本发明专利技术公开了一种L‑丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，包括以下步骤：(1)配制筛选培养基：(2)筛选：采用筛选培养基对L‑丙氨酸发酵菌进行初代培养，得到初代培养L‑丙氨酸发酵菌菌液；将初代培养L‑丙氨酸发酵菌菌液按4‑5％接种量接入新筛选培养基中，进行二代培养，得到二代培养L‑丙氨酸发酵菌菌液；以此重复5‑7次，得到最终五‑七代培养L‑丙氨酸发酵菌菌液；(3)配制驯化培养基；(4)驯化；本发明专利技术筛选驯化后的发酵菌具有一定的耐酸性与耐碱性，能够在一定范围的酸性环境中保持活性并稳定生长发酵，通过较强的pH适应能力，能够有助于发酵菌在发酵过程中保证L‑丙氨酸的产量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于发酵菌，特别是用于一种l-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法。
技术介绍
1、l-丙氨酸是一种有机化合物，分子式为c3h7no2，是无色至白色结晶性粉末，溶于水、乙醇，不溶于乙醚和丙酮。
2、l-丙氨酸主要用于生化研究、组织培养、肝功能测定、增味剂、可增加调味品的调味效果、还可用作酸味矫正剂，改善有机酸的酸味。可以看出l－丙氨酸在食品和医药领域有着十分广泛的应用价值。
3、其中，在食品领域，l－丙氨酸和谷氨酸钠能够进行混合制成调味品，在保证食物原有风格的条件下不改变食品的风味，l－丙氨酸还是甜味剂阿力甜的合成前体。
4、其中，在医药领域，l－丙氨酸不但可作为补糖氨基酸直接用作营养液，更是维生素b5、b6和l－氨基丙醇(氧氟沙星)的合成前体，还可用于制造抗癌药4－羟基水杨醛丙氨酸合锌。
5、l－丙氨酸工业生产方法包括蛋白水解提取法、酶法和微生物发酵法。其中，微生物发酵法以其生产成本低、产品纯度高、对环境污染小等优点获得了更广泛的应用。
6、然而，现有的l-丙氨酸发酵菌的耐酸性较差，导致发酵效率降低，限制了其产量。
7、本专利技术提供一种l-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法以解决相应的问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种l-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，以解决现有技术中的不足。
2、本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种l-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，包括以下步骤：</p>4、(1)配制筛选培养基：
5、(2)筛选：采用筛选培养基对l-丙氨酸发酵菌进行初代培养，得到初代培养l-丙氨酸发酵菌菌液；
6、将初代培养l-丙氨酸发酵菌菌液按4-5％接种量接入新筛选培养基中，进行二代培养，得到二代培养l-丙氨酸发酵菌菌液；
7、以此重复5-7次，得到最终五-七代培养l-丙氨酸发酵菌菌液；
8、(3)配制驯化培养基：对驯化培养基进行调节ph，分别配制ph为7.0驯化培养基、ph为7.2驯化培养基、ph为6.8驯化培养基，按0.2为一格进行ph碱性递增或酸性递减，交替设置，最后为ph为8.0驯化培养基、ph为6.0驯化培养基；
9、(4)驯化：将五-七代培养l-丙氨酸发酵菌菌液按8-10％接种量接入ph为7.0驯化培养基中，120r/min摇瓶培养48h，再以10％接种量接入ph为7.2驯化培养基中，以此类推驯化，驯化完成后，取ph为6.0驯化培养基中培养液进行平板划线分离，选取长势良好的菌株作为优势菌株，进行保存。
10、作为进一步的技术方案：所述筛选培养基包括：磷酸氢二钠4g/l，磷酸二氢钾3g/l，氯化钠0.15g/l，葡萄糖4.5g/l，甘油1.2g/l，水解液10g/l，初步添加剂0.5-0.8g/l，其余为水；
11、所述水解液制备方法为：
12、首先，将稀硫酸与玉米芯进行混合到一起，在150℃温度下，氮气气氛保护下，进行保温搅拌反应40min，然后进行出料，得到一次水解物；
13、其中，稀硫酸、玉米芯混合比例为100ml：5.5g，搅拌转速为300r/min；
14、将麸皮、盐酸溶液进行混合到一起，在120℃温度下，氮气气氛保护下，进行保温搅拌反应20min，然后再转入高压反应釜内，以0.001mpa/10s的速率调节反应釜内压力至0.05mpa，保压40min，再继续以0.02mpa/10s的速率调节压力至0.35mpa，继续保压1小时，然后泄压，出料，得到二次水解物；
15、其中，麸皮、盐酸溶液混合比例为12g：110ml，搅拌转速为550r/min；
16、盐酸溶液浓度为3.5mo l/l；
17、将一次水解物与二次水解物按1:3体积比进行混合到一起，再调节体系ph至中性，浓缩至原体积的10％，经过灭菌，得到；
18、其中，灭菌采用121℃蒸汽灭菌15min。
19、作为进一步的技术方案：所述初步添加剂为番石榴皮复合提取物。
20、作为进一步的技术方案：所述番石榴皮复合提取物制备方法为：
21、首先，将番石榴皮进行清洗干净，沥干水分；
22、将溪黄草进行清洗干净，沥干水分；
23、将番石榴皮与溪黄草进行混合，然后粉碎，得到混合料；
24、将所得到的混合料进行粉碎处理10min，得到粉碎料，再对粉碎料进行脱脂处理，得到脱脂料；
25、将所得到的脱脂料与水按10-12g：200ml的比例混合，进行打浆，得到混合浆液；
26、打浆转速为5500r/min；
27、向混合浆液中添加纤维素酶，进行酶解处理，再经过高温灭酶，得到酶解浆液；
28、其中，纤维素酶添加量为3-4wt％，酶解处理温度为38℃，高温灭酶温度为100℃，1min；
