【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及4,6-α-葡萄糖基转移酶合成，尤其涉及一种新型4,6-α-葡萄糖基转移酶及其制备方法和应用。
技术介绍
1、糖尿病、心血管疾病和肥胖症发病率的持续增加与长期食用含有高快速消化淀粉的食物有关。慢消化淀粉和抗性淀粉含量较高的食物在生物体内的消化速度低于普通淀粉，属于低升糖指数食品，有利于控制进餐前后血糖浓度的稳态。异麦芽聚糖是一种具有益生元特性的新型可溶性膳食纤维，可在4,6-α-葡萄糖基转移酶催化下，由线性(α1→6)-葡聚糖链连接到淀粉片段的非还原端，从而形成包含(α1→6)糖苷键结构的淀粉，尤其具有长链和线性(α1→4)葡聚糖链为底物时转化得到的异麦芽聚糖产物中的(α1→6)键的比例最高，而淀粉酶对这种结构的异麦芽聚糖的水解能力较差，因此是一种应用前景广阔的新型膳食纤维。
2、4,6-α-葡萄糖基转移酶(4,6-α-gts)属于gh70家族，催化中心的(β/α)8桶由a、b、c三个结构域和4个保守结构域组成。根据细菌来源、产物特异性和保守结构域结构，4,6-α-gt可分为gtfb-like、gtfc-like和gtfd-like三个亚家族。gtfc能裂解α-1,4键并合成连续α-1,6键的低聚异麦芽糖(immo)，另外还发现gtfc酶的产物具有交替的α-1,4和α-1,6键。因此，进一步提高4,6-α-葡萄糖基转移酶活性，降低变性淀粉的消化率是非常有价值的。
3、基于此，提供一种具有高活性的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶具有重要的现实意义。
技术实现思路>
1、本专利技术的目的在于提供一种新型4,6-α-葡萄糖基转移酶及其制备方法和应用，旨在解决现有技术中4,6-α-葡萄糖基转移酶活性低，合成异麦芽聚糖效率低的技术问题。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法，包括以下步骤：
4、以4,6-α-葡萄糖基转移酶的氨基酸序列为模板，进行检索，得到第一氨基酸序列；
5、将所述第一氨基酸序列后构建到质粒中进行转化与表达，得到表达产物；
6、将所述表达产物进行纯化，得到所述新型4,6-α-葡萄糖基转移酶，将其命名为pigt糖基转移酶。
7、进一步的，所述4,6-α-葡萄糖基转移酶的氨基酸序列优选采用ncbi登录号为akm18207的氨基酸序列。
8、进一步的，所述检索优选为在uniport蛋白质数据库中进行blastp搜索。
9、进一步的，所述第一氨基酸序列优选为来自propioniferax innocua的1条注释为潜在4,6-α-糖基转移酶的序列，genbank id为fb460_0880。
10、进一步的，所述质粒为pcold-tf质粒。
11、进一步的，所述表达的条件为：在15℃、180rpm条件下进行培养，0.2mmol/l iptg浓度下诱导20h。
12、本专利技术还提供了上述技术方案所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法得到的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶。
13、本专利技术还提供了上述技术方案所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法得到的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶或所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶在合成异麦芽聚糖以及糖尿病、心血管疾病和肥胖症预防中的应用。
14、与现有技术相比，本专利技术的技术方案具有如下的有益效果：
15、以直连淀粉为底物时，本专利技术所述的pigt糖基转移酶的活力为2239.42u/μmol，具有高活性；其次，本专利技术得到的pigt糖基转移酶可以催化直链淀粉产生抗α-淀粉酶水解性能更优越的异麦芽聚糖，应用时相比其他转移酶具有更为显著的效果，可进一步治疗或者预防糖尿病、心血管疾病和肥胖症等同类型疾病。
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1.一种新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法，其特征在于，所述4,6-α-葡萄糖基转移酶的氨基酸序列采用NCBI登录号为AKM18207的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法，其特征在于，所述检索为在Uniport蛋白质数据库中进行BLASTp搜索。
4.根据权利要求1所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法，其特征在于，所述第一氨基酸序列为来自Propioniferax innocua的1条注释为潜在4,6-α-糖基转移酶的序列，Genbank ID为FB460_0880。
5.根据权利要求1所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法，其特征在于，所述质粒为pCold-TF质粒。
6.根据权利要求1所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法，其特征在于，所述表达的条件为：在15℃、180rpm条件下进行培养，0.2mmol/LIPTG浓度下诱导20h。
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8.权利要求1～6任一项所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法得到的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶或权利要求6所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶在合成异麦芽聚糖以及糖尿病、心血管疾病和肥胖症预防中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法，其特征在于，所述4,6-α-葡萄糖基转移酶的氨基酸序列采用ncbi登录号为akm18207的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法，其特征在于，所述检索为在uniport蛋白质数据库中进行blastp搜索。
4.根据权利要求1所述的新型4,6-α-葡萄糖基转移酶的制备方法，其特征在于，所述第一氨基酸序列为来自propioniferax innocua的1条注释为潜在4,6-α-糖基转移酶的序列，genbank id为fb460_0880。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘新育，李新源，李佳思，林晖，陈红歌，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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