【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及水稻品种改良和培育，特别地，涉及os08g0104400基因在提高水稻耐盐能力中的应用。
技术介绍
1、中国作为世界上的人口大国，其水稻产业对保障粮食安全和社会稳定扮演着至关重要的角色。市场对水稻的高产量、优良品质、强抗病能力和广泛的环境适应性的需求日益增长。
2、在水稻中，os08g0104400基因的功能尚未被充分研究。然而，其在拟南芥中的同源基因编码的是一种名为seed maturation protein1(smp1)的蛋白质，是一种类lea(lateembryogenesis abundant)蛋白家族的蛋白。lea蛋白在植物胚胎发育晚期及逆境条件下，lea蛋白会大量积累，保护植物正常生长发育及代谢，目前研究表明lea蛋白的功能主要包括以下3个方面：
3、1、螯合功能。植物遭受逆境胁迫时，金属离子会与酶脱离，被释放成为自由离子，导致活性氧(reactive oxygen species，ros)的产生。lea蛋白能螯合金属离子和活性氧，从而阻止活性氧自由基的产生。lea蛋白还能够螯合金属离子，从而阻止脱水条件下ros的产生。lea蛋白还能作为脱水保护剂，结合水分子与糖类，从而束缚周围的水分子，使植物细胞免受过度脱水的抑制，保障细胞的基本代谢。
4、2、保护细胞膜结构的稳定性与完整性。lea蛋白在脱水环境下通过与膜的结合，对膜提供保护性基质，从而保护细胞膜、细胞器和细胞的稳定性与完整性。
5、3、保护其他功能蛋白或酶。lea蛋白能够保护细胞内蛋白或酶免受水分胁
6、在拟南芥中，smp1蛋白已被发现与种子的萌发过程密切相关，而在水稻中os08g0104400蛋白的相关研究尚属空白。
技术实现思路
1、本专利技术目的在于提供os08g0104400基因在提高水稻耐盐能力中的应用。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了os08g0104400基因在提高水稻耐盐能力中的应用，os08g0104400基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
3、作为优选的技术方案之一，水稻耐盐能力包括：水稻种子萌发耐盐，水稻幼苗生长耐盐。
4、作为进一步优选的技术方案之一，水稻幼苗生长包括：
5、(a)根长；
6、(b)鲜重。
7、本专利技术还提供了os08g0104400基因在培育耐盐水稻品种中的应用，os08g0104400基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
8、本专利技术还提供了os08g0104400基因编码的蛋白质在提高水稻耐盐能力中的应用，该蛋白质的氨基酸序列如seq id no.2所示。
9、本专利技术还提供了os08g0104400基因编码的蛋白质在培育耐盐水稻品种中的应用，该蛋白质的氨基酸序列如seq id no.2所示。
10、本专利技术还提供了一种耐盐水稻品种的培育方法，具体步骤如下：
11、(1)os08g0104400基因过表达载体的构建：选取bsai和eco31i限制性内切酶对含有ubi启动子的载体进行酶切，扩增，再用同源重组酶将片段连接到酶切后的线性化载体，反应，质粒转化，抗生素筛选，对阳性克隆进行验证，得到目的基因表达载体；
12、(2)os08g0104400基因过表达载体的遗传转化：通过农杆菌介导的遗传转化转入到水稻中，获得基因的过表达植株。
13、作为优选的技术方案之一，步骤(1)中，酶切条件为：37℃反应1小时。
14、作为优选的技术方案之一，步骤(1)中，扩增引物包括：
15、上游引物5’-ggtgttacttctgttgcaacatggcgacgagcaagaaggagg-3’；
16、下游引物5’-tgaagacagagctagttacattacgcttggcggcccacc-3’。
17、作为优选的技术方案之一，步骤(1)中，扩增条件为：94℃,5min；94℃,30s，50℃,45s，72℃,17s，30个循环；72，10min，16℃30min。
18、作为优选的技术方案之一，步骤(1)中，反应条件为：37℃反应30分钟。
19、作为优选的技术方案之一，步骤(2)的具体方法为：
20、(2-1)去除水稻颖壳，消毒，接种至诱导培养基中；
21、(2-2)在含有潮霉素的培养基上培养含有目标基因载体的农杆菌，于28℃黑暗条件下培养2天直至形成单菌落；
22、(2-3)收集诱导形成的愈伤组织至无菌锥形瓶中，加入od600为0.01的农杆菌悬浮液进行侵染，然后将组织转移到含有2,4-d 2mg/l、葡萄糖10g/l和乙酰丁香酮100μm的固体共培养基上，于26℃黑暗条件下培养3天；
