【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药成分的制备及含量测定，涉及党参，具体为一种党参中菊粉型果聚糖的含量测定方法。
技术介绍
1、党参为桔梗科植物党参 codonopsis pilosula（franch.）nannf.、素花党参 c.pilosula nannf. var. modesta（nannf.）l.t.shen或川党参 c.tangshen oliv.的干燥根，其性平味甘，具有补中益气、健脾益肺、生津止渴等功效。党参化学成分主要包括多糖类、聚炔类、三萜类、苯丙素类及生物碱类等。其中，党参多糖是党参发挥药理活性的主要活性成分之一，具有免疫调节、抗氧化、抗衰老、抗炎以及调节肠道菌群等多种药理作用。
2、2020年版《中国药典》对党参的性状、鉴别、检查和浸出物等进行了规定，但缺乏含量测定。党参多糖是党参中的重要活性成分，其中菊粉型果聚糖是党参多糖的主要组成部分，其含量的高低对党参药材的质量至关重要。目前关于党参总多糖的含量测定研究相对较多，主要采用的方法是苯酚-硫酸法，但是该方法为比色法，在实际操作中误差较大，干扰较多，重现性差。
3、目前对党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法研究未见报道。
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供一种党参中菊粉型果聚糖含量测定方法，用于在党参药材和饮片的质量评价以及含党参复方制剂的质量评价。
2、本专利技术是采用如下技术方案实
3、一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，包括如下步骤：
4、步骤（1）、党参总多糖的制备
5、党参药材采用甲醇-乙酸乙酯提取液提取，过滤得药渣，收集甲醇-乙酸乙酯提取液并回收甲醇-乙酸乙酯；
6、药渣采用蒸馏水回流提取，经减压浓缩至1/4～1/3体积，然后乙醇沉淀，之后离心去上清，沉淀用乙醚、乙酸乙酯、丙酮、无水乙醇依次洗涤，最后冷冻干燥，得到党参总多糖样品，并称重、记录重量。
7、进一步优选的，甲醇-乙酸乙酯提取液中甲醇和乙酸乙酯的体积比为：1:0.2～1:0.5；党参药材和甲醇-乙酸乙酯提取液的料液比为1:5～1:8。
8、药渣和蒸馏水的料液比为1:5～1:10；乙醇采用60%～90%乙醇；离心转速为1000～1500转/分钟。
9、步骤（2）、党参菊粉型果聚糖对照品的制备
10、党参总多糖采用乙醇溶解，然后通过5000da分子量级超滤膜进行多次反复超滤，蠕动泵转速10～20rpm，滤过液采用高效凝胶渗透色谱进行检测为单一色谱峰时，确定菊粉型果聚糖对照品制备完全，将此超滤液经浓缩冻干，获得党参菊粉型果聚糖对照品。
11、进一步优选的，乙醇采用30%～60%乙醇，溶解到50mg/l～100mg/l。
12、党参菊粉型果聚糖对照品经1h-nmr、13c-nmr、dept鉴定为菊粉型果聚糖，采用1h-nmr确定其聚合度。
13、步骤（3）、通过hpgpc结合示差检测器建立对照品质量-色谱峰面积的线性曲线方程；
14、精密称取1.0mg的党参菊粉型果聚糖对照品，溶解于1.0ml超纯水中，即得1mg/ml的对照品溶液；
15、精密吸取对照品溶液，使用0.45μm微孔滤膜进行过滤；分别取10.0μl、8.0μl、6.0μl、4.0μl、2.0μl进行进样，进行hpgpc分析，记录峰面积和保留时间，并以质量（x）和峰面积（y）绘制标准曲线，得线性回归方程y=6.27×107x－3545.75，r2=0.99994。
16、hpgpc色谱条件：色谱条件为安捷伦1260 hplc系统，色谱柱：7.8mm×30cm，10μm；检测器：示差折光检测器；流动相：超纯水；流速0.3ml/min；柱温：35℃；检检测器温度：35℃。
17、步骤（4）、对不同产地党参中的菊粉型果聚糖含量进行测定
18、对待测的党参样品，每批次取3份，制备供试品溶液；然后进行hpgpc分析（hpgpc色谱条件同步骤（3）），记录对照品相应位置的色谱峰峰面积并计算其含量；
19、其中，供试品溶液的制备方法如下：1）待测的党参样品采用甲醇-乙酸乙酯提取液按料液比1:5～1:8提取，过滤得药渣，收集甲醇-乙酸乙酯提取液并回收甲醇-乙酸乙酯；其中甲醇-乙酸乙酯提取液中甲醇和乙酸乙酯比例为1:0.2～1:0.5；2）药渣按料液比1:5～1:10蒸馏水回流提取，提取3次，合并3次提取，经减压浓缩至1/4～1/3体积、60%～90%乙醇沉淀、1000～1500转/分钟离心15～30分钟，去上清，沉淀用乙醚、乙酸乙酯、丙酮、无水乙醇依次洗涤3次，冷冻干燥，得到党参总多糖样品，并称重、记录重量；3）精密称取党参总多糖样品，溶解于超纯水中，即得供试品溶液。
