【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体是一种hrm检测绵羊tph2基因突变的方法。
技术介绍
1、tph2(tryptophan hydroxylase 2)基因是编码色氨酸羟化酶2的基因。色氨酸羟化酶2是催化合成5-羟色胺(5-ht)的关键酶。在羊中，tph2基因具有重要作用：
2、1.影响行为和情绪：5-羟色胺是一种重要的神经递质，参与调节动物的情绪、行为、食欲、睡眠等生理过程。在羊身上，tph2基因的正常表达对于维持羊的正常情绪状态和行为表现非常重要。
3、2.参与生理调节：5-羟色胺在动物的消化系统、心血管系统等生理过程中也发挥着调节作用。在羊的消化系统中，5-羟色胺可以调节胃肠道的蠕动和分泌，影响羊的消化功能和对营养物质的吸收。在心血管系统中，5-羟色胺可能参与血管的收缩和舒张调节，对羊的血压和血液循环产生影响。
4、3.对繁殖的潜在影响：虽然目前关于羊tph2基因对繁殖的直接影响研究相对较少，但在其他动物中，5-羟色胺系统与生殖功能存在一定的关联。
5、因此，羊的tph2基因可能也会通过影响神经内分泌系统，对羊的繁殖行为、生殖激素的分泌以及生殖器官的功能产生潜在的影响。在tph2基因的第二外显子出现的一个错义突变可能对血清素通路产生一些影响，从而影响到一些表型。研究羊的tph2基因对于深入了解羊的生理机制、行为特点以及健康状况具有重要意义，并且可能为羊的养殖管理、疾病防治以及品种改良等方面提供理论依据。
6、现有的关于基因突变的检测方法有很多。迄今为止较为常见的核酸诊断方
7、sanger测序法：它是一种传统的dna测序技术，原理是在dna复制过程中，通过双脱氧核苷酸终止链的延伸，经过电泳等操作读取dna序列，可用于检测已知和未知突变，准确性高；但通量较低，适合少量样本的关键基因检测。
8、新一代测序技术：包括全基因组测序(wgs)、全外显子组测序(wes)等。能够同时对大量dna片段测序，通量高、速度快，可检测多种类型的突变，在癌症研究、遗传病诊断等广泛应用；但数据解读复杂，成本较高。
9、实时荧光定量pcr：在pcr反应体系中加入荧光染料或探针，通过检测荧光信号实时监测dna扩增情况。能检测特定基因的突变，并且可以对样本中的突变基因进行定量分析，灵敏度高，操作简便，常用于病原体检测和基因表达分析中的突变检测；但只能检测已知序列的基因片段，对于未知序列的突变很难进行检测，且存在一定的假阳性和假阴性情况；
10、数字pc：将样品分配到大量微小的反应单元中进行pcr扩增，通过终点荧光信号判断每个反应单元中是否有目标dna。可以绝对定量检测低丰度的突变基因，在肿瘤液体活检等对痕量突变检测领域很有优势；但因为数据量庞大，导致数据分析复杂，存在微滴/反应单元的质量问题；
11、比较基因组杂交芯片：可以在全基因组水平检测染色体dna的拷贝数变化，通过对比测试样本和对照样本的荧光信号强度来确定基因拷贝数的变异，用于肿瘤细胞染色体异常等检测；但分辨率有限，且只能检测拷贝数变化。无法检测点突变、基因融合等其他类型的突变；
12、snp芯片：主要用于检测单核苷酸多态性(snp)位点的变化，能同时检测大量snp位点，在群体遗传学、疾病关联研究等方面发挥作用；但只能检测出已知的snp位点，且存性问题，数据解答也存在一定的复杂性。
13、以上技术主要的问题集中在“难以大批量检测”、“过程繁琐”、“成本高昂”、“数据解读复杂”上；因此亟需找到一种新的检测方法，能快速筛选绵羊tph2基因的突变。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种hrm检测绵羊tph2基因突变的方法，以解决现有技术中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种hrm检测绵羊tph2基因突变的方法，具体包括以下步骤：
4、步骤1：设计hrm引物对；
5、步骤2：采用试剂盒法提取待检绵羊的血液基因组dna；
6、步骤3：配制hrm检测体系，进行突变位点扫描，得到hrm曲线，判断待检绵羊的基因型。
7、其中，步骤1中hrm引物对包括tph2f1/r1和tph2f2/r1。
8、优选的，所述tph2f1/r1引物对包括上游引物tph2f1，核苷酸序列为aaataaaactaactctggca；下游引物tph2r1，核苷酸序列为tcaaggagaatacaaccg。
9、优选的，所述tph2f2/r1引物对包括上游引物tph2f2，核苷酸序列为ctaaataaaactaactctggca；下游引物tph2r1，核苷酸序列为tcaaggagaatacaaccg。
10、优选的，步骤3中hrm检测体系以血液基因组dna为模版，利用步骤1中的引物对其进行hrm扩增，得到扩增产物，再对扩增产物进行hrm分析。
11、其中，所述hrm扩增的反应进程包括：95℃预变性10min；95℃变性10s，50℃退火10s，72℃延伸10s，共40个循环。
12、所述hrm分析程序包括：95℃变性5min，40℃复性1min形成杂合体；从70℃升温至95℃进行荧光信号收集，每秒钟收集25次信号。
13、优选的，步骤3中对hrm曲线进行分析、比对，确定待检绵羊品种的基因型。
