【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于在施用之后，特别是在肠胃外施用(例如静脉内、肌内、皮下、瘤内、动脉内、皮内、经皮肤、鼻内、经直肠或经口施用)之后，用于将rna递送至靶组织的rna纳米粒(lnp)，以及包含这样的rnalnp的组合物。在一些实施方案中，rna lnp颗粒包含单链rna，例如编码目的肽或目的蛋白(例如药物活性肽或蛋白质)的mrna。rna被靶组织的细胞吸收，并且rna被翻译成可表现出其生理活性的编码的肽或蛋白质。此外，本专利技术涉及(a)聚唑啉(pox)聚合物和/或聚嗪(poz)聚合物与(b)一个或更多个疏水链的某些缀合物、包含这样的缀合物的组合物以及这样的缀合物和组合物的用途。
技术介绍
1、使用rna将外来遗传信息递送到靶细胞中提供了dna的有吸引力的替代方案。使用rna的优点包括瞬时表达和非转化特征。rna不需要进入细胞核以进行表达，并且此外，rna不会整合到宿主基因组中，从而消除了肿瘤发生的风险。
2、可使用不同的递送载剂，主要基于与rna一起形成纳米粒的阳离子聚合物或脂质，将rna递送至对象。纳米粒旨在保护rna免于降解，使得能够将rna递送至靶位点并促进细胞吸收和靶细胞的加工。对于递送效力，除分子组成之外，参数如颗粒尺寸、电荷或与分子部分(例如聚乙二醇(peg)或配体)的接枝也发挥作用。可考虑与peg接枝来降低血清相互作用，提高血清稳定性并延长循环时间，这可有助于某些靶向方法。在靶位点与受体结合的配体可帮助提高靶向效力。此外，聚乙二醇化(pegylation)可用于颗粒工程化。例如，如果通过将rna的水相与
3、因此，对于其中由乙醇和水相形成lnp的技术，peg-脂质的主要作用之一是通过在新生颗粒表面处提供空间屏障而有助于颗粒自组装，所述新生颗粒在当核酸在包含脂质的乙醇溶液中快速混合以结合rna时形成。peg空间位阻阻止颗粒间融合并促进形成均匀lnp群，其中可实现直径<100nm的lnp。
4、peg是药物递送中使用最广泛和金标准的“隐形(stealth)”聚合物。peg-脂质由于其亲水空间位阻特性(peg壳防止导致聚集的静电或范德华力吸引(van der waalsattraction))而通常被并入体系中来制备均匀且胶体稳定的纳米粒群。聚乙二醇化使得能够吸引聚合物周围的水壳，保护rna复合物免于血清蛋白的调理作用，提高血清半衰期以及降低快速肾清除，这使得改善了药代动力学行为。脂质酰基链(c18、c16或c14)长度的变化改变了在颗粒中peg-脂质并入的稳定性，这导致药代动力学的调节。在体内与半衰期<30分钟的lnp解离的包含短(c14)酰基链的peg-脂质的使用导致最佳的肝细胞基因沉默效力(chen et al.,2014,j.control release 196:106-12；ambegia et al.,2005,biochimicaet biophysica acta 1669:155-163)。另外，可通过改变peg-脂质参数来获得对颗粒尺寸的严格控制：颗粒中较高的peg mw或较高的peg-脂质摩尔分数导致较小的颗粒。
5、尽管具有这些优点，但是纳米粒的聚乙二醇化也可导致不利于药物递送的预期用途的数种作用。已知脂质体和lnp的聚乙二醇化降低了细胞摄取和内体逃逸，从而最终降低整体转染效率。事实上，peg壳为颗粒与细胞的有效结合提供了空间屏障，并且还通过阻止脂质体与内体膜之间的膜融合阻碍内体释放。这就是为何必须始终仔细调整peg-脂质的类型和所使用的peg-脂质的量。它在一个方面应在体内和稳定方面提供足够的隐形作用，同时在另一个方面不阻碍转染。该现象被称为“peg窘境(peg dilemma)”。
