【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫学领域，具体涉及一种抑制性tnfr2单域抗体及其应用。
技术介绍
1、免疫调节紊乱是肿瘤、自身免疫疾病以及病毒感染等疾病的重要特征，也是导致相关疾病产生的重要因素。人体免疫调节是通过诸多基因、蛋白及其相关信号通路等因素共同实现。而通过药物调节免疫反应是治疗炎症、肿瘤等疾病的一大策略。近年来，免疫检查点抑制和car-t疗法革命性改变了肿瘤的临床治疗，其在恶性不可切除肿瘤的治疗效果较传统放化疗相比提升巨大。然而，现有的免疫疗法存在初始耐药、获得性耐药甚至用药后发生疾病超进展等情况，因此免疫疗法仍只能彻底治愈极少部分患者。因此，寻找新策略增强抗肿瘤免疫反应，对提升免疫疗法的治疗效果有着十分重要的意义。cd4+foxp3+调节性t细胞(treg细胞)被认为是导致现有免疫治疗反应率不高和产生耐药性的主要原因之一。treg细胞属于cd4t细胞中具备强大免疫抑制功能的细胞亚群，也是肿瘤免疫抑制微环境的重要构成之一。
2、tnfr2对于treg细胞的免疫抑制功能具备决定性作用。tnfr2可以表达于髓系来源的免疫抑制细胞、干细胞等免疫抑制细胞，也可以表达于多种肿瘤细胞，因此，靶向tnfr2可能产生“一石二鸟”的抗肿瘤效果。而单独使用tnfr2抗体或者其与药物的联用可能会进一步推动更加安全有效的免疫疗法的出现。tnfr2抗体能够阻断tnf与tnfr2的结合，并且阻断tnf导致的treg细胞增殖。同时，tnfr2抗体也被发现能够直接抑制肿瘤细胞的生长。临床前动物肿瘤模型显示，抑制tnfr2能够显著抑制treg细胞在肿瘤组
3、单域抗体(nanobody，nb)，即重链单域抗体vhh，是存在于羊驼和鲨鱼体内的一种较为特殊的抗体形式。克隆其可变区后得到的只由一个重链可变区组成的单域抗体，是目前可以得到的具有完整功能的稳定的可结合抗原的最小单位。单域抗体的分子量仅为传统抗体的1/10左右，其能够展现出与传统抗体相当的选择性与亲和力。单域抗体除了能被哺乳动物细胞表达体系表达之外，还可以使用酵母甚至原核生物表达体系来表达，且仍能具有较高活性。而且，由于其分子量小，其对肿瘤组织具备更好的渗透性，携带放射性同位素的单域抗体能够更加精确实现对于某个靶点在特定组织(例如肿瘤组织)的表达的测定。而经过结构改造的单域抗体亦可具备通过血脑屏障的能力。因此，基于单域抗体具有稳定性高、水溶性好、人源化简单、靶向性高、穿透性强等特点，其能够在免疫实验、诊断与治疗中，发挥着超乎想象的巨大功能。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提供了一种抑制性tnfr2单域抗体及其应用。本专利技术中的抑制性tnfr2单域抗体能有效抑制tnf与tnfr2的结合。同时，其还具有降低treg细胞的比例并抑制treg细胞增殖的效果。且该抗体的分子量仅为传统抗体的十分之一，在有效降低生产成本和难度的情况下，还能够有效透过血脑屏障，相比于传统抗体在中枢神经系统疾病的治疗具备更大的潜力。
2、本专利技术的第一个方面，提供了一种抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段，所述抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段与tnfr2特异性结合。
3、在本专利技术的一些实施方式中，所述抑制性tnfr2单域抗体与tnf竞争性结合tnfr2。
4、在本专利技术的一些实施方式中，所述抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段包含与rftldyyaig(seq id no:2)、cfsiiggsty(seq id no:3)和mgyscnppgydy(seq id no:4)所示的氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％或95％的序列同一性的cdr区。
5、在本专利技术的一些实施方式中，所述抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段包含与rftldyyaig(seq id no:2)、cfsiiggsty(seq id no:3)和mgyscnppgydy(seq id no:4)所示的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的cdr区。
6、在本专利技术的一些实施方式中，所述抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段包含与rftldyyaig(seq id no:2)、cfsiiggsty(seq id no:3)和mgyscnppgydy(seq id no:4)所示的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的cdr区。
7、在本专利技术的一些实施方式中，所述抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段包含与rftldyyaig(seq id no:2)、cfsiiggsty(seq id no:3)和mgyscnppgydy(seq id no:4)所示的氨基酸序列具有75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的cdr区。
8、在本专利技术的一些实施方式中，所述抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段包含：
9、a)seq id no：1所示的氨基酸序列；或
10、b)与seq id no：1所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，所述氨基酸序列保有tnfr2特异性结合活性且含有seq id no:2-4所示的氨基酸序列。
11、在本专利技术的一些实施方式中，b)中所述的氨基酸序列与seq id no：1所示的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
12、在本专利技术的一些实施方式中，b)中所述的氨基酸序列与seq id no：1所示的氨基酸序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。
13、在本专利技术的一些实施方式中，变体序列在保持该氨基酸的原始功能和/或所需功能的范围内对特定氨基酸序列进行的突变(删除、替换、修饰和/或添加)，或可以解释为不排除上述突变。
14、本专利技术的第二个方面，提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码本专利技术第一个方面所述的抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段。
15、在本专利技术的一些实施方式中，所述核酸分子还包括有非功能性修饰序列或基团。
16、在本专利技术的一些实施方式中，所述非功能性修饰序列包括标签序列、荧光蛋白序列和抗性序列。
17、在本专利技术的一些实施方式中，所述基团本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抑制性TNFR2单域抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抑制性TNFR2单域抗体或其抗原结合片段与TNFR2特异性结合；
2.根据权利要求1所述的激动性TNFR2单域抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抑制性TNFR2单域抗体或其抗原结合片段包含与RFTLDYYAIG(SEQ ID NO:2)、CFSIIGGSTY(SEQ ID NO:3)和MGYSCNPPGYDY(SEQ ID NO:4)所示的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的CDR区。
3.根据权利要求1或2所述的抑制性TNFR2单域抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抑制性TNFR2单域抗体或其抗原结合片段包含：
4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-3中任一项所述的抑制性TNFR2单域抗体或其抗原结合片段。
5.一种表达子，其特征在于，所述表达者包含权利要求4所述的核酸分子。
6.一种转化子，其特征在于，所述转化子中包含权利要求4所述的核酸分子和/或权利要求5中所述的表达子。
7.一种药物组合物，其特征在于，所述药
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中还包括第二活性物质；
9.权利要求1-3中任一项所述的抑制性TNFR2单域抗体或其抗原结合片段在制备TNFR2过表达相关疾病治疗药物中的应用；
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述癌症包括存在TNFR2过表达的癌症；
...【技术特征摘要】
1.一种抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段与tnfr2特异性结合；
2.根据权利要求1所述的激动性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段包含与rftldyyaig(seq id no:2)、cfsiiggsty(seq id no:3)和mgyscnppgydy(seq id no:4)所示的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的cdr区。
3.根据权利要求1或2所述的抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抑制性tnfr2单域抗体或其抗原结合片段包含：
4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分...
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