【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于蛋白冻干制备，具体涉及一种重组人tgf-β1蛋白冻干制剂及其制备方法。
技术介绍
1、转化生长因子-β1(tgf-β1)是一种多功能的细胞因子，在生物体内发挥着至关重要的作用。tgf-β1是一种二聚体蛋白，由两条相同的多肽链通过二硫键连接而成，每条多肽链含有112个氨基酸，分子量约为25kda。其三维结构呈现出一种独特的“手状”结构，包括一个n端的“手指”结构域和一个c端的“手掌”结构域，这种结构对于其与受体的结合和信号传导至关重要。重组人tgf-β1蛋白是一种通过基因工程技术合成的具有重要生物学功能的蛋白质。重组人tgf-β1蛋白具有多种生物学功能，包括细胞生长与分化调节、细胞外基质合成与调节、免疫调节功能等。
2、由于tgf-β在多种疾病的发生、发展过程中起着关键作用，因此，其已成为许多疾病治疗的潜在靶点。例如，在组织纤维化疾病中，通过抑制tgf-β1的信号传导或活性，可以减少细胞外基质的合成和沉积，从而延缓疾病的进展；在肿瘤治疗中，针对tgf-β1信号通路的药物研发也正在进行中，有望为肿瘤的治疗提供新的策略和方法。在组织工程和再生医学领域，tgf-β1可以作为一种重要的生物活性因子，用于促进组织的修复和再生。例如，将tgf-β1与生物材料复合后，可以制成具有诱导组织再生功能的支架材料，用于治疗骨缺损、软骨损伤、皮肤创伤等疾病。
3、在基础医学研究中，重组人tgf-β1蛋白冻干制剂可以作为一种稳定、可靠的研究工具，用于深入研究tgf-β1的生物学功能、作用机制、信号通路等。其稳定的活性和
技术实现思路
1、为了弥补现有技术中存在的上述技术空白，本专利技术的目的在于提供一种重组人tgf-β1蛋白冻干制剂及其制备方法和应用。
2、本专利技术采用如下技术方案实现上述专利技术目的：
3、本专利技术的第一方面提供了一种重组人tgf-β1蛋白冻干制剂。
4、进一步，所述重组人tgf-β1蛋白冻干制剂由重组人tgf-β1蛋白原液、原液缓冲液、甘露醇、海藻糖组成；
5、所述原液缓冲液由naac、nacl、冰醋酸组成。
6、进一步，所述原液缓冲液中各组分的含量分别为：10-30mm naac、100-200mmnacl、0.5-1.5％冰醋酸、ph(2.5-4)；
7、可选地，所述原液缓冲液中各组分的含量分别为：20mm naac、150mm nacl、1％冰醋酸、ph 3.3；
8、可选地，所述甘露醇、海藻糖的含量分别为：3-9％甘露醇、2-8％海藻糖；
9、可选地，所述甘露醇、海藻糖的含量分别为：6％甘露醇、5％海藻糖。
10、进一步，所述重组人tgf-β1蛋白原液的浓度为0.1-0.9mg/ml；
11、可选地，所述重组人tgf-β1蛋白原液的浓度为0.5mg/ml。
12、进一步，所述重组人tgf-β1蛋白原液采用如下方法制备得到：
13、(1)将hek293无血清基础培养基和无菌质粒dna以25ml：1mg的比例混合，所述无菌质粒dna表达的氨基酸序列如seq id no:1所示；
14、(2)将步骤(1)中的混合溶液添加到预混装的转染溶液中，所述预混装的转染溶液的组分为hek293无血清基础培养基和ta-293转染试剂，所述hek293无血清基础培养基和ta-293转染试剂的比例为25ml：5ml，得质粒-载体复合物；
15、(3)质粒-载体复合物室温静置10min；
16、(4)取转染备用的细胞，边摇边加入制备好的质粒-载体复合物完成转染，将转染后的细胞放回细胞培养恒温摇床中震荡培养，以当天为day0；
17、(5)转染day1加入初始体积0.6％ ke-293，和5％补料培养基；
18、(6)转染day3加入初始体积5％补料培养基；
19、(7)day5时10000rpm离心10min，收获细胞料液；
20、(8)步骤(7)中细胞料液通过ni纯化步骤，具体使用5ml ni-nta purose6fastflow，以4％、10％、50％的比例进行平衡-上样-平衡-洗脱过程，平衡液组分为50mm tris0.1m nacl ph 8.0，洗脱液组分为50mm tris 0.1m nacl 0.5m咪唑ph 8.0；
21、(9)步骤(8)的产物进一步进行阳离子层析精纯，具体使用5ml sp sepharosetmfast flow，用注射水调节至cond：4.8ms/cm，用6m hcl调节至ph 4.5，进行平衡-上样-平衡-阶梯洗脱的过程，其中，平衡液组分为20mm naac，150mm nacl，20mm醋酸铵，0.5m尿素1％冰醋酸，ph 4.5；洗脱液组分为20mm naac，1m nacl，0.5m尿素，1％冰醋酸，ph 4.5，得到纯化的高活性重组人tgf-β1蛋白即为重组人tgf-β1蛋白原液。
22、进一步，所述重组人tgf-β1蛋白原液经3kd超滤管换液处理。