14、优选的，hrm检测体系包括12.5μl rtaq酶、0.5μl tph2f1、0.5μl tph2r1、0.8μllcgreen荧光染料、1μl血液基因组dna和9.7μl ddh2o。
15、优选的，hrm检测体系包括12.5μl rtaq酶、0.5μl tph2f2、0.5μl tph2r1、0.8μllcgreen荧光染料、1μl血液基因组dna和9.7μl ddh2o。
16、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
17、本专利技术提供了一种绵羊tph2基因的突变检测方法，利用该检测方法能快速筛选绵羊tph2基因的突变，从而获得相应的绵羊突变体，加快绵羊品种选育；相较于现有技术，优势在于：
18、1.操作简便。hrm的操作流程相对简单，并且可以在常规的实时定量pcr仪器上进行检测，只要仪器具备hrm分析功能即可；
19、2.成本较低。和一些高通量测序技术或者基因芯片技术相比，hrm不需要昂贵的试剂和耗材。它主要依赖于常规的pcr试剂和荧光染料，不需要使用特殊的探针，在一定程度上降低了检测成本，更适合在预算有限的情况下对已知突变位点进行大规模筛选；
20、3.检测速度快。因为其流程简单，从样本的扩增到获得熔解曲线，整个过程可以在较短时间内完成；
21、4.灵敏度较高。hrm能够检测出低水平的杂合突变，可以发现本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种HRM检测绵羊TPH2基因突变的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种HRM检测绵羊TPH2基因突变的方法，其特征在于，所述步骤1中HRM引物对包括上游引物TPH2F1，核苷酸序列为AAATAAAACTAACTCTGGCA；下游引物TPH2R1，核苷酸序列为TCAAGGAGAATACAACCG。
3.根据权利要求1所述的一种HRM检测绵羊TPH2基因突变的方法，其特征在于，所述步骤1中HRM引物对包括上游引物TPH2F2，核苷酸序列为CTAAATAAAACTAACTCTGGCA；下游引物TPH2R1，核苷酸序列为TCAAGGAGAATACAACCG。
4.根据权利要求1所述的一种HRM检测绵羊TPH2基因突变的方法，其特征在于，所述步骤3中HRM检测体系以血液基因组DNA为模版，利用步骤1中的引物对其进行HRM扩增，得到扩增产物，再对扩增产物进行HRM分析。
5.根据权利要求4所述的一种HRM检测绵羊TPH2基因突变的方法，其特征在于，所述HRM扩增的反应进程包括：95℃预变性10min；95
6.根据权利要求4所述的一种HRM检测绵羊TPH2基因突变的方法，其特征在于，所述HRM分析程序包括：95℃变性5min，40℃复性1min形成杂合体；从70℃升温至95℃进行荧光信号收集，每秒钟收集25次信号。
7.根据权利要求1所述的一种HRM检测绵羊TPH2基因突变的方法，其特征在于，步骤3中对HRM曲线进行分析、比对，确定待检绵羊品种的基因型。
8.根据权利要求2所述的一种HRM检测绵羊TPH2基因突变的方法，其特征在于，HRM检测体系为12.5μL rTaq酶、0.5μL TPH2F1、0.5μL TPH2R1、0.8μL LCgreen荧光染料、1μL血液基因组DNA和9.7μL ddH2O。
9.根据权利要求3所述的一种HRM检测绵羊TPH2基因突变的方法，其特征在于，HRM检测体系为12.5μL rTaq酶、0.5μL TPH2F2、0.5μL TPH2R1、0.8μL LCgreen荧光染料、1μL血液基因组DNA和9.7μL ddH2O。
...【技术特征摘要】
1.一种hrm检测绵羊tph2基因突变的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种hrm检测绵羊tph2基因突变的方法，其特征在于，所述步骤1中hrm引物对包括上游引物tph2f1，核苷酸序列为aaataaaactaactctggca；下游引物tph2r1，核苷酸序列为tcaaggagaatacaaccg。
3.根据权利要求1所述的一种hrm检测绵羊tph2基因突变的方法，其特征在于，所述步骤1中hrm引物对包括上游引物tph2f2，核苷酸序列为ctaaataaaactaactctggca；下游引物tph2r1，核苷酸序列为tcaaggagaatacaaccg。
4.根据权利要求1所述的一种hrm检测绵羊tph2基因突变的方法，其特征在于，所述步骤3中hrm检测体系以血液基因组dna为模版，利用步骤1中的引物对其进行hrm扩增，得到扩增产物，再对扩增产物进行hrm分析。
5.根据权利要求4所述的一种hrm检测绵羊tph2基因突变的方法，其特征在于，所述hrm扩增的反应进程包括：95℃预变性10min；...
【专利技术属性】
技术研发人员：张译元，杨杨，王立民，周平，代蓉，吴玉超，唐红，郭延华，徐梦思，蒙亚琦，
申请(专利权)人：新疆农垦科学院，
类型：发明
国别省市：
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