【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开关于il2突变蛋白(或“il2突变体”)、含有编码il2突变蛋白的多核苷酸的分离的载体、含有编码il2突变蛋白的分离的多核苷酸或分离的载体的宿主细胞、含有il2突变蛋白的融合蛋白、包含il2突变蛋白的药物组合物、及其用途。
技术介绍
1、本部分中的陈述仅提供与本公开相关的背景信息，并且不一定构成现有技术。
2、白细胞介素2(il2)，白细胞介素2细胞激素亚家族的成员，是由活化的cd4+和cd8+t淋巴细胞产生的分泌型细胞激素，这种细胞激素对t和b淋巴细胞的增殖很重要。il2也被称为t细胞生长因子(tcgf)。人il2(uniprot：p60568)由成熟蛋白中20个氨基酸的n-末端信号肽和133个氨基酸的多肽链构成。il2通过其对调节性t(treg)细胞的作用以及效应淋巴细胞反应的优化和微调，在免疫稳态期间发挥关键功能。
3、il2通过由不同的α、β和γ链(也分别称为cd25、cd122和cd132)构成的异三聚体受体复合物发出信号。通常认为il2rα(cd25)不直接参与信息转导，而一旦il2rα与il2结合，它可以将细胞激素对中等亲和力受体(il2rβγ异二聚体)的总体亲和力从低纳摩尔范围增加到皮摩尔范围(高亲和力受体，il2rαβγ异三聚体)(tang等人,cytokine:x1[细胞激素：x1](2019)100001)。表达il2rα的t细胞包含调节性t细胞(treg细胞)，treg细胞对于遏制自体免疫炎症是必须的。il2rβ和il2rγ在细胞毒性效应t细胞和treg细胞两者上表达。>
4、fda批准了il2用于转移性肾细胞癌(1992年)和转移性黑色素瘤(1998年)(tang等人,cytokine:x1[细胞激素：x1](2019)100001)。然而，由于在以高剂量(如抗肿瘤免疫疗法所需要)给予时的毒性不良反应、以及其刺激细胞毒性效应t细胞和treg细胞两者的能力，il2免疫疗法尚未被广泛采用。在抗癌il2免疫疗法中，treg细胞的活化是不想要的作用，因为treg细胞可能减弱针对肿瘤抗原的效应t细胞反应(natalia等人,trends immunol.[免疫学趋势]2015年12月；36(12):763-777)。
5、因此，在il2免疫疗法中仍然需要毒性不良反应减少的il2突变蛋白。
技术实现思路
1、为了上述目的，本文提供了降低、破坏或消除与il2rα的结合的新颖的il2突变蛋白。在一些实施方式中，如与seq id no:1的野生型il2相比，il2突变蛋白包含含有氨基酸取代c125v或c125s的氨基酸序列。
2、在一些实施方式中，il2突变蛋白与seq id no:1、2或3中所示的氨基酸序列具有至少80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的同一性。
3、在一些实施方式中，如与seq id no:2或3中所示的氨基酸序列相比，il2突变蛋白包含一或多个选自由以下构成的群组的氨基酸取代：k8、i28、r38、f42、k43、k49、e61、e62、e68、和l72。
4、在一些实施方式中，如与seq id no:2或3中所示的氨基酸序列相比，il2突变蛋白包含一或多个选自由以下构成的群组的氨基酸取代：k8r、i28t、r38d/r38a/r38q/r38t/r38e/r38n、f42e/f42r/f42a/f42h/f42q、k43e/k43g/k43s/k43a/k43r/k43p/k43q、k49e、e61r、e62t/e62g、k64m、e68g/e68v/e68s/e68k/e68a和l72s/l72k。
5、在一些实施方式中，如与seq id no:2或3中所示的氨基酸序列相比，il2突变蛋白包含一或多个选自由以下构成的群组的氨基酸取代：i28t、r38d/r38a/r38q/r38t/r38e/r38n、k43e/k43g/k43s/k43a/k43r/k43p/k43 q、e61r和e68g/e68v/e68s/e68k/e68a；或者
6、r38d/r38a/r38q/r38t/r38e/r38n、f42e/f42r/f42a/f42h/f42q和k43e/k43g/k43s/k43a/k43r/k43p/k43q；或者
7、r38d/r38a/r38q/r38t/r38e/r38n、f42e/f42r/f42a/f42h/f42q、k43e/k43g/k43s/k43a/k43r/k43p/k43q、k49e；或者
8、r38d/r38a/r38q/r38t/r38e/r38n、f42e/f42r/f42a/f42h/f42q、k43e/k43g/k43s/k43a/k43r/k43p/k43q和e68g/e68v/e68s/e68k/e68a；或者
9、f42e/f42r/f42a/f42h/f42q和k43e/k43g/k43s/k43a/k43r/k43p/k43q；或者
