【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，特别涉及检测a族链球菌与b族链球菌及人青霉素易感基因rna的lamp引物探针组及其试剂盒和应用。
技术介绍
1、a族链球菌（gas）也称化脓性链球菌或溶血性链球菌，引起的疾病约占人类链球菌感染的90%，是人类链球菌中致病力强的细菌，有较强的侵袭力，并产生多种侵袭性酶和外毒素，如果孕妇感染a族链球菌，新生儿在经产道分娩时，也可能会通过产道感染a族链球菌，可能会出现败血症，严重时可导致死亡；疾病的治疗主要依赖于抗菌治疗，其中青霉素是首选药物。另外对青霉素过敏病例的治疗主要选用大环内酯类药物。
2、b族链球菌（gbs）也称无乳链球菌，根据细菌的荚膜多糖不同，gbs可分为ia、ib、ic、ii、iii、ⅳ、ⅴ、ⅵ、ⅶ、ⅷ 和ⅸ，以上血清型都可引起人早发型 gbs 感染，其中 ⅲ型的毒力最强，b族链球菌可寄居于母亲生殖道和胃肠道，带菌的孕产妇通常无临床症状，但也可以引起绒毛膜黏膜炎、子宫内膜炎等。新生儿感染多为通过母婴传播，如羊膜早破可致上行感染，或接触了产道的细菌，而羊膜完整者胎儿吸入了受羊膜炎污染的羊水，也可致病，在检查和诊断后均需要进行抗感染治疗，可选择大剂量青霉素或氨苄西林。但需考虑青霉素耐药者可依据药物敏感试验选择抗生素，进一步降低过敏性休克等风险。
3、综上，婴幼儿（如新生儿）在进行用药时需考虑抗生素的选择，在青霉素耐药基因的检测也是必需的，也是对gbs感染阳性患者进行青霉素治疗是目前临床中有效的治疗方案，但青霉素抗生素使用是目前所有药物过敏反应中发生率最高的，目前我国青霉素类抗
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提出一种检测a族链球菌与b族链球菌及人青霉素易感基因rna的lamp引物探针组及应用，旨在解决可同时检测a族链球菌和b族链球菌是否感染的同时还能检测患者青霉素易感基因，避免使用青霉素使用不当的技术问题，其中检测a族链球菌和b族链球菌的rna可同时用于监控患者用药后是否依然存在a族链球菌和b族链球菌感染的技术问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提出一种检测a族链球菌与b族链球菌及人青霉素易感基因rna的lamp引物探针组，所述引物探针组包括：针对a族链球菌23s rrna靶序列保守区设计的第一引物探针组、针对b族链球菌23s rrna靶序列保守区设计的第二引物探针组和针对人青霉素易感基因hla-drb1*09跨内含子区域设计的第三引物探针组，其中：
3、所述第一引物探针组包括gas-f3引物、gas-b3引物、gas-fip引物、gas-bip引物、gas-lf引物、gas-lb引物和gas-p探针，所述gas-f3引物的核苷酸序列如seq id no:1所示，所述gas-b3引物的核苷酸序列如seq id no:2所示，所述gas-fip引物的核苷酸序列如seqid no:3所示，所述gas-bip引物的核苷酸序列如seq id no:4所示，所述gas-lf引物的核苷酸序列如seq id no:5所示，所述gas-lb引物的核苷酸序列如seq id no:6所示，所述gas-p探针的核苷酸序列如seq id no:7所示；
4、所述第二引物探针组包括gbs-f3引物、gbs-b3引物、gbs-fip引物、gbs-bip引物、gbs-lf引物、gbs-lb引物和gbs-p探针，所述gbs-f3引物的核苷酸序列如seq id no:8所示，所述gbs-b3引物的核苷酸序列如seq id no:9所示，所述gbs-fip引物的核苷酸序列如seqid no:10所示，所述gbs-bip引物的核苷酸序列如seq id no:11所示，所述gbs-lf引物的核苷酸序列如seq id no:12所示，所述gbs-lb引物的核苷酸序列如seq id no:13所示，所述gbs-p探针的核苷酸序列如seq id no:14所示；
5、所述第三引物探针组包括drb-f3引物、drb-b3引物、drb-fip引物、drb-bip引物、drb-lf引物、drb-lb引物和drb-p1探针，所述drb-f3引物的核苷酸序列如seq id no:15所示，所述drb-b3引物的核苷酸序列如seq id no:16所示，所述drb-fip引物的核苷酸序列如seq id no:17所示，所述drb-bip引物的核苷酸序列如seq id no:18所示，所述drb-lf引物的核苷酸序列如seq id no:19所示，所述drb-lb引物的核苷酸序列如seq id no:20所示，所述drb-p1探针的核苷酸序列如seq id no:21所示。
6、在一实施方式中，所述gas-p探针、所述gbs-p探针和所述drb-p1探针均为taqman探针或分子信标探针，和/或，
7、所述gas-p探针、所述gbs-p探针和所述drb-p1探针均为taqman探针，其中，所述taqman探针的5′端包括荧光报告基团，所述taqman探针的3′端包括荧光淬灭基团。
8、在一实施方式中，所述荧光报告基团包括fam荧光基团、vic荧光基团、rox荧光基团或cy5荧光基团。
9、在一实施方式中，所述荧光淬灭基团包括bhq1淬灭基团、bhq2淬灭基团或bhq3淬灭基团。
10、在一实施方式中，所述针对a族链球菌23s rrna靶序列保守区域设计的第一引物探针组中，所述23s rrna靶序列保守区域的核苷酸序列如seq id no:22所示；和/或，
