvskldsgvpdrftcsgsgtdftlkisr veaedlgvyycwqgthfpqtfgggtkleik。
10、突变体2：l9e-t14q-i15p-i48c-g64c；(氨基酸序列如seq id no.3所示)；
11、seq id no.3所示氨基酸序列为：
12、mgsshhhhhhssglvprgshmdvvmtqtpetlsvqpgqpasisckssqs lldsdgktylnwllqrpgqspkrlcylvskldsgvpdrftcsgsgtdftlkis rveaedlgvyycwqgthfpqtfgggtkleik。
13、突变体3：l9e-i48c-g64c-l54r.(氨基酸序列如seq id no.4所示)；
14、seq id no.4所示氨基酸序列为：
15、mgsshhhhhhssglvprgshmdvvmtqtpetlsvtigqpasisckssqsl ldsdgktylnwllqrpgqspkrlcylvskrdsgvpdrftcsgsgtdftlkisr veaedlgvyycwqgthfpqtfgggtkleik。
16、本专利技术的第二个方面，提供一种多核苷酸，所述多核苷酸编码第一方面所述的降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体。
17、本专利技术的第三个方面，提供一种重组表达载体，所述重组表达载体含有上述第二方面所述的多核苷酸。
18、本专利技术的第四个方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有上述第三方面所述的载体或染色体整合有上述第二方面所述的多核苷酸或表达上述第一方面所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体。
19、本专利技术的第五个方面，提供一种制备上述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体的方法，包括：
20、培养上述第四方面所述的宿主细胞，从而表达出所述的降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体；以及分离纯化获得降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体。
21、本专利技术的第六个方面，提供上述第一方面所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体在制备改善、预防或治疗幽门螺杆菌感染的药物中的应用。
22、本专利技术的第七个方面，提供一种改善、预防或治疗幽门螺杆菌感染的药物，包括第一方面所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体。
23、本专利技术的第八个方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物包括第一方面所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体以及一种或多种药学上可接受的载体。
24、本专利技术的有益效果在于：
25、本专利技术提供及一种降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体及其制备方法与应用，具体的，本专利技术中以野生型降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体为出发抗体，利用生物信息学及蛋白质工程技术进行工程改造，获得降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体，经实验验证，i48c-g64c突变体，第48位和第64位氨基酸发生突变，分别由异亮氨酸和甘氨酸突变为半胱氨酸，在二者之间形成一个二硫键，有助于提高催化抗体的热稳定性，但是该突变显著降低了催化抗体的溶解度和表达量。在此基础上，引入了额外的突变l9e、l54r和t14q-i15p，以增加蛋白质溶解度，并希望恢复蛋白质表达，而不会牺牲热稳定性。与野生型降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体相比，突变体1l9e-i48c-g64c使tm提高了6℃，溶解度提高了81％，表达量提高了4倍。突变体1l9e-i48c-g64c还显示出与野生型在37℃下表现出更好的脲酶片段水解活性。
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1.一种降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体，其特征在于，选自下组中的任意一个或多个位点发生突变：
2.如权利要求1所述的降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体，其特征在于，所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体在上述所示的野生型降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体基础上进行突变，并且所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体选自下组中的突变体：
3.如权利要求2所述的降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体，其特征在于，突变体1～3中第48位和第64位氨基酸发生突变，分别由异亮氨酸和甘氨酸突变为半胱氨酸，且在二者之间形成一个二硫键。
4.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1～3任一项所述的降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体。
5.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有权利要求4所述的多核苷酸。
6.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求5所述的载体或染色体整合有权利要求4所述的多核苷酸或表达权利要求1～3任一项所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体。
7.一种制备上述降解幽门螺杆菌脲酶的催化
8.权利要求1～3任一项所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体在制备改善、预防或治疗幽门螺杆菌感染的药物中的应用。
9.一种改善、预防或治疗幽门螺杆菌感染的药物，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体。
10.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1～3任一项所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体以及一种或多种药学上可接受的载体。
...【技术特征摘要】
1.一种降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体，其特征在于，选自下组中的任意一个或多个位点发生突变：
2.如权利要求1所述的降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体，其特征在于，所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体在上述所示的野生型降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体基础上进行突变，并且所述降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体选自下组中的突变体：
3.如权利要求2所述的降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体，其特征在于，突变体1～3中第48位和第64位氨基酸发生突变，分别由异亮氨酸和甘氨酸突变为半胱氨酸，且在二者之间形成一个二硫键。
4.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1～3任一项所述的降解幽门螺杆菌脲酶的催化抗体突变体。
5.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体...
【专利技术属性】
技术研发人员：姚礼山，崔云航，周栩晨，王业飞，安辽原，宋乡飞，
申请(专利权)人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：
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