10、k8r、r38d/r38a/r38q/r38t/r38e/r38n、f42e/f42r/f42a/f42h/f42q、k43e/k43g/k43s/k43a/k43r/k43p/k43q、e62t/e62g、e68g/e68v/e68s/e68k/e68a和l72s/l72k；或者
11、r38d/r38a/r38q/r38t/r38e/r38n、e62t/e62g、e68g/e68v/e68s/e68k/e68a和l72s/l72k；或者
12、r38d/r38a/r38q/r38t/r38e/r38n、f42e/f42r/f42a/f42h/f42q、k49e、k64m、k43e/k43g/k43s/k43a/k43r/k43p/k43q和e68g/e68v/e68s/e68k/e68a。
13、在一些实施方式中，如与seq id no:2或3中所示的氨基酸序列相比，il2突变蛋白包含氨基酸取代
14、r38d、k43e/k43g和e61r；
15、r38a、f42e和k43g；
16、r38e、f42q和k43q；
17、r38a、f42e、k43g、e62t、e68g和l72s/l72k；
18、r38a、f42e、k43g、和e68g；
19、r38q/r38t、f42r/f42a、k43s/k43a、和e68g/e68v；
20、r38a/r38t/r38e、e62t、e68s和l72k；
21、e62t/e62g、e68g和l72s；
22、r38e/r38n、k43r和i28t；
23、r38e/r38n、k43r、i28t和e68k；
24、f42h/f42q和k本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种IL2突变蛋白，其中如与SEQ ID NO:1的野生型IL2相比，降低或消除与IL2Rα的结合的IL2突变蛋白包含含有氨基酸取代C125V或C125S的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的IL2突变蛋白，其中如与SEQ ID NO:2或3相比，该IL2突变蛋白包含一或多个选自由以下构成的群组的突变：K8、I28、R38、F42、K43、K49、E61、E62、K64、E68和L72。
3.如权利要求1或2所述的IL2突变蛋白，其中如与SEQ ID NO:2或3中所示的氨基酸序列相比，该IL2突变蛋白包含一或多个选自由以下构成的群组的氨基酸取代：K8R、I28T、R38D/R38A/R38Q/R38T/R38E/R38N、F42E/F42R/F42A/F42H/F42Q、K43E/K43G/K43S/K43A/K43R/K43P/K43Q、K49E、E61R、E62T/E62G、K64M、E68G/E68V/E68S/E68K/E68A和L72S/L72K。
4.如权利要求1-3中任一项所述的IL2突变蛋白，其中如与SEQ ID NO:2
5.如权利要求1-4中任一项所述的IL2突变蛋白，其中如与SEQ ID NO:2或3中所示的氨基酸序列相比，该IL2突变蛋白包含氨基酸取代R38D、K43E/K43G和E61R；
6.如权利要求1-6中任一项所述的IL2突变蛋白，其中如与SEQ ID NO:2或3中所示的氨基酸序列相比，该IL2突变蛋白包含氨基酸取代R38D、K43E和E61R；
7.如权利要求1-6中任一项所述的IL2突变蛋白，其中如与SEQ ID NO:2或3中所示的氨基酸序列相比，该IL2突变蛋白包含氨基酸取代N88D、V91D/V91A/V91E和/或I92T。
8.如权利要求1-7中任一项所述的IL2突变蛋白，其中如与SEQ ID NO:2或3中所示的氨基酸序列相比，该IL2突变蛋白包含氨基酸取代
9.如权利要求1-8中任一项所述的IL2突变蛋白，其中该IL2突变蛋白与SEQ ID NO:7-23中任一所示的氨基酸序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％的同一性。
10.如权利要求1-9中任一项所述的IL2突变蛋白，其中该IL2突变蛋白与SEQ ID NO:7-23中任一所示的氨基酸序列的差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸。
11.如权利要求1-10中任一项所述的IL2突变蛋白，其中该IL2突变蛋白包含SEQ IDNO:7-23中任一所示的氨基酸序列。
12.如权利要求1-11中任一项所述的IL2突变蛋白，其中该IL2突变蛋白能够降低与IL2Rβγ异二聚体的亲和结合。
13.如权利要求1-12中任一项所述的IL2突变蛋白，其中该IL2突变蛋白能够通过降低或消除与IL2Rα的结合来降低与IL2Rαβγ异三聚体的亲和结合。
14.如权利要求1-13中任一项所述的IL2突变蛋白，其中该IL2突变蛋白能够减少由IL2Rαβγ异三聚体活化的调节性T细胞的免疫反应。
