【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体为共表达禽流感h9基因和禽腺病毒4型fiber-2基因的重组火鸡疱疹病毒、用途和疫苗。
技术介绍
1、过去二十多年间，h9n2亚型禽流感病毒在我国鸡群中广泛流行，目前已经成为家禽中主要流行的流感病毒，不仅严重危害家禽业的发展，而且还严重威胁人类公共卫生安全。心包积液综合征(hhs)是由禽腺病毒血清4型(fadv-4)引起的一种急性高度传染性疾病，在鸡群中流行，造成巨大的经济损失。fadv-4对淋巴组织具有感染嗜性，可导致spf鸡淋巴器官中b细胞和t细胞的减少，在临床中发现禽腺病毒血清4型与h9n2混合感染，对家禽造成严重的免疫抑制，因此亟需研发同时防控禽腺病毒血清4型和h9n2的疫苗。
2、预防禽流感、禽腺病毒的二联疫苗在本领域已经越来越被人所重视，主要分为以下几个类型：
3、1.采用两种单独灭活疫苗组成的二联疫苗，如cn105582533b一种禽流感病毒、禽腺病毒二联灭活疫苗；
4、2.采用表达2个病毒对应的蛋白的亚单位疫苗，如cn110124025a一种禽流感与禽腺病毒4型二联基因工程亚单位疫苗及其制备方法；
5、3.采用病毒重组的方式得到二联疫苗，如cn116970575a一种基于crispr-cas9技术表达h7n9禽流感病毒ha蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其的制备方法。
6、关于第三种方法，本领域技术人员提出了开发出新的病毒抗原基因的载体平台，如cn117357641a表达禽病原体的多种抗原的重组hvt载体及其用途，公开了包含一种或多种
7、其可选的插入位点为：orf ul55的终止密码子和ul与相邻重复区域的连接区域(基因间区域1，ig1基因座，us5，980，906)，ig2(基因间区域2)基因座，ig3(基因间区域3)基因座，ul43基因座，us10基因座，us2基因座，sorf3/us2基因座。
8、该案得到的结论是：该hvt载体，其能够有效表达多个基因并克服众所周知的问题，即具有多个插入物的hvt载体不太稳定。
9、由于抗原种类很多，我们很难预测是否所有的二重抗原在任何位点的组合都是稳定的、可靠的。
10、同时，关于禽腺病毒的fiber-2基因的重组病毒，大多表现在免疫性能上存在一些不足，如cn110484515a一种预防fadv-4和ndv的疫苗载体及其制备方法及应用；fiber 2重组病毒制备的疫苗一次免疫保护力只有50％，要达到较好的免疫效果，需要进行二次免疫。如cn107475296a一种表达鸡4型腺病毒fiber2基因的重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法和应用，其构建的能够表达fiber 2蛋白的重组鸡痘载体疫苗，其od值为0.75，与市售灭活疫苗的抗体水平相似。
11、所以，现有技术中存在的问题在于：基于重组火鸡疱疹病毒(hvt)载体的二重插入位点的选择存在一定的困难、禽腺病毒的fiber-2基因的重组病毒的免疫效果无法达到更为理想的效果，而禽腺病毒的fiber-2基因、h9n2亚型禽流感病毒的h9基因基于hvt载体的二重插入构建重组病毒，更存在明显的不确定性。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一株共表达禽流感h9基因和禽腺病毒4型fiber-2基因的重组火鸡疱疹病毒，该重组火鸡疱疹病毒能稳定的共表达h9n2亚型禽流感病毒h9蛋白和禽腺病毒4型fiber-2蛋白，具有非常优异的免疫性能，其有效的改善了传统禽腺病毒的fiber-2基因的重组病毒的免疫效果，相比于单表达h9n2亚型禽流感病毒h9蛋白和禽腺病毒4型fiber-2蛋白任一一者的重组火鸡疱疹病毒，在性能上并无弱化。
2、同时，本专利技术还提供该重组火鸡疱疹病毒的用途和疫苗。
3、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
4、共表达h9蛋白和fiber-2蛋白的重组火鸡疱疹病毒，于火鸡疱疹病毒的hvt053位点与hvt054位点之间插入含启动子和终止子的h9基因，且于火鸡疱疹病毒的hvt087位点与hvt088位点之间插入含启动子和终止子的fiber-2基因，得到重组病毒；
5、所述h9基因的核苷酸序列如seq id no.1所示；
6、所述fiber-2基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。
7、同时，本专利技术还公开了采用如上所述的重组病毒制备用于预防和治疗h9n2亚型禽流感病毒、禽腺病毒感染的疫苗的用途。
8、在上述的用途中，所述禽腺病毒为禽腺病毒4型。
9、最后，本专利技术还公开了一种疫苗，含有如上所述的重组病毒。
10、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
11、本专利技术的重组火鸡疱疹病毒能稳定的共表达h9n2亚型禽流感病毒h9蛋白和禽腺病毒4型fiber-2蛋白，具有非常优异的免疫性能，其有效的改善了传统禽腺病毒的fiber-2基因的重组病毒的免疫效果，相比于单表达h9n2亚型禽流感病毒h9蛋白和禽腺病毒4型fiber-2蛋白任一一者的重组火鸡疱疹病毒，在性能上并无弱化，符合疫苗候选株要求。
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1.共表达禽流感H9基因和禽腺病毒4型Fiber-2基因的重组火鸡疱疹病毒，其特征在于，于火鸡疱疹病毒的HVT053位点与HVT054位点之间插入含启动子和终止子的H9基因，且于火鸡疱疹病毒的HVT087位点与HVT088位点之间插入含启动子和终止子的Fiber-2基因，得到重组病毒；
2.采用如权利要求1所述的重组病毒制备用于预防和治疗H9N2亚型禽流感病毒、禽腺病毒感染的疫苗的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述禽腺病毒为禽腺病毒4型。
4.一种疫苗，其特征在于，含有如权利要求1所述的重组病毒。
【技术特征摘要】
1.共表达禽流感h9基因和禽腺病毒4型fiber-2基因的重组火鸡疱疹病毒，其特征在于，于火鸡疱疹病毒的hvt053位点与hvt054位点之间插入含启动子和终止子的h9基因，且于火鸡疱疹病毒的hvt087位点与hvt088位点之间插入含启动子和终止子的fiber-2基因，得到重组...
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