【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种新型的修饰型酯酶。更具体地，本专利技术涉及一种高温稳定性和/或对有机溶剂的耐受性相较于现有酯酶进一步提升的修饰型酯酶。
技术介绍
1、菊酸正广泛地被用作合成拟除虫菊酯系杀虫剂的合成原料。菊酸中存在4种异构体((1r,3r)-菊酸、(1r,3s)-菊酸、(1s,3s)-菊酸和(1s,3r)-菊酸)，但(1r,3r)-菊酸的杀虫活性最高。以工业化地化学合成、或利用使用了菊酸酯酶的酶反应来制造菊酸。
2、例如，在专利文献1中公开了源自球形节杆菌(arthrobacter globiformis)的酯酶1r,3r((+)-trans)特异性地分解菊酸乙酯。在专利文献2中公开了将源自球形节杆菌的酯酶修饰成1r,3s((+)-cis)特异性地分解菊酸乙酯的酶的事例。此外，在非专利文献1中公开了使用源自球形节杆菌的酯酶、源自其他菌的酯酶1r,3r((+)-trans)特异性或1s,3r((-)-trans)特异性地分解菊酸乙酯。
3、现有技术文献
4、专利文献
5、专利文献1：日本特开平5-56787号公报
6、专利文献2：国际公开第2020/116331号
7、非专利文献
8、非专利文献1：satoshi mitsuda et al.，agric.biol.chem.,55(11),2865-2870,1991.
技术实现思路
1、专利技术要解决的问题
2、源自球形节杆菌的酯酶的产
3、解决问题的手段
4、本专利技术人通过利用蛋白质工程学技法将源自球形节杆菌的酯酶的氨基酸序列进行修饰，尝试创造高温下更稳定的修饰体酯酶。经过试错结果，本专利技术人在该酯酶中成功地特定了对提升温度稳定性有效的突变点(氨基酸残基)，进一步地发现该突变点对于提升对有机溶剂的耐受性也有效。通过基于有关的发现进一步地推进研究，从而完成了本专利技术。即，本专利技术如下所述。
5、[1]一种修饰型酯酶，其为以下的(i)～(iii)的任意1种修饰型酯酶：
6、(i)修饰型酯酶，其含有在序列号1、7或35的氨基酸序列中，选自由以下的(1)～(5)构成的群中的位点的至少1个氨基酸被其他氨基酸取代的氨基酸序列，
7、(1)s12
8、(2)r25
9、(3)s220
10、(4)a313
11、(5)s315；
12、(ii)修饰型酯酶，其在(i)的修饰型酯酶中，1个或多个氨基酸进一步地被取代(其中不包括(i)中被取代的氨基酸位点)、添加、插入或缺失(其中不包括(i)中被取代的氨基酸位点)且其温度稳定性和/或对有机溶剂的耐受性相较于由序列号1、7或35的氨基酸序列构成的酯酶的这些性质进一步提升；
13、(iii)修饰型酯酶，其在(i)的修饰型酯酶中，除(i)中被取代的氨基酸以外的氨基酸进一步被其他氨基酸取代后的修饰型酯酶，其中，该修饰型酯酶具有与(i)的修饰型酯酶70％以上的同一性且其温度稳定性和/或对有机溶剂的耐受性相较于由序列号1、7或35的氨基酸序列构成的酯酶的这些性质进一步提升。
14、[2]根据[1]所述的修饰型酯酶，在所述(i)中，氨基酸的取代为选自由以下构成的群中的至少1个：
15、(1)s12p
16、(2)r25p
17、(3)s220a
18、(4)a313s
19、(5)s315m。
20、[3]一种核酸，其编码[1]或[2]所述的修饰型酯酶。
21、[4]一种表达盒或重组载体，其含有[3]所述的核酸。
22、[5]一种转化体，其由使用[4]所述的表达盒或重组载体转化而来。
23、[6]一种修饰型酯酶的制造方法，其包括培养[5]所述的转化体的工序。
24、[7]一种酶剂，含有[1]或[2]所述的修饰型酯酶。
25、[8]根据[7]所述的酶剂，其用于生成菊酸。
26、[9]一种菊酸的制造方法，其包括使[1]或[2]所述的修饰型酯酶作用于菊酸乙酯的工序。
27、专利技术的效果
28、本专利技术的修饰型酯酶的温度稳定性和对有机溶剂的耐受性相较于野生型酯酶都进一步提升。因此，本专利技术的修饰型酯酶可以用于在迄今为止都更高的温度带下制造菊酸。此外，本专利技术的修饰型酯酶还可以在存在有机溶剂的条件下效率良好地制造菊酸。
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1.一种修饰型酯酶，其为以下的(i)～(iii)的任意1种修饰型酯酶：
2.根据权利要求1所述的修饰型酯酶，在所述(i)中，氨基酸的取代为选自由以下构成的群中的至少1个：
3.一种核酸，其编码权利要求1或2所述的修饰型酯酶。
4.一种表达盒或重组载体，其含有权利要求3所述的核酸。
5.一种转化体，其由使用权利要求4所述的表达盒或重组载体转化而来。
6.一种修饰型酯酶的制造方法，其包括培养权利要求5所述的转化体的工序。
7.一种酶剂，含有权利要求1或2所述的修饰型酯酶。
8.根据权利要求7所述的酶剂，其用于生成菊酸。
9.一种菊酸的制造方法，其包括使权利要求1或2所述的修饰型酯酶作用于菊酸乙酯的工序。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种修饰型酯酶，其为以下的(i)～(iii)的任意1种修饰型酯酶：
2.根据权利要求1所述的修饰型酯酶，在所述(i)中，氨基酸的取代为选自由以下构成的群中的至少1个：
3.一种核酸，其编码权利要求1或2所述的修饰型酯酶。
4.一种表达盒或重组载体，其含有权利要求3所述的核酸。
5.一种转化体，其由使...
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