20、本专利技术方法能够实现党参中菊粉型果聚糖的定量的机理为，首先是党参中菊粉型果聚糖含量相对较高，总多糖hpgpc色谱中可显示其吸收峰并能够准确进行峰面积积分；其次党参菊粉型果聚糖对照品可准确制备获得。目前报道党参中含有的多糖种类很多，而其它类型多糖不符合上述两个方面的要求，所以无法进行定量。现有文献中也有党参菊粉型果聚糖的报道，但其只涉及化学，不涉及定量，而且文献所报道的党参菊粉型果聚糖由于所采用的制备方法不同，其聚合度也不同，无法实现菊粉型果聚糖对照品和总多糖中的菊粉型果聚糖的一一对应。因此本专利技术首先创新了党参总多糖制备-菊粉型果聚糖制备-标准曲线制定三个连贯过程，而实现党参中菊粉型果聚糖的准确定量。
21、本专利技术设计合理，该方法在党参药材和饮片质量评价以及含党参的复方制剂中菊粉型果聚糖含量测定方面，具有很好的实际应用价值。
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1.一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（1）具体为：党参采用甲醇-乙酸乙酯提取液提取，过滤得药渣，收集甲醇-乙酸乙酯提取液并回收甲醇-乙酸乙酯；
3.根据权利要求2所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（1）中，甲醇-乙酸乙酯提取液中甲醇和乙酸乙酯的体积比为：1:0.2～1:0.5；党参和甲醇-乙酸乙酯提取液的料液比为1:5～1:8。
4.根据权利要求3所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（1）中，药渣和蒸馏水的料液比为1:5～1:10；乙醇采用60%～90%乙醇；离心转速为1000～1500转/分钟。
5.根据权利要求1所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（2）具体为：党参总多糖采用乙醇溶解，然后通过5000Da分子量级超滤膜进行多次反复超滤，蠕动泵转速10～20rpm，滤过液采用高效凝胶渗透色谱进行检测为单一色谱峰时，确定菊粉型果聚糖对照品制备完全，将
6.根据权利要求5所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（2）中，乙醇采用30%～60%乙醇，溶解到50mg/L～100mg/L。
7.根据权利要求6所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（2）中，党参菊粉型果聚糖对照品经1H-NMR、13C-NMR、DEPT鉴定，采用1H-NMR确定其聚合度。
8.根据权利要求1所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（3）具体为：精密称取1.0mg的党参菊粉型果聚糖对照品，溶解于1.0mL超纯水中，即得1mg/mL的对照品溶液；
9.根据权利要求8所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：HPGPC色谱条件：色谱条件为安捷伦1260 HPLC系统，色谱柱：7.8mm×30cm，10μm；检测器：示差折光检测器；流动相：超纯水；流速0.3ml/min；柱温：35℃；检检测器温度：35℃；进样量10.0μL。
10.根据权利要求1所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（4）具体为，对待测的党参样品，每批次取3份，制备供试品溶液；然后进行HPGPC分析，记录对照品相应位置的色谱峰峰面积并计算其含量；
...【技术特征摘要】
1.一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（1）具体为：党参采用甲醇-乙酸乙酯提取液提取，过滤得药渣，收集甲醇-乙酸乙酯提取液并回收甲醇-乙酸乙酯；
3.根据权利要求2所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（1）中，甲醇-乙酸乙酯提取液中甲醇和乙酸乙酯的体积比为：1:0.2～1:0.5；党参和甲醇-乙酸乙酯提取液的料液比为1:5～1:8。
4.根据权利要求3所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（1）中，药渣和蒸馏水的料液比为1:5～1:10；乙醇采用60%～90%乙醇；离心转速为1000～1500转/分钟。
5.根据权利要求1所述的一种党参中菊粉型果聚糖含量的测定方法，其特征在于：步骤（2）具体为：党参总多糖采用乙醇溶解，然后通过5000da分子量级超滤膜进行多次反复超滤，蠕动泵转速10～20rpm，滤过液采用高效凝胶渗透色谱进行检测为单一色谱峰时，确定菊粉型果聚糖对照品制备完全，将此超滤液经浓缩冻干，获得党参菊粉型果聚糖对照品。
6.根据权利要求5...
【专利技术属性】
技术研发人员：李建宽，高建平，谢兴芳，吉姣姣，
申请(专利权)人：山西医科大学，
类型：发明
国别省市：
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