【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及组织培养领域。更具体地说，本专利技术涉及一种重瓣萱草根状茎的组织培养方法。
技术介绍
1、萱草是世界三大宿根花卉之一，具有花大优美、花形各异、花色多样、花期长等观赏优点，已成为重要的园林观赏植物。此外，萱草根系发达，具有很强的吸水固土作用，可用于减少水土流失；较强的抗旱、耐高温、抗寒等能力，对土壤的适应性广，可用于坡地和道路绿化；成活力强，可粗放管理、养护简便，省工、省力、成本低，前景广泛。
2、目前，萱草的扩繁方式主要依赖分株繁殖，繁殖速度慢，每株每年仅可繁殖 3～5株。如果需要规模化扩繁，一方面需要一定数量繁育植株和大面积生产土地，另一方面因繁殖系数低，生产周期长，无法满足优良品种的商品化、规模化生产的需求，难以满足市场，进而导致价格居高不下，严重阻碍了其应用与推广速度。尤其是一些重瓣新优品种，比如“奶油卷”重瓣萱草，其花色明亮、花形独特、花型丰满、绿期长、整体观赏性得到提升，但扩繁困难的存在使得种苗数量较少，阻碍了大面积推广应用进程。
3、组织培养是加速育种进程的有效途径，但是，现有的以根状茎为外植体进行萱草组织培养扩繁的报道，均是以“黄花菜”、“大同黄花菜”、“金娃娃”等为主的单瓣萱草品种。重瓣萱草与单瓣萱草在遗传特性、生理结构等方面存在差异，导致重瓣萱草组织培养不能直接借鉴单瓣萱草品种的组织扩繁方法。目前尚未发现重瓣萱草品种以根状茎为外植体进行组培扩繁的报道。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种重瓣萱草根状茎的组织培养方法，
2、为了实现本专利技术的目的和其它优点，提供了一种重瓣萱草根状茎的组织培养方法，包括：步骤一、选取重瓣萱草品种的健壮根状茎作为外植体，将其横切成小段并进行清洗、消毒；步骤二、将消毒后的所述外植体在无菌条件下纵切后迅速转移至含有0.4~0.6mg/l 6 - ba 和0.08~0.12mg/l naa的 ms 溶液中浸泡30分钟，溶液温度控制在 20℃左右，然后再以正置的方式接种至诱导培养基上诱导不定芽，光照培养26～30d，所述诱导培养基包括ms+6-ba 2.0mg/l+naa 0.2mg/l+tdz 0.1mg/l～0.2mg/l；步骤三、将不定芽以单株或者丛生芽的方式，接种于增殖培养基上，光照培养26～30d，所述增殖培养基包括ms+6-ba1.0mg/l+naa 0.1mg/l+tdz 0.001mg/l～0.01mg/l；步骤四、将不定芽分割成单株，接种在生根培养基中诱导生根，光照培养26～30d，所述生根培养基包括1/2ms+naa 0mg/l～0.5mg/l；步骤五、将生根苗炼苗后，从所述生根培养基中取出，移栽至移栽基质中，得重瓣萱草植株。
3、优选的是，所述消毒是将清洗后的所述外植体先经75%酒精消毒10s ~30s后，再用2%次氯酸钠消毒5min~15min。
4、优选的是，所述诱导培养基包括ms+6-ba 2.0mg/l+naa 0.2mg/l+tdz 0.1mg/l+甘氨酸100mg/l+维生素c 50mg/l+肌醇20mg/l。
5、优选的是，所述增殖培养基包括ms+6-ba 1.0mg/l+naa 0.1mg/l+tdz 0.005mg/l+脯氨酸80mg/l+烟酸30mg/l。
6、优选的是，所述生根培养基包括1/2ms+naa 0.3mg/l。
7、优选的是，步骤二中，采用第一光照培养条件进行光照培养，所述第一光照培养条件为：在第1~6d，光强为1000lx，光周期为12小时光照/12小时黑暗，培养温度为22℃，空气相对湿度为70%～80%；在第7~14d，光强为1000lx，光周期为13小时光照/11小时黑暗，在光照的第4~10小时，升温至25℃、其余时间保持培养温度为22℃，空气相对湿度为70%～80%；在第15~21d，光强为1500lx，光周期为14小时光照/10小时黑暗，光照时培养温度为24℃、黑暗时培养温度为20℃，空气相对湿度为60%～70%；在第22~28d，光强为2000lx，光周期为14小时光照/10小时黑暗，光照时培养温度为25℃、黑暗时培养温度为20℃，空气相对湿度为60%～70%。
8、优选的是，步骤三中，采用第二光照培养条件进行光照培养，所述第二光照培养条件为：在第1~6d，光强为2500lx，光周期为16小时光照/8小时黑暗，光照时培养温度为27℃、黑暗时培养温度为22℃，空气相对湿度为60%～70%；在第7~28d，光强为2500lx，光周期为16小时光照/8小时黑暗，光照时培养温度为27℃且在每天光照结束前两小时将温度升至28℃、黑暗时培养温度为22℃，空气相对湿度为60%～70%。
9、优选的是，步骤四中，采用第三光照培养条件进行光照培养，所述第三光照培养条件为：在第1~14d，光强为1500lx，光周期为14小时光照/10小时黑暗，光照时培养温度为24℃、黑暗时培养温度为20℃，空气相对湿度为50%～60%；在第15~28d，光周期为14小时光照/10小时黑暗，在每天光照的前6小时和后6小时，光照强度为1500lx、培养温度为26℃，中间2小时光照强度为1000lx、培养温度为24℃，黑暗时培养温度为20℃，空气相对湿度为50%～60%。
10、优选的是，将消毒后的所述外植体以横切后1/2纵切正置的方式接种至所述诱导培养基中诱导不定芽。
11、优选的是，所述重瓣萱草品种为“奶油卷”、“金黄色”、“肉粉色”中的一种。
12、本专利技术至少包括以下有益效果：
13、第一、本专利技术的方法以重瓣萱草品种的根状茎为外植体，可直接诱导生产不定芽，加快了重瓣萱草繁殖速度；根状茎可以周年取材，打破了季节限制的局限性，随时可以开展规模化的大批量繁殖，易于实现工厂化育苗生产，以尽快满足园林绿化市场的需求。
14、第二、本专利技术在诱导培养阶段和增殖培养阶段均加入了naa和6-ba植物生长调节剂，除此以外，还配合使用了tdz，三者协同作用，有效提高了不定芽诱导率、不定芽数目和增殖系数，非常有利于快速大量的繁殖重瓣萱草组培苗。