6、除降低转染效率之外，聚乙二醇化还与由抗peg抗体和/或补体活化以及贮积病(storage disease)诱导的加速血液清除(accelerated blood clearance，abc)现象相关(bendele et al.,1998,toxicolocical sciences 42,152-157；young maet al.,2007,translational research 149(6),333-342；s.m.moghimi,j.szebeni,2003,progress inlipid research 42:463-478)。ishida等人和laverman等人报道，在大鼠中静脉内注射peg接枝的脂质体可显著改变第二剂量(当该第二剂量在间隔数天之后施用时)的药代动力学行为(laverman p et al.,2001,j.pharmacol.exp.ther.298(2),607-12；ishida etal.,2006,j.control release 115(3),251-8)。“加速血液清除”(abc)现象显示与脂质体的peg含量相关。血浆中抗peg抗体的存在通过单核吞噬细胞系统(monophagocyte system，mps)诱导了更高的颗粒清除，这最终降低了药物的效力。
7、peg还被认为诱导补体活化，所述补体活化可导致超敏反应，也称为补体活化相关的假性变态反应(complement-activation related pseudo-allergy，carpa)。从文献中仍不清楚补体的活化一般是由于纳米粒还是特别是由于peg的存在。
8、其他脂质颗粒中peg的存在还可诱导特异性免疫应答。semple等人报道了包含peg-脂质衍生物和包封的反义寡脱氧核苷酸或质粒dna的脂质体引发了强烈的免疫应答，导致小鼠中后续剂量的快速血液清除。该应答的量级足以诱导显著的发病率并且在一些情况下诱导显著的死亡率。从血液中快速消除脂质体包封的寡脱氧核苷酸取决于膜中peg-脂质的存在，因为使用非聚乙二醇化的脂质体或包含可快速交换的peg-脂质的脂质体消除了该应答。抗peg抗体的产生和假定的补体活化是对囊泡从血液中快速消除的可能解释(semple et al.,2005,j.pharmacol.exp.ther.312(3),1020-6)。
9、由于peg可诱导免疫应答，因此对于需要多次注射的某些应用需要避免它。一些实例是使用mrna的治疗，例如用于蛋白质替代治疗。在此，由于rna潜在的固有免疫原性本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.包含脂质纳米粒(LNP)的组合物，其中所述LNP包含：
2.权利要求1所述的组合物，其中所述聚合物中POX和/或POZ重复单元的总数为2至200。
3.权利要求1或2所述的组合物，其中所述POX和/或POZ聚合物包含以下通式(I)：
4.权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有以下通式(II)或(II’)：
5.权利要求3或4所述的组合物，其中R1是甲基或乙基，优选甲基。
6.权利要求3至5中任一项所述的组合物，其中m为2至180，例如4至160、6至140、8至120、或10至100。
7.权利要求4至6中任一项所述的组合物，其中L1包含至少一个官能部分，例如经至少一个单价官能部分取代的亚烷基部分和/或在亚烷基与R4连接的末端处与二价官能部分连接的亚烷基部分，其中优选地每个单价官能部分独立地选自羟基、醚、卤素、氰基、叠氮基、硝基、氨基、铵、酯、羧基、硫醇(硫烷基)、二硫烷基、硫醚、二硫醚、亚砜、砜、亚硫酸盐/酯、硫酸盐/酯、磷酸盐/酯、亚磺酰胺、磺酰胺、氨基磺酸盐/酯、二硒化物、亚硫酸二酰
8.权利要求4至7中任一项所述的组合物，其中L1选自
9.权利要求4至8中任一项所述的组合物，其中L1选自
10.权利要求4至9中任一项所述的组合物，其中R2选自
11.权利要求4至7中任一项所述的组合物，其中L1选自
12.权利要求4至7和11中任一项所述的组合物，其中L1选自
13.权利要求4至7、11和12中任一项所述的组合物，其中R2选自(R4)2NC(O)(C1-2亚烷基)-，R4C(O)OCH2CH(OC(O)R4)-CH2-OP(O)2O-(CH2)2-NHC(O)-CH2-，和R4-C(O)(CH2)2-C(O)-。
