【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于发酵，具体涉及一种降低琥珀酸发酵过程中乙酸的方法。
技术介绍
1、琥珀酸是含有四个碳的二元有机羧酸，是一种重要的化工原料；琥珀酸可产生酸味，可以用于调味料、酱油等领域，其可以用作防腐剂、ph值调节剂、助溶剂，还可以用来合成解毒剂、利尿剂、镇静剂等，具有广泛的应用领域。
2、琥珀酸可以通过化学合成法生产，但是对环境污染较为严重，并且生产成本较高；随着社会的发展，发酵法成为了新兴的琥珀酸制备方法，其发酵法是利用细菌、酵母等微生物，以糖类为原料，通过微生物在常温常压下进行生产，发酵法避免了对石化原料的依赖，减少了化学合成工艺对环境的污染，具有环保、设备简单，成本低等优点；
3、因此，发酵法是目前生产琥珀酸的主要方法，由于大肠杆菌具有遗传特性较清楚、易培养、能实现目的基因的高效表达等特征，大肠杆菌得到广泛的应用；但是大肠杆菌生长时会产生乙酸，乙酸的产生和积累不仅影响菌体生长，还会抑制产物的合成。
4、cn117004658a公开了一种采用发酵法生产琥珀酸的生产工艺，具体公开了以大肠杆菌作为生产菌株，先进行微好氧发酵，再进行厌氧发酵，在厌氧发酵过程中，通入二氧化碳作为补充碳源，最终得到琥珀酸；
5、该专利提高了琥珀酸的产量，但是乙酸含量较高，琥珀酸的产量仍然处于较低水平。
技术实现思路
1、为了解决现有技术存在的技术问题，本专利技术提供了一种降低琥珀酸发酵过程中乙酸的方法，其可以有效降低琥珀酸发酵过程中乙酸的含量，并且琥珀酸的产量
2、为了解决上述技术问题，本专利技术采取以下技术方案：
3、一种降低琥珀酸发酵过程中乙酸的方法，包括摇瓶培养、种子培养以及发酵培养，具体如下：
4、1.摇瓶培养
5、取平板上的酵母菌接种于摇瓶培养基中进行培养，培养温度为35-37℃，培养时间为14-16h，摇瓶频率为174-185rpm，培养结束后制得摇瓶培养液；
6、所述摇瓶培养基，由以下成分组成：胰蛋白胨5.7-6.2g/l、nacl 4.3-4.7g/l、酵母粉4.7-5.3g/l，ph值为7.0。
7、2.种子培养
8、将摇瓶培养液按照体积百分比为0.8-1.0%的接种量接种于种子培养基中进行种子培养，培养时间为13-15h，温度为35-37℃，转速为305-314rpm，压力为0.05-0.07mpa，风量为7-9l/min，培养过程中通过氨水控制ph值为6.5-6.7，制得种子培养液；
9、所述种子培养基由以下成分组成：葡萄糖26-30g/l、磷酸二氢钾14-16/l、酵母粉11-13g/l、硫酸铵3.5-4.5g/l、七水硫酸镁1.4-2.0g/l、柠檬酸1.3-1.5g/l、辅助混合液2.2-2.6ml/l、维生素b1 1.2-1.4mg/l、核黄素0.022-0.026mg/l、生物素0.04-0.06mg/l；
10、所述辅助混合液的各成分为：硼酸1.4-1.6g/l、钼酸钠2.4-2.8g/l、六水硫酸镍3.1-3.3g/l、一水硫酸锰4-6g/l。
11、3.发酵培养
12、将种子培养液按照4-6%的接种量接种于发酵培养基中进行发酵培养，先是进行好氧发酵，控制发酵温度为35-37℃，通气量为1.6-1.9vvm，转速为460-480rpm，溶氧量为13-17%，控制ph值为6.5-6.7，流加质量浓度为53-55%的葡萄糖溶液使得葡萄糖含量控制在9-12g/l，发酵培养13-15h后转为厌氧发酵，通入二氧化碳，控制通气量为0.8-1.2vvm，发酵周期为36.3-37.9h，制得发酵培养液；
13、所述发酵培养基，由以下成分组成：葡萄糖19-21g/l、酵母粉3-5g/l、磷酸二氢钾10-12g/l、柠檬酸3.0-3.2g/l、硫酸铵2.6-3.0g/l、七水硫酸镁1.0-1.4g/l、七水硫酸亚铁58-63mg/l、维生素b1 0.7-0.9mg/l；
14、所述发酵培养，在发酵培养过程中流加发酵助剂，具体为：
15、在发酵至第10h时，向发酵培养罐中流加发酵助剂一，流加速度为0.07-0.09ml/h/l，直至发酵结束；
16、在发酵至第24h时，向发酵培养罐中流加发酵助剂二，流加速度为0.12-0.14ml/h/l，直至发酵结束；
17、所述发酵助剂一的成分为，六水合氯化钴0.3-0.5g/l、七水硫酸锌6-8g/l、叶酸1.6-1.8mg/l、生物素0.03-0.06g/l；
18、所述发酵助剂二的成分为，烟酰胺5-7g/l、半胱氨酸2.0-2.2g/l、酪氨酸1.8-2.3g/l。
19、所述酵母菌为毕赤酵母，分类命名为 pichia sp.，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为gdmcc no:64917，保藏日期为2024年07月26日。
20、与现有技术相比，本专利技术取得了以下有益效果：
21、1.本专利技术通过流加葡萄糖的方法，在发酵中后期保持较低葡萄糖的摄入速率有利于抑制乙酸、苹果酸等副产物的形成，保持菌株的增殖效率，避免了“采用高浓度初糖发酵，菌体前期生长受到抑制，导致乙酸大量积累，琥珀酸的产量较低；采用低浓度初糖发酵，不利于菌株增殖，进而影响产物的合成，导致发酵周期的延长”的缺陷；
22、本专利技术在发酵培养的前期流加发酵助剂一，其中的六水合氯化钴和七水硫酸锌可以作为酶的激活剂，生物素作为生长因子，可以促进菌体的生长和琥珀酸的合成，其与叶酸结合，促进细胞的分裂生长以及氨基酸的合成，从而可以降低副产物的生成，提高琥珀酸的产量；在发酵中后期加入发酵助剂二，其中的烟酰胺可以为菌体生长和发酵产酸提供氮元素，促进微生物的代谢，维持菌株的生长活力，提高产酸性能，其与半胱氨酸和酪氨酸结合，提高了琥珀酸产量的同时，降低了乙酸和苹果酸的积累量；
23、2.采用本专利技术的方法制得的发酵培养液，琥珀酸含量高达59.1-60.4g/l，乙酸含量低至0.30-0.65g/l，苹果酸含量为0.20-0.23g/l。
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1.一种降低琥珀酸发酵过程中乙酸的方法，其特征在于，所述方法包括摇瓶培养、种子培养以及发酵培养；
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【技术特征摘要】
1.一种降低琥珀酸发酵过程中乙酸的方法，其特征在于，所述方法包括摇瓶培养、种子培养以及发酵培养；
2.根据权利要求1所述的一种降低琥珀酸发酵过程中乙酸的方法，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的一种降低琥珀酸发酵过程中乙酸的方法，其特征在于，
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘振龙，劳永民，赵亮，付本航，
申请(专利权)人：山东天宜鸿达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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