29、向酶解浆液中添加其质量3倍的乙醇溶液，以500r/min转速进行搅拌2小时，然后再进行超声波处理15min，经过高速离心10min，过滤，得到滤渣与滤液，对滤渣进行重复处理3次，合并滤液后，进行喷雾干燥，得到番石榴皮复合提取物。
30、作为进一步的技术方案：所述番石榴皮与溪黄草混合质量比为10:1-2；
31、所述脱脂处理为：
32、取粉碎料，加入到石油醚中，进行搅拌40min，然后再静置50min，再经过2500r/min转速离心，过滤，干燥，得到脱脂料；
33、其中，粉碎料、石油醚混合比例为3g：80ml；
34、干燥温度为75℃，时间为2小时。
35、作为进一步的技术方案：其中，超声波频率为40khz，高速离心转速为8000r/min。
36、作为进一步的技术方案：所述筛选培养基培养条件为：
37、培养条件为37℃，溶解氧为3.5mg/l，ph为7.0，培养时间为4天，每一代均固定采用此培养条件进行培养。
38、作为进一步的技术方案：所述驯化培养基包括：磷酸氢二钠3.5g/l，磷酸二氢钾2.8g/l，氯化钠0.2g/l，葡萄糖4.5g/l，甘油1.0g/l，水解液8g/l，山梨醇0.3g/l，复合添加剂1-1.2g/l，其余为水；
39、调节ph分别采用质量浓度10％氨水与质量浓度10％的乙酸溶液。
40、作为进一步的技术方案：所述复合添加剂为番石榴皮复合提取物与d-丙氨酸混合而成；
41、其中，番石榴皮复合提取物与d-丙氨酸混合质量比为2:1。
42、作为进一步的技术方案：所述驯化时条件为：
43、培养条件为37℃，溶解氧为4.0mg/l。
44、有益效果：
45、本专利技术筛选驯化后的发酵菌具有一定的耐酸性与耐碱性，能够在一定范围的酸性环境中保持活性并稳定生长发酵，通过较强的ph适应本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种L-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种L-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述筛选培养基包括：磷酸氢二钠4g/L，磷酸二氢钾3g/L，氯化钠0.15g/L，葡萄糖4.5g/L，甘油1.2g/L，水解液10g/L，初步添加剂0.5-0.8g/L，其余为水；
3.根据权利要求2所述的一种L-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述初步添加剂为番石榴皮复合提取物。
4.根据权利要求3所述的一种L-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述番石榴皮复合提取物制备方法为：
5.根据权利要求4所述的一种L-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述番石榴皮与溪黄草混合质量比为10:1-2；
6.根据权利要求4所述的一种L-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：其中，超声波频率为40kHz，高速离心转速为8000r/min。
7.根据权利要求1所述的一种L-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述筛选培养基培养条件为：
>8.根据权利要求1所述的一种L-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述驯化培养基包括：磷酸氢二钠3.5g/L，磷酸二氢钾2.8g/L，氯化钠0.2g/L，葡萄糖4.5g/L，甘油1.0g/L，水解液8g/L，山梨醇0.3g/L，复合添加剂1-1.2g/L，其余为水；9.根据权利要求8所述的一种L-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述复合添加剂为番石榴皮复合提取物与D-丙氨酸混合而成；
10.根据权利要求8所述的一种L-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述驯化时条件为：
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【技术特征摘要】
1.一种l-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种l-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述筛选培养基包括：磷酸氢二钠4g/l，磷酸二氢钾3g/l，氯化钠0.15g/l，葡萄糖4.5g/l，甘油1.2g/l，水解液10g/l，初步添加剂0.5-0.8g/l，其余为水；
3.根据权利要求2所述的一种l-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述初步添加剂为番石榴皮复合提取物。
4.根据权利要求3所述的一种l-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述番石榴皮复合提取物制备方法为：
5.根据权利要求4所述的一种l-丙氨酸发酵菌种的筛选驯化方法，其特征在于：所述番石榴皮与溪黄草混合质量比为10:1-2；
6.根据权利要求4所述的一种l-...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐善文，韩帅，赵立军，
申请(专利权)人：黑龙江红菌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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