【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药检测和医学影像处理的，尤其涉及一种靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，以及这种纳米探针作为制备治疗胰腺癌药物的应用。
技术介绍
1、胰腺癌是一种发病隐匿，进展迅速，治疗效果及预后极差的消化道恶性肿瘤。40岁以上好发，男性比女性多见。目前作为常见癌症死因的第4位，胰腺癌的5年生存率低于10％。手术切除是胰腺癌有效的治疗方法，但由于胰腺癌早期发现困难，又缺乏有效的筛查指标，绝大多数患者在确诊时已处于中晚期，丧失手术机会，且放化疗效果不佳，是预后最差的恶性肿瘤之一。因此，亟需寻找针对胰腺癌新型诊疗方案。
2、近年来，免疫治疗成为肿瘤治疗的一个新突破，可以提高部分肿瘤治疗疗效。主要方法包括：免疫检查点治疗法，溶瘤病毒法，肿瘤疫苗法等，其中免疫检查点治疗具有其独特的优势。免疫检查点是人体免疫系统中起保护作用的分子，可防止t细胞过度激活导致的炎症损伤。但肿瘤细胞可过度表达免疫检查点，从而逃脱免疫监视与杀伤，促进自身生长。免疫检查点治疗(immune checkpoint therapy，ict)是通过抑制该分子活性，重新激活t细胞对肿瘤的免疫应答，进而达到抗肿瘤的目的。新近研究发现，单独应用ict治疗胰腺癌效果并不佳。首要原因是胰腺癌周围存在大量致密纤维基质，限制了靶向药物渗透和发挥作用，同时纤维基质也是胰腺癌免疫逃逸机制的重要载体。因此，如何构建新型载药平台，突破基质屏障、增加肿瘤区域药物浓度，逆转免疫微环境，更有效地发挥免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors
技术实现思路
1、为克服现有技术的缺陷，本专利技术要解决的技术问题是提供了一种靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其能够实现对vista(v-domain ig suppressor of tcell activation，t细胞活化的v域免疫抑制因子，是胰腺癌中特异性高表达的免疫检查点)高表达的胰腺癌细胞的声动力治疗及mri成像一体化，实现对于胰腺癌的靶向sdt(sonodynamic therapy，声动力治疗)治疗，同时对于治疗效果进行可视化评估，该纳米探针具有良好的生物安全性，在细胞水平实现了靶向胰腺癌的sdt可视化治疗，在动物水平实现了胰腺癌的sdt联合免疫治疗。
2、本专利技术的技术方案是：一种靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，包括以下步骤：
3、(1)使用溶剂热法制备fe3o4纳米粒子；
4、(2)制备fe3o4@sio2纳米粒子：采用teos在碱性条件下水解作为硅源，在fe3o4表面包裹二氧化硅，构建fe3o4@sio2纳米粒子；
5、(3)制备fe3o4@sio2@tio2纳米粒子：在tbot水解缩合的基础上，在fe3o4@sio2表面包裹二氧化钛tio2，合成了fe3o4@sio2@tio2纳米粒子；
6、(4)采用碱性水热腐蚀辅助结晶法制备fe3o4@tio2；
7、(5)将vista抗体通过静电吸附的方法修饰在纳米探针上，最后成功构建花环状fe3o4@tio2@vistamab纳米探针。
8、本专利技术通过溶剂热法制备fe3o4纳米粒子，修饰sio2层和tio2层，sio2层刻蚀后吸附vistamab，构建花环状fe3o4@tio2@vistamab纳米探针，采用生物透射电镜、磁共振成像、紫外分光光度计等对探针进行表征，证实该探针能够实现对vista高表达的胰腺癌细胞的声动力治疗及mri成像一体化，实现对于胰腺癌的靶向sdt治疗，同时对于治疗效果进行可视化评估，该纳米探针具有良好的生物安全性，在细胞水平实现了靶向胰腺癌的sdt可视化治疗，在动物水平实现了胰腺癌的sdt联合免疫治疗。
9、还提供了fe3o4@tio2@vistamab纳米探针应用在制备治疗胰腺癌的药物中。
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1.靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中，将1.62g六水合氯化铁、
3.根据权利要求2所述的靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，将45mg Fe3O4纳米粒子加入至80mL无水乙醇、16mL去离子水和2.0mL的28wt％浓氨水混合在三颈圆底烧瓶中，超声作用15min，在5min内缓慢滴加0.4mL TEOS，在连续150rpm机械搅拌，室温下反应10h，用磁铁分离收集核壳结构的Fe3O4@SiO2纳米粒子，然后分别用去离子水和乙醇洗涤3次。
4.根据权利要求3所述的靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，将制得的150mg Fe3O4@SiO2纳米粒子在200mL无水乙醇中重新分散，与0.9mL、28wt％的浓氨溶液混合，超声作用15min，在5min内滴加2.0mL的TBOT，在45℃连续机械搅拌下反应24h，产物用磁铁分离和收
5.根据权利要求4所述的靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中，将制得的50mg
6.根据权利要求5所述的靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中，通过物理吸附负载免疫检查点抑制剂VISTAmAb，将Fe3O4@TiO2与VISTAmAb以质量比为10:1混合在无菌水中，250rpm机械搅拌12h后离心得到Fe3O4@TiO2@VISTAmAb纳米探针。
7.根据权利要求6所述的靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其特征在于：制备得到的Fe3O4@TiO2@VISTAmAb纳米探针平均水合粒径为225.3nm，Zeta电位为-28.9mV，r2/r1值32.03。
8.Fe3O4@TiO2@VISTAmAb纳米探针的应用，其特征在于：应用在制备治疗胰腺癌的药物中。
9.根据权利要求8所述的Fe3O4@TiO2@VISTAmAb纳米探针的应用，其特征在于：基于该探针进行US照射和超声波辐射，疏松胰腺癌致密纤维基质，促进肿瘤微血管生成，改善免疫抑制微环境。
10.根据权利要求9所述的Fe3O4@TiO2@VISTAmAb纳米探针的应用，其特征在于：其通过磁共振成像MRI获取图像，应用在制备胰腺癌早筛可视化产品中。
...【技术特征摘要】
1.靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中，将1.62g六水合氯化铁、
3.根据权利要求2所述的靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，将45mg fe3o4纳米粒子加入至80ml无水乙醇、16ml去离子水和2.0ml的28wt％浓氨水混合在三颈圆底烧瓶中，超声作用15min，在5min内缓慢滴加0.4ml teos，在连续150rpm机械搅拌，室温下反应10h，用磁铁分离收集核壳结构的fe3o4@sio2纳米粒子，然后分别用去离子水和乙醇洗涤3次。
4.根据权利要求3所述的靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，将制得的150mg fe3o4@sio2纳米粒子在200ml无水乙醇中重新分散，与0.9ml、28wt％的浓氨溶液混合，超声作用15min，在5min内滴加2.0ml的tbot，在45℃连续机械搅拌下反应24h，产物用磁铁分离和收集，然后分别用去离子水和乙醇洗涤3次。
5.根据权利要求4所述的靶向胰腺癌免疫检查点诊疗一体纳米探针...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪建华，任文智，洪露，徐开蔚，曾澳，
申请(专利权)人：厦门大学附属第一医院厦门市第一医院，厦门市红十字会医院，厦门市糖尿病研究所，
类型：发明
国别省市：
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