【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及骨髓间充质干细胞培养，具体涉及一种高渗刺激下提高骨髓间充质干细胞生物学效能的制备方法及其应用，旨在提高其移植后的存活率，进而改善其对于放射性肺损伤的治疗效果。
技术介绍
1、随着科技的发展，核能和核技术已经在疾病治疗中得到广泛运用，在为我们生活带来便利的同时，也存在着许多的问题。在胸部肿瘤的放射性治疗中，人员受到照射后会发生多种急、慢性放射病，其中放射性肺损伤因其发生率高，致死率高而受到广泛关注。
2、目前临床上对于此类损伤的治疗方法仍然是以药物为主，通过减轻炎症、清除氧化自由基来达到一定的作用，但是因为引起损伤的机制较为复杂，且易受多种因素的影响，所以存在着造成药物相关性肺炎、过敏、肺损伤修复效果不明显等诸多问题，因此寻找有效的治疗方式显得十分迫切。
3、为解决这一问题，再生医学提供了一个潜在的策略，即基于间充质干细胞(mesenchymal stem cells,mscs)具有多向分化潜能、免疫原性低、再生能力强、低致瘤性、无伦理争议且易于基因转染等特点，将其运用到针对放射性肺损伤的治疗当中去，且已有相关报道证实其存在一定的治疗作用。但是放射性肺损伤由于电离辐射的作用，会在局部产生大量的自由基且造成微环境的缺血缺氧，造成局部炎症的同时导致高渗透压环境，严重影响间充质干细胞的归巢能力和在受损组织的停留，放射性肺损伤的治疗效果不明显，限制了bmsc的功能。此外，临床上一般需要多次输注骨髓间充质干细胞来维持治疗或增强疗效，然而间充质干细胞体外扩增能力有限，同时供体的年龄和健康也影响了自体干细胞
4、目前对于提高骨髓间充质干细胞的生物学效能有多种解决办法，如：基因改造、缺氧预处理、改良培养基等等，但是大都存在操作复杂、原料成本高等问题，寻找一种简单、可行、成本低廉的优化间充质干细胞的分离培养方法显得十分重要。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种高渗刺激下提高骨髓间充质干细胞生物学效能的方法，解决了现有技术中骨髓间充质干细胞移植体内后在受照射肺组织中存活率不高的问题，从而为细胞移植和组织工程等应用提供更好的治疗效果。
2、本专利技术的第一目的在于提供了一种高渗刺激的骨髓间充质干细胞的制备方法，包括如下步骤：s1、dmem/f-12完全培养基中加入氯化钠溶液配置高渗培养基体系；s2、选择第三代骨髓间充质干细胞，细胞融合至70-80％时，更换高渗培养基；s3、更换培养基后，在恒温的细胞培养箱中培养，获得高渗刺激处理后的骨髓间充质干细胞。
3、作为本专利技术所述制备高渗培养基的优选实施方式，所述培养基是在完全培养基中加入无菌的氯化钠高渗溶液。
4、进一步地，所述培养基是在总体积为15ml的完全培养基中加入30-275ul的无菌的氯化钠溶液，其氯化钠终浓度为0.16-0.26m。
5、进一步地，所述培养基是在总体积为15ml的完全培养基中加入95ul的无菌的的氯化钠溶液，其氯化钠终浓度为0.18m。
6、进一步地，所述完全培养基为含有10％胎牛血清，1％青霉素链霉素的dmem/f-12培养液。
7、进一步地，所述无菌的的氯化钠溶液的氯化钠浓度为5m。
8、进一步地，所述骨髓间充质干细胞为c57bl/6小鼠股骨的骨髓间充质干细胞。
9、第二目的，本专利技术提供了上述高渗刺激的骨髓间充质干细胞在治疗放射性肺损伤中的应用。
10、所述放射性肺损伤可以为来自意外事故中的损伤，或者放疗病人所遭受的损伤。
11、一般而言，本文所指的损伤一般是指胸部局部照射剂量低于25gy。
12、相对于现有技术，本专利技术具有以下优势：
13、本专利技术提供了一种高渗刺激的骨髓间充质干细胞的制备方法及其应用，通过高渗预处理提高了干细胞的增殖能力、抗衰老能力、抗活性氧能力，对放射性肺损伤修复治疗的效果更佳。
14、本专利技术解决目前骨髓间充质干细胞预处理诱导方法复杂繁琐的问题，本专利技术的方法使用的外源性物质氯化钠溶液无毒无害且获取简单、成本低廉，不需应用特殊的器械或复杂的细胞工程技术，操作简单，可在临床中推广，有利于开展标准化生产平台。为骨髓间充质干细胞的体外增殖提供了新途径。
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1.一种高渗刺激的骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、DMEM/f-12完全培养基中加入氯化钠溶液配置高渗培养基体系；S2、选择第三代骨髓间充质干细胞，细胞融合至70-80％时，更换高渗培养基；S3、更换培养基后，在恒温的细胞培养箱中培养，获得高渗刺激处理后的骨髓间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高渗培养基是在完全培养基中加入无菌的高浓度的氯化钠溶液，使其成为高渗培养基。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述完全培养基为含有10％胎牛血清，1％青霉素链霉素的DMEM/f-12培养液。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，无菌的高浓度的氯化钠溶液浓度为5M。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述骨髓间充质干细胞为C57BL/6小鼠股骨的骨髓间充质干细胞。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高渗培养基中氯化钠的终浓度为0.16-0.26M。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高渗培养基中氯化钠的终浓度为0.18M
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高渗刺激时间为24-96h。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高渗刺激时间为72h。
10.一种根据权利要求1至9任一项所述的方法制备得到的骨髓间充质干细胞在制备治疗放射性肺损伤药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种高渗刺激的骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：s1、dmem/f-12完全培养基中加入氯化钠溶液配置高渗培养基体系；s2、选择第三代骨髓间充质干细胞，细胞融合至70-80％时，更换高渗培养基；s3、更换培养基后，在恒温的细胞培养箱中培养，获得高渗刺激处理后的骨髓间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高渗培养基是在完全培养基中加入无菌的高浓度的氯化钠溶液，使其成为高渗培养基。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述完全培养基为含有10％胎牛血清，1％青霉素链霉素的dmem/f-12培养液。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，无菌的高浓度的...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘虎，张儒仪，范博帅，姜可儿，吴润琳，尉荣兵，张澄，袁雪菲，杜尘，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学，
类型：发明
国别省市：
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