15.如权利要求1-14中任一项所述的IL2突变蛋白，其中该IL2突变蛋白与IL2Rβγ异二聚体结合的KD(亲和常数)大于0.1E-11M、大于9.9E-11M或大于1E-10M。
16.如权利要求1-15中任一项所述的IL2突变蛋白，其中该IL2突变蛋白与IL2Rα结合的KD(亲和常数)大于1.0E-12M。
17.如权利要求1-16中任一项所述的IL2突变蛋白，其中该IL2突变蛋白改善热稳定性，其中Tm值不小于50℃、不小于55℃、不小于60℃或不小于65℃。
18.一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸编码如权利要求1-17中任一项所述的IL2突变蛋白。
19.一种分离的载体，该分离的载体包含如权利要求18所述的分离的多核苷酸。
20.一种宿主细胞，该宿主细胞包含如权利要求18所述的分离的多核苷酸、或如权利要求19所述的分离的载体，该宿主细胞包含HEK293细胞。
21.一种融合蛋白，该融合蛋白包含如权利要求1-17中任一项所述的IL2突变蛋白，该IL2突变蛋白与Fc区融合，可选地，...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种il2突变蛋白，其中如与seq id no:1的野生型il2相比，降低或消除与il2rα的结合的il2突变蛋白包含含有氨基酸取代c125v或c125s的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的il2突变蛋白，其中如与seq id no:2或3相比，该il2突变蛋白包含一或多个选自由以下构成的群组的突变：k8、i28、r38、f42、k43、k49、e61、e62、k64、e68和l72。
3.如权利要求1或2所述的il2突变蛋白，其中如与seq id no:2或3中所示的氨基酸序列相比，该il2突变蛋白包含一或多个选自由以下构成的群组的氨基酸取代：k8r、i28t、r38d/r38a/r38q/r38t/r38e/r38n、f42e/f42r/f42a/f42h/f42q、k43e/k43g/k43s/k43a/k43r/k43p/k43q、k49e、e61r、e62t/e62g、k64m、e68g/e68v/e68s/e68k/e68a和l72s/l72k。
4.如权利要求1-3中任一项所述的il2突变蛋白，其中如与seq id no:2或3中所示的氨基酸序列相比，该il2突变蛋白包含一或多个选自由以下构成的群组的氨基酸取代：i28t、r38d/r38a/r38q/r38t/r38e/r38n、k43e/k43g/k43s/k43a/k43r/k43p/k43q、e61r和e68g/e68v/e68s/e68k/e68a；或者
5.如权利要求1-4中任一项所述的il2突变蛋白，其中如与seq id no:2或3中所示的氨基酸序列相比，该il2突变蛋白包含氨基酸取代r38d、k43e/k43g和e61r；
6.如权利要求1-6中任一项所述的il2突变蛋白，其中如与seq id no:2或3中所示的氨基酸序列相比，该il2突变蛋白包含氨基酸取代r38d、k43e和e61r；
7.如权利要求1-6中任一项所述的il2突变蛋白，其中如与seq id no:2或3中所示的氨基酸序列相比，该il2突变蛋白包含氨基酸取代n88d、v91d/v91a/v91e和/或i92t。
8.如权利要求1-7中任一项所述的il2突变蛋白，其中如与seq id no:2或3中所示的氨基酸序列相比，该il2突变蛋白包含氨基酸取代
9.如权利要求1-8中任一项所述的il2突变蛋白，其中该il2突变蛋白与seq id no:7-23中任一所示的氨基酸序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％的同一性。
10.如权利要求1-9中任一项所述的il2突变蛋白，其中该il2突变蛋白与seq id no:7-23中任一所示的氨基酸序列的差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸。
11.如权利要求1-10中任一项所述的il2突变蛋白，其中该il2突变蛋白包含seq idno:7-23中任一所示的氨基酸序列。
12.如权利要求1-11中任一项所述的il2突变蛋白，其中该il2突变蛋白能够降低与il2rβγ异二聚体的亲和结合。
13.如权利要求1-12中任一项所述的il2突变蛋白，其中该il2突变蛋白能够通过降低或消除与il2rα的结合来降低与il2rαβγ异三聚体的亲和结合。
14.如权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：许翔，赵金凤，吴志浩，卢宏韬，
申请(专利权)人：科望苏州生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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