14.权利要求4至7中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有通式(II’)，并且L1选自[*-Z]p(C1-6亚烷基)-Z-、*-Z-(C3-8亚环烷基)-Z-、*-Z-(C3-8亚环烯基)-Z-、(*＝N)(C1-6亚烷基)-Z-、*-Z-(C1-6亚烷基)-和*-Z-，其中*表示与R4的连接点；p为1或2；C1-6亚烷基为二价(如果p为1)或三价(如果p为2)；所述C3-8亚环烷基和C3-8亚环烯基中的每一个任选地经一个或更多个(例如1、2、3或4个)独立地选自以下的取代基取代：-OH、＝O、-SH、卤素、-CN、-N3和C1-3烷基；并且每个Z独立地选自
15.权利要求4至7中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有通式(II’)，并且L1是[*-C(O)]p(C1-6亚烷基)-C(O)NH-或[*-]2N-，其中*表示与R4的连接点；p为1或2；并且C1-6亚烷基为二价(如果p为1)或三价(如果p为2)。
16.权利要求4至7和15中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有通式(II’)，并且L1是*-C(O)(C2-3亚烷基)-C(O)NH-或[*-]2N-，其中*表示与R4的连接点。
17.权利要求4至7、15和16中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有通式(II’)，并且R2是R4-C(O)(CH2)2C(O...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.包含脂质纳米粒(lnp)的组合物，其中所述lnp包含：
2.权利要求1所述的组合物，其中所述聚合物中pox和/或poz重复单元的总数为2至200。
3.权利要求1或2所述的组合物，其中所述pox和/或poz聚合物包含以下通式(i)：
4.权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有以下通式(ii)或(ii’)：
5.权利要求3或4所述的组合物，其中r1是甲基或乙基，优选甲基。
6.权利要求3至5中任一项所述的组合物，其中m为2至180，例如4至160、6至140、8至120、或10至100。
7.权利要求4至6中任一项所述的组合物，其中l1包含至少一个官能部分，例如经至少一个单价官能部分取代的亚烷基部分和/或在亚烷基与r4连接的末端处与二价官能部分连接的亚烷基部分，其中优选地每个单价官能部分独立地选自羟基、醚、卤素、氰基、叠氮基、硝基、氨基、铵、酯、羧基、硫醇(硫烷基)、二硫烷基、硫醚、二硫醚、亚砜、砜、亚硫酸盐/酯、硫酸盐/酯、磷酸盐/酯、亚磺酰胺、磺酰胺、氨基磺酸盐/酯、二硒化物、亚硫酸二酰胺、硫酸二酰胺、脲、硫脲、羰基、硫代羰基、原酸酯、硫代酸盐/酯、二硫代酸盐/酯、亚氨酸盐/酯、亚氨基、硫代亚氨酸盐/酯、亚硫酰胺基、碳酸盐/酯、硫代碳酸盐/酯、二硫代碳酸盐/酯、三硫代碳酸盐/酯、胍基(imidamido)、carbamimidate、carbonimidate、氨基甲酸盐/酯、二硫代氨基甲酸盐/酯、carbonodithioimidate、carbamimidothioate、硫代氨基甲酸盐/酯、carbonimidothioate、酰腙、肼、肟、缩醛、半缩醛、缩酮、半缩酮、酰亚胺和酰胺部分；和/或每个二价官能部分独立地选自醚、氨基、酯、硫醚、二硫醚、亚砜、砜、亚硫酸盐/酯、硫酸盐/酯、磷酸盐/酯、亚磺酰胺、磺酰胺、氨基磺酸盐/酯、二硒化物、亚硫酸二酰胺、硫酸二酰胺、脲、硫脲、羰基、硫代羰基、原酸酯、硫代酸盐/酯、二硫代酸盐/酯、亚氨酸盐/酯、亚氨基、硫代亚氨酸盐/酯、亚硫酰胺基、碳酸盐/酯、硫代碳酸盐/酯、二硫代碳酸盐/酯、三硫代碳酸盐/酯、胍基(imidamido)、carbamimidate、carbonimidate、氨基甲酸盐/酯、二硫代氨基甲酸盐/酯、carbonodithioimidate、carbamimidothioate、硫代氨基甲酸盐/酯、carbonimidothioate、酰腙、肼、肟、缩醛、半缩醛、缩酮、半缩酮、亚胺、酰亚胺和酰胺部分。
