【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及类器官构建，尤其涉及一种用于药物筛选的滑膜类器官模型及制备方法。
技术介绍
1、近年来随着体外建模领域研究的不断深入，发现细胞试验存在着细胞单一、难以模拟机体复杂的组织结构和正常生理、病理状态等缺点，以及动物试验的昂贵费用和相关生理伦理等问题，类器官逐渐成为科学家们关注的热点。类器官来源于机体自身组织及干细胞，是通过体外3d培养形成的具有原始组织及器官的三维结构细胞团块，在组织结构、细胞类型和功能等方面与来源组织高度一致。
2、类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,ra)的主要病理特征包括成纤维细胞异常增生、炎症因子过度分泌及新生血管的大量生成等，最终引起软骨破坏和骨侵蚀。由于目前无法彻底治愈ra，大部分患者需长期依赖药物缓解症状，然而现阶段药物存在副作用大且无效率高的问题。因此，在ra治疗对中高效低毒药物的开发与探索仍然是研究热点，但目前ra模型(普通单层细胞培养和动物模型)已不满足药物高通量筛选的快速发展。近年来，类器官模型已逐步应用于药物筛选，这为构建ra治疗药物的筛选平台提供新的参考。
3、但目前类器官构建存在一定的缺陷，例如传统构建滑膜类器官方法采用二维(2d)平面培养缺乏细胞与基质相互作用，在培养过程中容易导致形态变化和基因表达缺失；以往的3d培养主要是通过铺垫基质成分后加入细胞的方法，两步法导致基质无法包裹细胞，存在细胞分布不均匀的情况。此外，通过分离ra患者病理滑膜组织构建体外类器官进行药物筛选的方法需要考虑样本数量以及伦理问题。
4、由此可见，能
技术实现思路
1、本专利技术一种用于药物筛选的滑膜类器官模型及制备方法，采用细胞共培养的方式，首次利用细菌纤维素在体外构建类风湿3d滑膜类器官，可用于类风湿药物的筛选，具有很大的应用价值，此种构建类器官的方法也为其他炎症及血管类器官的构建提供了新的思路和途径。
2、本专利技术提供的一种用于药物筛选的滑膜类器官模型的制备方法，包括以下步骤：取人外周血单核细胞诱导成m1型巨噬细胞，取滑膜细胞、人脐静脉内皮细胞和所述m1型巨噬细胞分别经胰酶消化处理后，加入培养基中重悬，取细胞悬液滴加到灭菌后的细菌纤维素中，经培养待细胞自组装得到滑膜类器官模型。
3、进一步优选的，所述m1型巨噬细胞的诱导方法包括以下步骤：取悬浮人外周血单核细胞加入佛多波酯，将所述人外周血单核细胞诱导为巨噬细胞，取所述巨噬细胞加入脂多糖和佛多波酯，将所述巨噬细胞诱导为m1型巨噬细胞。
4、进一步优选的，取悬浮人外周血单核细胞加入100ng/ml佛多波酯，诱导24h，将所述人外周血单核细胞诱导为巨噬细胞。
5、进一步优选的，取所述巨噬细胞加入100ng/ml脂多糖和100ng/ml佛多波酯，诱导17h，将所述巨噬细胞诱导为m1型巨噬细胞。
6、进一步优选的，经胰酶处理后加入培养基中的所述滑膜细胞、人脐静脉内皮细胞和所述m1型巨噬细胞数量比为3：1：1。
7、进一步优选的，所述培养条件如下：取细胞悬液滴加到灭菌后的细菌纤维素，于37℃、5％浓度的co2条件下培养30min后继续补充培养基，待细胞自组装得到滑膜类器官模型。
8、一种滑膜类器官模型，由上述制备方法制备得到。
9、一种上述滑膜类器官模型在筛选治疗类风湿关节炎药物中的应用。
10、本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
11、本专利技术提供的一种用于药物筛选的滑膜类器官模型及制备方法，采用细胞共培养的方式，首次利用细菌纤维素在体外构建类风湿3d滑膜类器官。经过生物学评价，3d滑膜类器官的炎症因子分泌、血管生成、细胞迁移侵袭以及增殖能力等均显著提高，优于对照组(单一ra-fls)以及2d平面共培养形成的滑膜类器官，与类风湿病人体内滑膜组织的病理情况更为接近，更为重要的是，该种构建类器官的方法摒弃了传统的添加外源生长因子的方式，其制备方法更为经济、高效。该类器官可用于类风湿药物的筛选，具有很大的应用价值，此种构建类器官的方法也为其他炎症及血管类器官的构建提供了新的思路和途径。
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1.一种用于药物筛选的滑膜类器官模型的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：取人外周血单核细胞诱导成M1型巨噬细胞，取滑膜细胞、人脐静脉内皮细胞和所述M1型巨噬细胞分别经胰酶消化处理后，加入培养基中重悬，取细胞悬液滴加到灭菌后的细菌纤维素中，经培养待细胞自组装得到滑膜类器官模型。
2.根据权利要求1所述的用于药物筛选的滑膜类器官模型的制备方法，其特征在于：所述M1型巨噬细胞的诱导方法包括以下步骤：取悬浮人外周血单核细胞加入佛多波酯，将所述人外周血单核细胞诱导为巨噬细胞，取所述巨噬细胞加入脂多糖和佛多波酯，将所述巨噬细胞诱导为M1型巨噬细胞。
3.根据权利要求2所述的用于药物筛选的滑膜类器官模型的制备方法，其特征在于：取悬浮人外周血单核细胞加入100ng/ml佛多波酯，诱导24h，将所述人外周血单核细胞诱导为巨噬细胞。
4.根据权利要求2所述的用于药物筛选的滑膜类器官模型的制备方法，其特征在于：取所述巨噬细胞加入100ng/ml脂多糖和100ng/ml佛多波酯，诱导17h，将所述巨噬细胞诱导为M1型巨噬细胞。
5.根据权利要求1所述的用
6.根据权利要求1所述的用于药物筛选的滑膜类器官模型的制备方法，其特征在于：所述培养条件如下：于37℃、5％浓度的CO2条件下培养30min后继续补充培养基，待细胞自组装得到滑膜类器官模型。
7.一种滑膜类器官模型，其特征在于：由权利要求1～6任一项所述的制备方法制备得到。
8.一种权利要求7所述的滑膜类器官模型在筛选治疗类风湿关节炎药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于药物筛选的滑膜类器官模型的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：取人外周血单核细胞诱导成m1型巨噬细胞，取滑膜细胞、人脐静脉内皮细胞和所述m1型巨噬细胞分别经胰酶消化处理后，加入培养基中重悬，取细胞悬液滴加到灭菌后的细菌纤维素中，经培养待细胞自组装得到滑膜类器官模型。
2.根据权利要求1所述的用于药物筛选的滑膜类器官模型的制备方法，其特征在于：所述m1型巨噬细胞的诱导方法包括以下步骤：取悬浮人外周血单核细胞加入佛多波酯，将所述人外周血单核细胞诱导为巨噬细胞，取所述巨噬细胞加入脂多糖和佛多波酯，将所述巨噬细胞诱导为m1型巨噬细胞。
3.根据权利要求2所述的用于药物筛选的滑膜类器官模型的制备方法，其特征在于：取悬浮人外周血单核细胞加入100ng/ml佛多波酯，诱导24h，将所述人外周血单核细胞诱导为巨噬细胞。
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【专利技术属性】
技术研发人员：王庆文，王小成，陈健，林献，何嘉欣，
申请(专利权)人：北京大学深圳医院北京大学深圳临床医学院，
类型：发明
国别省市：
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