23、(2-4)用含有50mg/l潮霉素和500mg/l头孢霉素的无菌水清洗共培养后的愈伤组织，清洗后晾干并转移到含有50mg/l潮霉素和500mg/l头孢霉素的筛选培养基上，于28～30℃暗培养条件下筛选3～4周；
24、(2-5)将筛选出的阳性愈伤组织转移到分化培养基上，于28～30℃温室光照条件下培养；当幼苗长至2～3cm并形成明显根系后，将其转移到含有多种无机盐、维生素、氨基酸、糖类和植物凝胶的生根培养基上，于28～30℃无菌光照条件下培养，直至成苗并经过炼苗后，将幼苗移栽至转基因植物试验田，最终获得os08g0104400基因过表达的植株。
25、本专利技术具有以下有益效果：
26、本专利技术挖掘到了一个功能未知的水稻基因os08g0104400，并证明了其能够正向调控水稻种子萌发早期对盐的耐受能力。因此，水稻os08g0104400基因在水稻耐盐特征改良、培育优异耐盐水稻品种等方面具有潜在的应用价值。
27、本专利技术通过利用crispr/cas9系统构建水稻os08g0104400基因靶位点特异性敲除的植物重组表达载体，转基因获得os08g0104400基因功能缺陷型的纯合突变体植株。同时，构建os08g0104400基因过表达载体，经遗传转化后获得os08g0104400基因过量表达的转基因植株。通过对两类植株(突变体和过表达植株)进行种子萌发早期的耐盐能力分析，结果发现突变体对盐更加敏感，盐浓度越高种子萌发效率越低，萌发越慢。而过表达植株的情况则正好相反。表明os08g0104400基因的表达水平与水稻耐盐能力紧密相关。
28、除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本专利技术还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本专利技术作进一步详细的说明。
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1.Os08g0104400基因在提高水稻耐盐能力中的应用，其特征在于，Os08g0104400基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.Os08g0104400基因在培育耐盐水稻品种中的应用，其特征在于，Os08g0104400基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.Os08g0104400基因编码的蛋白质在提高水稻耐盐能力中的应用，其特征在于，该蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.Os08g0104400基因编码的蛋白质在培育耐盐水稻品种中的应用，其特征在于，该蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.一种耐盐水稻品种的培育方法，其特征在于，具体步骤如下：
6.根据权利要求5所述的一种耐盐水稻品种的培育方法，其特征在于，步骤1)中，酶切条件为：37℃反应1小时。
7.根据权利要求5所述的一种耐盐水稻品种的培育方法，其特征在于，步骤1)中，扩增引物包括：
8.根据权利要求5所述的一种耐盐水稻品种的培育方法，其特征在于，步骤1)中，扩增条件为：9
9.根据权利要求5所述的一种耐盐水稻品种的培育方法，其特征在于，步骤1)中，反应条件为：37℃反应30分钟。
10.根据权利要求5所述的一种耐盐水稻品种的培育方法，其特征在于，步骤2)的具体方法为：
...【技术特征摘要】
1.os08g0104400基因在提高水稻耐盐能力中的应用，其特征在于，os08g0104400基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.os08g0104400基因在培育耐盐水稻品种中的应用，其特征在于，os08g0104400基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
3.os08g0104400基因编码的蛋白质在提高水稻耐盐能力中的应用，其特征在于，该蛋白质的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4.os08g0104400基因编码的蛋白质在培育耐盐水稻品种中的应用，其特征在于，该蛋白质的氨基酸序列如seq id no.2所示。
5.一种耐盐水稻品种的培育方法，其特征在于，具体步骤如下：...
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