8.权利要求4至7中任一项所述的组合物，其中l1选自
9.权利要求4至8中任一项所述的组合物，其中l1选自
10.权利要求4至9中任一项所述的组合物，其中r2选自
11.权利要求4至7中任一项所述的组合物，其中l1选自
12.权利要求4至7和11中任一项所述的组合物，其中l1选自
13.权利要求4至7、11和12中任一项所述的组合物，其中r2选自(r4)2nc(o)(c1-2亚烷基)-，r4c(o)och2ch(oc(o)r4)-ch2-op(o)2o-(ch2)2-nhc(o)-ch2-，和r4-c(o)(ch2)2-c(o)-。
14.权利要求4至7中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有通式(ii’)，并且l1选自[*-z]p(c1-6亚烷基)-z-、*-z-(c3-8亚环烷基)-z-、*-z-(c3-8亚环烯基)-z-、(*＝n)(c1-6亚烷基)-z-、*-z-(c1-6亚烷基)-和*-z-，其中*表示与r4的连接点；p为1或2；c1-6亚烷基为二价(如果p为1)或三价(如果p为2)；所述c3-8亚环烷基和c3-8亚环烯基中的每一个任选地经一个或更多个(例如1、2、3或4个)独立地选自以下的取代基取代：-oh、＝o、-sh、卤素、-cn、-n3和c1-3烷基；并且每个z独立地选自
15.权利要求4至7中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有通式(ii’)，并且l1是[*-c(o)]p(c1-6亚烷基)-c(o)nh-或[*-]2n-，其中*表示与r4的连接点；p为1或2；并且c1-6亚烷基为二价(如果p为1)或三价(如果p为2)。
16.权利要求4至7和15中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有通式(ii’)，并且l1是*-c(o)(c2-3亚烷基)-c(o)nh-或[*-]2n-，其中*表示与r4的连接点。
17.权利要求4至7、15和16中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有通式(ii’)，并且r2是r4-c(o)(ch2)2c(o)nh-或r4n-。
18.权利要求4至17中任一项所述的组合物，其中每个r4独立地为非环状烃基，优选直链烃基。
19.权利要求4至18中任一项所述的组合物，其中每个r4独立地为具有至少8个碳原子的烃基，例如具有至少10个碳原子的烃基。
20.权利要求4至17和19中任一项所述的组合物，其中一个r4是生育酚部分。
21.权利要求4至20中任一项所述的组合物，其中r3选自h、c1-3烷基、-or20、-n3、c2-6炔基、-oc(o)r21、-c(o)r21、-nr22r23、-cooh、-c(o)nr22r23、-nr22c(o)r21和靶向对的成员，其中所述c1-3烷基任选地经一个或更多个独立地选自以下的取代基取代：-oh、sh、卤素、-cn、-n3、c2-6炔基、-cooh、-cooch3、-nr22r23、-c(o)nr22r23、-nr22c(o)r21和靶向对的成员；r20选自h、c1-3烷基和3至6元杂环基，其中所述c1-3烷基和3至6元杂环基中的每一个任选地经一个或更多个独立地选自以下的取代基取代：-oh、sh、卤素、-cn、-n3、c2-6炔基、-cooh、-nr22r23和靶向对的成员；r21选自c1-3烷基和3至6元杂环基，其中所述c1-6烷基和3至6元杂环基中的每一个任选地经一个或更多个独立地选自以下的取代基取代：-oh、sh、卤素、-cn、-n3、c2-6炔基、-cooh、-nr22r23和靶向对的成员；并且r22和r23中的每一个独立地选自h、c1-6烷基、c2-6烯基和c2-6炔基，或者r22和r23可与它们所连接的氮原子连接在一起以形成杂环基，其中所述c1-6烷基、c2-6烯基和c2-6炔基中的每一个任选地经一个或更多个独立地选自以下的取代基取代：-oh、sh、卤素、-cn、-n3、c2-6炔基、-cooh、-nh2、-nh(c1-3烷基)、-n(c1-3烷基)2和靶向对的成员。
