【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞治疗领域，具体涉及一种高表达igf-1的脐带间充质干细胞的建立方法及其在卵巢早衰中的应用。
技术介绍
1、早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,poi)又称卵巢早衰，是指女性在40岁以前出现卵巢功能减退，主要表现为月经异常(闭经、月经稀发或频发)、促卵泡生成激素水平升高(fsh>25u/l)、雌激素水平波动性下降。poi病理生理学特征为：卵巢内卵泡过早耗竭。poi常导致一些严重后果，如心血管疾病、骨质疏松症、认知能力下降和情绪障碍的风险，患者生活质量降低。
2、对于poi患者，目前仍没有保护和恢复卵巢功能的有效方法。激素补充疗法是治疗poi患者主要策略，但不能有效改善卵巢功能；而且激素治疗会增加肿瘤发生、发展的风险。因此，临床急需一种安全有效的改善卵巢功能的新方法来代替传统治疗。
3、大量研究表明脐带间充质干细胞(huc-msc)具有免疫调节作用，可降低卵巢组织中炎症反应，改善卵巢组织的微环境，可改善卵巢功能，如：huc-msc可以调节细胞亚群，抑制th1、th17亚群的分化，促进treg亚群的增殖；huc-msc可抑制炎症因子tnf-α的分泌，促进抗炎因子il-10的分泌。但大量研究表明早发性卵巢功能不全患者卵巢中除了炎症反应外，还存在卵巢中颗粒细胞凋亡，进而导致卵巢早衰。
4、研究表明：igf-1是种抗细胞凋亡蛋白，可促进胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1receptor,i
5、对于poi患者，目前仍没有保护和恢复卵巢功能的有效方法。激素补充疗法是治疗poi患者主要策略，但不能有效改善卵巢功能；而且激素治疗会增加肿瘤发生、发展的风险。因此，临床急需一种安全有效的改善卵巢功能的新方法来代替传统治疗。
技术实现思路
1、为解决现有技术中存在的上述技术问题，本专利技术提供一种高表达igf-1的脐带间充质干细胞的建立方法及其在卵巢早衰中的应用。
2、本专利技术具体技术方案如下：
3、本专利技术的第一个目的是提供一种高表达igf-1的脐带间充质干细胞的构建方法，所述方法为将igf-1基因转染脐带间充质干细胞，使脐带间充质干细胞高表达igf-1。
4、进一步的，所述方法包括以下步骤：
5、s1、获得igf-1基因；
6、s2、将igf-1基因转入慢病毒包装质粒；
7、s3、将s2获得的igf-1基因慢病毒转染脐带间充质干细胞，获得所述高表达igf-1的脐带间充质干细胞。
8、进一步的，所述igf-1基因由人血液样本dna中扩增得到。
9、进一步的，扩增引物为：
10、上游引物：5’-gcagtcttccaacccaa-3’(seq id no.1)；
11、下游引物：5’-acatctccagcctcctta-3’(seq id no.2)。
12、进一步的，所述慢病毒包装质粒选自puc57、pgp、pvsvg、plvx-ef1a。
13、本专利技术的第二个目的是提供采用前述构建方法得到的高表达igf-1的脐带间充质干细胞，构建得到的脐带间充质干细胞高表达igf-1。
14、本专利技术的第三个目的是提供前述高表达igf-1的脐带间充质干细胞在制备治疗卵巢早衰的药物中的应用。
15、本专利技术有益效果在于：
16、为获得可大量分泌igf-1的huc-msc，使huc-msc既具有旁分泌功能，又具有免疫调节作用，通过两种途径改善卵巢早衰。本专利技术构建igf-1基因慢病毒载体，并将其转染huc-msc，通过western blot检测细胞中igf-1蛋白的表达情况，以验证igf-1基因能否在huc-msc中高表达。
17、成功构建高表达igf-1的huc-msc后，为确认其对卵巢早衰动物模型的影响，构建卵巢早衰动物模型，通过腹腔注射igf,以及卵巢原位注射huc-msch和igf-1huc-msc，通过比较各实验组卵巢早衰动物模型的药效学指标，评价igf-1huc-msc对卵巢早衰动物模型的影响。
18、本专利技术将igf-1基因转染huc-msc，使huc-msc高表达igf-1，使huc-msc分泌大量的igf-1。通过huc-ms免疫调节作用，改善卵巢功能，同时通过其分泌的igf-1,发挥抗颗粒细胞凋亡作用。通过以上两种作用协同发挥对卵巢早衰的治疗作用。
19、因此，将igf-1基因通过慢病毒转染方式整合到huc-msc基因组中，并使huc-msc具有高表达igf-1的能力，构建早发性卵巢功能不全动物模型，卵巢内注射高表达igf-1的huc-msc，通过huc-msc的免疫调节作用以及igf-1蛋白的抗凋亡作用共同改善卵巢功能，从而早发性卵巢功能不全发挥治疗作用。
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1.一种高表达IGF-1的脐带间充质干细胞的构建方法，其特征在于，所述方法为将IGF-1基因转染脐带间充质干细胞，使脐带间充质干细胞高表达IGF-1。
2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述IGF-1基因由人血液样本DNA中扩增得到。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，扩增引物为：
5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述慢病毒包装质粒选自pGP、pVSVG、PLVX-EF1a。
6.采用权利要求1所述构建方法得到的高表达IGF-1的脐带间充质干细胞，其特征在于，构建得到的脐带间充质干细胞高表达IGF-1。
7.权利要求6所述高表达IGF-1的脐带间充质干细胞在制备治疗卵巢早衰的药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种高表达igf-1的脐带间充质干细胞的构建方法，其特征在于，所述方法为将igf-1基因转染脐带间充质干细胞，使脐带间充质干细胞高表达igf-1。
2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述igf-1基因由人血液样本dna中扩增得到。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵颖，黄彤舸，寇晓林，杨盼盼，李荣巧，尹奕凡，陈冈，
申请(专利权)人：江苏拓弘康恒医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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