11、所述针对b族链球菌23s rrna靶序列保守区域设计的第二引物探针组中，所述23srrna靶序列保守区域的核苷酸序列如seq id no:23所示；和/或，
12、所述针对人青霉素易感基因hla-drb1*09跨内含子区域设计的第二引物探针组中，所述hla-drb1*09跨内含子区域包括第一外显子和第二外显子，所述第一外显子的核苷酸序列如seq id no:24所示，所述第二外显子的核苷酸序列如seq id no:25所示。
13、本专利技术还提出一种检测a族链球菌与b族链球菌及人青霉素易感基因rna的lamp引物探针组的试剂盒，所述试剂盒包括如上任意一项所述的检测a族链球菌与b族链球菌及人青霉素易感基因rna的lamp引物探针组。
14、在一实施方式中，所述试剂盒还包括逆转录酶、udg酶、bst dna聚合酶、abh空白对照、abh阳性对照和rna样本保存液。
15、在一实施方式中，所述rna样本保存液的组分包括0.5~1.5m异硫氰酸胍、1%~2%十二烷基磺酸钠、0.1~0.2g/l黄原酸酯、0.02~0本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测A族链球菌与B族链球菌及人青霉素易感基因RNA的LAMP引物探针组，其特征在于，所述引物探针组包括：针对A族链球菌23S rRNA靶序列保守区设计的第一引物探针组、针对B族链球菌23S rRNA靶序列保守区设计的第二引物探针组和针对人青霉素易感基因HLA-DRB1*09跨内含子区域设计的第三引物探针组，其中：
2.如权利要求1所述的检测A族链球菌与B族链球菌及人青霉素易感基因RNA的LAMP引物探针组，其特征在于，所述GAS-P探针、所述GBS-P探针和所述DRB-P1探针均为Taqman探针或分子信标探针，和/或，
3.如权利要求2所述的检测A族链球菌与B族链球菌及人青霉素易感基因RNA的LAMP引物探针组，其特征在于，所述荧光报告基团包括FAM荧光基团、VIC荧光基团、ROX荧光基团或CY5荧光基团。
4.如权利要求2所述的检测A族链球菌与B族链球菌及人青霉素易感基因RNA的LAMP引物探针组，其特征在于，所述荧光淬灭基团包括BHQ1淬灭基团、BHQ2淬灭基团或BHQ3淬灭基团。
5.如权利要求1所述的检测A族链球菌
6.一种检测A族链球菌与B族链球菌及人青霉素易感基因RNA的LAMP引物探针组的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1至5任意一项所述的检测A族链球菌与B族链球菌及人青霉素易感基因RNA的LAMP引物探针组。
7.如权利要求6所述的检测A族链球菌与B族链球菌及人青霉素易感基因RNA的LAMP引物探针组的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括逆转录酶、UDG酶、Bst DNA聚合酶、ABH空白对照和ABH阳性对照和RNA样本保存液。
8.如权利要求7所述的检测A族链球菌与B族链球菌及人青霉素易感基因RNA的LAMP引物探针组的试剂盒，其特征在于，所述RNA样本保存液的组分包括：异硫氰酸胍、十二烷基磺酸钠、黄原酸酯、EDTA和Tris-HCl。
9.如权利要求8所述的检测A族链球菌与B族链球菌及人青霉素易感基因RNA的LAMP引物探针组的试剂盒，其特征在于，所述RNA样本保存液的组分包括0.5~1.5M异硫氰酸胍、1%~2%十二烷基磺酸钠、0.1~0.2g/L黄原酸酯、0.02~0.03M EDTA和0.1~0.3M Tris-HCl。
10.一种检测A族链球菌与B族链球菌及人青霉素易感基因RNA的检测方法，所述检测方法为非疾病治疗或诊断目的，其特征在于，包括步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种检测a族链球菌与b族链球菌及人青霉素易感基因rna的lamp引物探针组，其特征在于，所述引物探针组包括：针对a族链球菌23s rrna靶序列保守区设计的第一引物探针组、针对b族链球菌23s rrna靶序列保守区设计的第二引物探针组和针对人青霉素易感基因hla-drb1*09跨内含子区域设计的第三引物探针组，其中：
2.如权利要求1所述的检测a族链球菌与b族链球菌及人青霉素易感基因rna的lamp引物探针组，其特征在于，所述gas-p探针、所述gbs-p探针和所述drb-p1探针均为taqman探针或分子信标探针，和/或，
3.如权利要求2所述的检测a族链球菌与b族链球菌及人青霉素易感基因rna的lamp引物探针组，其特征在于，所述荧光报告基团包括fam荧光基团、vic荧光基团、rox荧光基团或cy5荧光基团。
4.如权利要求2所述的检测a族链球菌与b族链球菌及人青霉素易感基因rna的lamp引物探针组，其特征在于，所述荧光淬灭基团包括bhq1淬灭基团、bhq2淬灭基团或bhq3淬灭基团。
5.如权利要求1所述的检测a族链球菌与b族链球菌及人青霉素易感基因rna的lamp引物探针组，其特征在于，所述针对a族链球菌23s rrna靶序列保守区域设计的第一引物探针组中，所述23s rrna靶序列保守区域的核苷酸序列如...
【专利技术属性】
技术研发人员：周利建，董玉莲，魏青勉，徐雨涵，孙芳，刘福平，
申请(专利权)人：深圳会众生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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