22.权利要求4至21中任一项所述的组合物，其中r3选自
23.权利要求4至22中任一项所述的组合物，其中r3选自
24.权利要求1至23中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有以下通式(iii)或(iii’)：
25.权利要求1至23中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有根据权利要求24中所示的通式(iii)或(iii’)，其中：
26.权利要求3至25中任一项所述的组合物，其中a为1。
27.权利要求3至25中任一项所述的组合物，其中a为2。
28.权利要求1或2所述的组合物，其中所述pox和/或poz聚合物是共聚物，所述共聚物包含以下通式(ia)和(ib)的重复单元：
29.权利要求1、2和28中任一项所述的组合物，其中所述缀合物具有以下通式(iv)：
30.权利要求28或29所述的组合物，其中r1中的每一个独立地为甲基或乙基，优选甲基，并且针对每个重复单元独立地选择。
31.权利要求28至30中任一项所述的组合物，其中所述共聚物中式(ia)的重复单元的数目为1至179，例如1至159、1至139、1至119、或1至99；所述共聚物中式(ib)的重复单元的数目为1至179，例如1至159、1至139、1至119、或1至99；并且所述共聚物中式(ia)的重复单元的数目与式(ib)的重复单元的数目之和为2至180，例如4至160、6至140、8至120、或10至100。
32.权利要求29至31中任一项所述的组合物，其中l2包含至少一个官能部分，例如经至少一个单价官能部分取代的亚烷基部分和/或在亚烷基与r7连接的末端处与二价官能部分连接的亚烷基部分，其中优选地每个单价官能部分独立地选自羟基、醚、卤素、氰基、叠氮基、硝基、氨基、铵、酯、羧基、硫醇(硫烷基)、二硫烷基、硫醚、二硫醚、亚砜、砜、亚硫酸盐/酯、硫酸盐/酯、磷酸盐/酯、亚磺酰胺、磺酰胺、氨基磺酸盐/酯、二硒化物、亚硫酸二酰胺、硫酸二酰胺、脲、硫脲、羰基、硫代羰基、原酸酯、硫代酸盐/酯、二硫代酸盐/酯、亚氨酸盐/酯、亚氨基、硫代亚氨酸盐/酯、亚硫酰胺基、碳酸盐/酯、硫代碳酸盐/酯、二硫代碳酸盐/酯、三硫代碳酸盐/酯、胍基(imidamido)、carbamimidate、carbonimidate、氨基甲酸盐/酯、二硫代氨基甲酸盐/酯、carbonodithioimidate、carbamimidothioate、硫代氨基甲酸盐/酯、carbonimidothioate、酰腙、肼、肟、缩醛、半缩醛、缩酮、半缩酮、酰亚胺和酰胺部分；和/或每个二价官能部分独立地选自醚、氨基、酯、硫醚、二硫醚、亚砜、砜、亚硫酸盐/酯、硫酸盐/酯、磷酸盐/酯、亚磺酰胺、磺酰胺、氨基磺酸盐/酯、二硒化物、亚硫酸二酰胺、硫酸二酰胺、脲、硫脲、羰基、硫代羰基、原酸酯、硫代酸盐/酯、二硫代酸盐/酯、亚氨酸盐/酯、亚氨基、硫代亚氨酸盐/酯、亚硫酰胺基、碳酸盐/酯、硫代碳酸盐/酯、二硫代碳酸盐/酯、三硫代碳酸盐/酯、胍基(imidamido)、carbamimidate、carbonimidate、氨基甲酸盐/酯、二硫代氨基甲酸盐/酯、carbonodithioimidate、carbamimidothioate、硫代氨基甲酸盐/酯、carbonimidothioate、酰腙、肼、肟、缩醛、半缩醛、缩酮、半缩酮、酰亚胺和酰胺部分。
33.权利要求29至32中任一项所述的组合物，其中l2选自
34.权利要求29至33中任一项所述的组合物，其中l2选自
35.权利要求29至34中任一项所述的组合物，其中r5选自r7-l2r7，-(...
【专利技术属性】
技术研发人员：海因里希·哈斯，若热·莫雷诺赫雷罗，法比安·林克，本亚明·韦伯，维克托·雷塔梅罗德拉罗萨，罗萨·诺埃米·维拉诺瓦，伊赫桑·梅赫拉瓦尔，霍萨姆·黑费沙，
申请(专利权)人：生物技术公司，
类型：发明
国别省市：
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