23、在本专利技术中，所述naac是指乙酸钠，又称醋酸钠，是一种有机物，分子式为ch3coona，分子量为82.03。三水合物乙酸钠为白色结晶体，相对密度为1.45，熔点为58℃，在干燥空气中风化，在120℃时失去结晶水，温度再高时分解；无水乙酸钠为无色透明结晶体，熔点为324℃。易溶于水，可用于作缓冲剂，媒染剂。
24、在一些实施方案中，tgf-β1蛋白在溶液中容易受到多种因素影响而变性或降解，如温度变化、ph值波动、蛋白酶作用等。冻干制剂可使蛋白处于干燥、低温的稳定状态，减少这些因素对其结构和活性的破坏，从而延长tgf-β1蛋白的保存期限。
25、在一些实施方案中，所述重组人tgf-β1蛋白冻干制剂为固体粉末状，体积小、重量轻，且对储存和运输条件的要求相对较低，无需像液体剂型那样严格控制温度和避免震动，更便于在不同环境下进行长期储存和远距离运输，有利于产品的市场推广和临床应用的及时性。
26、在一些实施方案中，在临床治疗过程中，不同患者、不同疾病阶段对tgf-β1蛋白的需求量可能不同。冻干制剂可以根据具体情况准确地复溶和调配药物的浓度和剂量，实现精准给药，提高治疗效果，同时降低因剂量不准确而导致的副作用或治疗不足的风险。
27、在一些实施方案中，冻干制剂的物理化学性质稳定，易于制成多种剂型，如注射用粉剂、喷雾剂、植入剂等，从而为探索多种给药途径提供了可能，可满足不同疾病的治疗需求和患者的个体差异。例如，对于局部病变可采用局部注射或植入给药，对于肺部疾病可尝试吸入给药等，提高药物的临床适用性和可及性。
28、在一些实施方案中，包含本专利技术如前所述冻干制剂的药物组合物或生物本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组人TGF-β1蛋白冻干制剂，其特征在于，所述重组人TGF-β1蛋白冻干制剂由重组人TGF-β1蛋白原液、原液缓冲液、甘露醇、海藻糖组成；
2.根据权利要求1所述的重组人TGF-β1蛋白冻干制剂，其特征在于，所述原液缓冲液中各组分的含量分别为：10-30mM NaAC、100-200mM NaCl、0.5-1.5％冰醋酸、pH(2.5-4)；
3.根据权利要求1所述的重组人TGF-β1蛋白冻干制剂，其特征在于，所述重组人TGF-β1蛋白原液的浓度为0.1-0.9mg/mL；
4.根据权利要求1所述的重组人TGF-β1蛋白冻干制剂，其特征在于，所述重组人TGF-β1蛋白原液采用如下方法制备得到：
5.根据权利要求4所述的重组人TGF-β1蛋白冻干制剂，其特征在于，所述重组人TGF-β1蛋白原液经3kD超滤管换液处理。
6.一种如权利要求1-5中任一项所述的重组人TGF-β1蛋白冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述原液缓冲液、
8.一种重组人TGF-β1蛋白溶液的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：对权利要求1-5中任一项所述的重组人TGF-β1蛋白冻干制剂进行复溶得到重组人TGF-β1蛋白溶液。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述复溶时所采用的复溶溶剂为无菌水、无菌生理盐水、0.3％的盐酸利多卡因无菌水溶液或0.3％的盐酸利多卡因无菌生理盐水溶液。
10.权利要求1-5中任一项所述的重组人TGF-β1蛋白冻干制剂在制备用于促进伤口愈合、骨组织修复、软骨组织修复、治疗肿瘤、角膜损伤修复、治疗视网膜病变、心肌梗死后的心肌修复或血管损伤后的修复与再狭窄预防的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种重组人tgf-β1蛋白冻干制剂，其特征在于，所述重组人tgf-β1蛋白冻干制剂由重组人tgf-β1蛋白原液、原液缓冲液、甘露醇、海藻糖组成；
2.根据权利要求1所述的重组人tgf-β1蛋白冻干制剂，其特征在于，所述原液缓冲液中各组分的含量分别为：10-30mm naac、100-200mm nacl、0.5-1.5％冰醋酸、ph(2.5-4)；
3.根据权利要求1所述的重组人tgf-β1蛋白冻干制剂，其特征在于，所述重组人tgf-β1蛋白原液的浓度为0.1-0.9mg/ml；
4.根据权利要求1所述的重组人tgf-β1蛋白冻干制剂，其特征在于，所述重组人tgf-β1蛋白原液采用如下方法制备得到：
5.根据权利要求4所述的重组人tgf-β1蛋白冻干制剂，其特征在于，所述重组人tgf-β1蛋白原液经3kd超滤管换液处理。
6.一种如权利要求1-5中任一项所述的重组人tgf-β1蛋白冻干制剂的制...
【专利技术属性】
技术研发人员：霍景瑞，侯绿滨，乔倩，胡颖嵩，王立燕，
申请(专利权)人：北京同立海源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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