【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子标记领域，具体涉及一种新型活细胞微管蛋白探针，还涉及该探针的构建方法和应用。
技术介绍
1、微管是细胞骨架的重要组成部分，主要由α和β微管蛋白二聚体组装而成。它们在细胞内形成细长的管状结构，直径约为25nm，具有极高的稳定性和动态性。微管不仅为细胞提供机械支持，保持细胞形状，还参与细胞内物质的运输、细胞分裂以及细胞信号传递等多种关键生物过程。
2、微管的功能与其动态特性密切相关。微管能够通过加速或减缓二聚体的聚合和解聚来快速响应细胞的需求，这种动态变化对于细胞的正常功能至关重要。此外，微管还被视为药物开发的重要靶点。许多抗癌药物(如紫杉醇和长春新碱)通过影响微管的动态稳定性来抑制癌细胞的增殖。标记微管的状态和功能变化，有助于评估这些药物的效果，并为个性化治疗提供依据。因此，标记活细胞中的微管蛋白对于理解其动态行为和功能至关重要。
3、现有的标记技术主要包括使用荧光蛋白融合表达、化学荧光探针以及小分子染料等方法。其中，将荧光蛋白(如gfp、mcherry等)基因融合到微管蛋白(如α和β微管蛋白)的编码序列中，允许研究人员通过荧光显微镜实时观察微管的动态变化，然而荧光蛋白的融合可能影响微管蛋白的正常功能，尤其是在高表达情况下，可能导致微管的组装和解聚速率发生变化，从而影响细胞的生理状态和实验结果；化学荧光探针则需要针对不同的细胞优化染色条件，过量或不足的探针使用可能导致信号失真；小分子染料通常具有较强的光漂白现象，随着时间推移，荧光信号可能会迅速减弱，限制了长时间观察的能力，而且染料的细胞渗
4、spast基因位于2p22.3，包含17个外显子，编码的蛋白spastin含有616个氨基酸，在许多真核生物中都有表达，是一种关键的微管相关蛋白。spastin蛋白主要包含4个结构域，分别是：aaa-atp酶区域、微管结合域(microtubule-binding domain,mbd)、微管相互作用与运输域(microtubule interacting and trafficking domain,mit)、和疏水结构域(hydrophobic domain,hd)。spastin通过与微管的结合，促进微管的解聚，从而调节微管的动态稳定性、影响微管的动态平衡。这一作用在细胞分裂期间尤为重要，它有助于纺锤体的组装和染色体的正确分配。此外，spastin在神经元突起的形成中发挥关键作用，确保神经细胞正常功能和发育。
5、因此，现在亟需一种新型的标记活细胞微管蛋白的方法，能够克服现有技术的不足，并提供更低的细胞干扰和更长时间的动态观察能力，将具有重要的科学意义和应用潜力。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种新型活细胞微管蛋白探针；本专利技术的目的之二在提供所述新型活细胞微管蛋白探针标记活细胞微管中的应用；本专利技术的目的之三在于提供所述新型活细胞微管蛋白探针的制备方法。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、1、一种新型活细胞微管蛋白探针，所述探针由egfp和spastin蛋白1-325位氨基酸组成，所述spastin蛋白1-325位氨基酸如seq id no.10所示。
4、本专利技术优选的，所述egfp的核苷酸序列如seq id no.7所示。
5、本专利技术优选的，所述spastin蛋白1-325位的核苷酸序列如seq id no.9所示。
6、2、所述新型活细胞微管蛋白探针标记活细胞微管中的应用。
7、3、所述新型活细胞微管蛋白探针的制备方法，以pegfp-puro为模板，seq id no.1和seq id no.2所示序列为引物扩增egfp；再用seq id no.3和seq id no.4为引物，hek-293t细胞的cdna为模版扩增spastin蛋白1-325位编码的核苷酸，然后通过同源重组将egfp和spastin蛋白1-325位编码的核苷酸连入载体pcdna3.1-dsred的xbai和noti酶切位点处。
8、本专利技术的有益效果在于：一种新型活细胞微管蛋白探针，spastin蛋白与微管有较强的结合亲和力，通过截短体版本，使spastin蛋白失去了微管剪切的功能，减少了对细胞其他生理过程的干扰，并能够减少对其他非特异性结构的结合，提高探针的定位精度。这意味着它可以更精准地定位到微管的特定区域或亚结构，减少背景干扰。
9、克服了现有标记面临细胞功能干扰、光漂白以及毒性等问题，为微管动态变化及其在各种生物学过程中的角色深入理解提供了工具。
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1.一种新型活细胞微管蛋白探针，其特征在于：所述探针由EGFP和SPASTIN蛋白1-325位氨基酸组成，所述SPASTIN蛋白1-325位氨基酸如SEQ ID NO.10所示。
2.根据权利要求1所述的新型活细胞微管蛋白探针，其特征在于：所述EGFP的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
3.根据权利要求1所述的新型活细胞微管蛋白探针，其特征在于：所述SPASTIN蛋白1-325位的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。
4.权利要求1～3任一项所述新型活细胞微管蛋白探针标记活细胞微管中的应用。
5.权利要求1～3任一项所述新型活细胞微管蛋白探针的制备方法，其特征在于：以pEGFP-puro为模板，SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列为引物扩增EGFP；再用SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4为引物，HEK-293T细胞的cDNA为模版扩增SPASTIN蛋白1-325位编码的核苷酸，然后通过同源重组将EGFP和SPASTIN蛋白1-325位编码的核苷酸连入载体PcDNA3.1-DsRED的XbaI和
...【技术特征摘要】
1.一种新型活细胞微管蛋白探针，其特征在于：所述探针由egfp和spastin蛋白1-325位氨基酸组成，所述spastin蛋白1-325位氨基酸如seq id no.10所示。
2.根据权利要求1所述的新型活细胞微管蛋白探针，其特征在于：所述egfp的核苷酸序列如seq id no.7所示。
3.根据权利要求1所述的新型活细胞微管蛋白探针，其特征在于：所述spastin蛋白1-325位的核苷酸序列如seq id no.9所示。
4.权利要求1～3任一项所述新型活细胞...
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