15、第三、本专利技术通过将外植体横切消毒后，再在无菌条件下1/2纵切并迅速转移至含有0.4~0.6mg/l 6 - ba 和0.08~0.12mg/l naa的 ms 溶液中浸泡30分钟，溶液温度控制在20℃左右，然后再以正置的方式接种至诱导培养基上诱导不定芽，可有效提高不定芽诱导率和不定芽数目，且不定芽的长势好。
16、第四、本专利技术通过对培养过程中的光照培养条件进行改进，可有效提高不定芽诱导率、不定芽数目、增殖系数、生根率和生根数，且获得的植株涨势好、成活率高。
17、本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
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1.重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，所述消毒是将清洗后的所述外植体先经75%酒精消毒10s ~30s后，再用2%次氯酸钠消毒5min~15min。
3.如权利要求2所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，所述诱导培养基包括MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+TDZ 0.1mg/L+甘氨酸100mg/L+维生素C 50mg/L+肌醇20mg/L。
4.如权利要求3所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，所述增殖培养基包括MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+TDZ 0.005mg/L+脯氨酸80mg/L+烟酸30mg/L。
5.如权利要求4所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，所述生根培养基包括1/2MS+NAA 0.3mg/L。
6.如权利要求5所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，步骤二中，采用第一光照培养条件进行光照培养，所述第一光照培养条件为：在第1~6d，光强
7.如权利要求5所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，步骤三中，采用第二光照培养条件进行光照培养，所述第二光照培养条件为：在第1~6d，光强为2500lx，光周期为16小时光照/8小时黑暗，光照时培养温度为27℃、黑暗时培养温度为22℃，空气相对湿度为60%～70%；在第7~28d，光强为2500lx，光周期为16小时光照/8小时黑暗，光照时培养温度为27℃且在每天光照结束前两小时将温度升至28℃、黑暗时培养温度为22℃，空气相对湿度为60%～70%。
8.如权利要求5所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，步骤四中，采用第三光照培养条件进行光照培养，所述第三光照培养条件为：在第1~14d，光强为1500lx，光周期为14小时光照/10小时黑暗，光照时培养温度为24℃、黑暗时培养温度为20℃，空气相对湿度为50%～60%；在第15~28d，光周期为14小时光照/10小时黑暗，在每天光照的前6小时和后6小时，光照强度为1500lx、培养温度为26℃，中间2小时光照强度为1000lx、培养温度为24℃，黑暗时培养温度为20℃，空气相对湿度为50%～60%。
9.如权利要求1所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，将消毒后的所述外植体以横切后1/2纵切正置的方式接种至所述诱导培养基中诱导不定芽。
10.如权利要求1所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，所述重瓣萱草品种为“奶油卷”、“金黄色”、“肉粉色”中的一种。
...【技术特征摘要】
1.重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，所述消毒是将清洗后的所述外植体先经75%酒精消毒10s ~30s后，再用2%次氯酸钠消毒5min~15min。
3.如权利要求2所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，所述诱导培养基包括ms+6-ba 2.0mg/l+naa 0.2mg/l+tdz 0.1mg/l+甘氨酸100mg/l+维生素c 50mg/l+肌醇20mg/l。
4.如权利要求3所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，所述增殖培养基包括ms+6-ba 1.0mg/l+naa 0.1mg/l+tdz 0.005mg/l+脯氨酸80mg/l+烟酸30mg/l。
5.如权利要求4所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，所述生根培养基包括1/2ms+naa 0.3mg/l。
6.如权利要求5所述的重瓣萱草根状茎的组织培养方法，其特征在于，步骤二中，采用第一光照培养条件进行光照培养，所述第一光照培养条件为：在第1~6d，光强为1000lx，光周期为12小时光照/12小时黑暗，培养温度为22℃，空气相对湿度为70%～80%；在第7~14d，光强为1000lx，光周期为13小时光照/11小时黑暗，在光照的第4~10小时，升温至25℃、其余时间保持培养温度为22℃，空气相对湿度为70%～80%；在第15~21d，光强为1500lx，光周期为14小时光照/10小时黑暗，光照时培养温度为24℃、黑暗时培养温度为20℃，空气相对湿度为60%～70%；在第22~28d，光强为...
【专利技术属性】
技术研发人员：李俊，段连峰，李颖，董燕，艾昕瑶，
申请(专利权)人：北京市园林绿化科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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