【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物提取，具体涉及一种鲜地龙提取物及其提取方法和应用、鲜地龙提取物制剂。
技术介绍
1、地龙，为我国传统中药之一，具抗凝、促纤溶和改善血液循环等作用。地龙的功效：清热、息风、平喘、通络、利尿。现代药理研究也证明，地龙确有解热、镇静、抗惊厥、平喘、降压等多种药理作用，如可以治疗高热惊劂；治疗哮喘及哮喘性支气管炎，治疗高血压病。地龙有降压作用，对原发性高血压有效，治疗躁狂型的精神病，治疗风湿性关节炎和中风后遗症。
2、临床上，其提取液有较好的抗凝效果，能降低血液粘稠度，抑制血栓形成，主要用于防治脑缺血性疾病和心血管疾病。以往研究表明，地龙抗凝血活性物质主要成分有蚓纤维蛋白溶解酶、蚓激酶、蚓胶原酶及游离的氨基酸。
3、中国专利技术专利公开号cn115869341a公开了一种地龙提取物在制备抗疲劳产品中的应用及利用该提取物的药物、保健品和食品，该专利技术从赤子爱胜蚓采用有机溶剂回流法提取的地龙提取物在发挥抗疲劳功效为独立使用，该专利技术的地龙提取物能显著延长小鼠负重游泳时间，同时能显著降低血乳酸含量和尿素氮含量，同时提高肝糖原含量，具有较好的抗疲劳作用，适用于抗疲劳药物、保健品或食品的制备，但该地龙提取物的制备过程同样使用了有机溶剂石油醚、氯仿和甲醇，处理成本高。
4、中国另一专利技术专利公开号cn114246885a公开了一种地龙提取物的制备方法及其应用，具体配备步骤如下：步骤一，新鲜地龙处理：(1)取新鲜地龙用清水冲洗掉地龙体表的杂质，然后投入温水中洗净地龙体表粘液；(2)将地龙浸泡
5、中国又一专利技术专利公开号cn108354949a公开了一种地龙提取物的制备方法及其应用，该制备方法包括使用无水乙醇浸渍粗提、mci柱初步纯化、葡聚糖凝胶lh-20纯化和索氏提取法脱色除臭等步骤；该方法避免了地龙提取物在水提取过程中长时间在水中浸泡而容易滋生细菌，产生次级代谢产物的问题，且有效成分多；分离效果佳，得到的地龙提取物溶于水呈微黄色且无腥臭味，在抗氧化、抗黑色素瘤细胞以及抗炎等方面具有较强活性且质量稳定，但该制备方法纯化过程复杂，不利于工业化生产。
6、鉴于此，本领域亟需研制出一种制备鲜地龙提取物收率更高、工艺简单、不采用有机溶剂且成本低的鲜地龙提取物的提取方法。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术存在的问题，提供了一种鲜地龙提取物及其提取方法和应用、鲜地龙提取物制剂。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种鲜地龙提取物的提取方法，包括以下步骤：
4、(1)先将鲜地龙浸泡于缓冲溶液中，匀浆，过滤，得粗酶液；
5、(2)再将粗酶液与硫酸铵混合，取沉淀，透析，离心，收集上清液；
6、(3)最后将上清液依次经阴离子交换柱和凝胶柱纯化，收集洗脱液，干燥，即得，
7、其中，步骤(1)中所述缓冲溶液为体积比为5-8:1-2的tris盐酸盐和海藻糖溶液的混合物。
8、更优选地，所述缓冲溶液为体积比为6-8:1.5-2的tris盐酸盐和海藻糖溶液的混合物。
9、进一步优选地，所述缓冲溶液为体积比为4:1的tris盐酸盐和海藻糖溶液的混合物。
10、优选地，所述tris盐酸盐的ph＝7.4-7.8，所述海藻糖溶液的质量浓度为10-15％。
11、更优选地，所述tris盐酸盐的ph＝7.6-7.8，所述海藻糖溶液的质量浓度为12-15％。
12、进一步优选地，所述tris盐酸盐的ph＝7.8，所述海藻糖溶液的质量浓度为15％。
13、优选地，所述鲜地龙和缓冲溶液的质量体积比为1kg:3-7l。
14、更优选地，所述鲜地龙和缓冲溶液的质量体积比为1kg:5l。
15、优选地，步骤(1)中所述浸泡的温度为20-35℃，浸泡的时间为30-60min。
16、更优选地，所述浸泡的温度为25℃，浸泡的时间为40min。
17、优选地，步骤(1)中所述匀浆的速度为8000-10000rpm，匀浆的时间为20-30min。
18、更优选地，所述匀浆的速度为10000rpm，匀浆的时间为25min。
19、优选地，步骤(1)中所述过滤采用截留分子量为30k-50k da的超滤膜。
20、更优选地，所述过滤采用截留分子量为30k da的超滤膜。
21、优选地，步骤(2)中所述硫酸铵在粗酶液中的质量浓度为30-40％。
22、更优选地，所述硫酸铵在粗酶液中的质量浓度为35-40％。
23、进一步优选地，所述硫酸铵在粗酶液中的质量浓度为38％。
24、优选地，步骤(2)中所述混合的温度为2-5℃，混合的时间为4-6h，所述混合结束后需以5000-8000rpm离心15-25min。
25、进一步优选地，所述混合的温度为4℃，混合的时间为6h。
26、优选地，步骤(2)中所述透析的过程包括向沉淀中加入ph＝7.6-7.8的磷酸缓冲液，得混合物，再于ph＝7.6-7.8的磷酸缓冲液中进行透析。
27、优选地，步骤(2)中所述离心的速度为6000-8000rpm，离心的时间为15-25min。
28、更优选地，所述离心的速度为8000rpm，离心的时间为20min。
29、优选地，步骤(3)中所述阴离子交换柱的型号为330弱碱性环氧阴离子交换柱。
30、优选地，步骤(3)中所述凝胶柱包括葡聚糖凝胶柱和q凝胶柱。
31、优选地，所述葡聚糖凝胶柱的型号为sephadex g-25或sephadex g-75。
32、优选地，所述q凝胶柱的型号为q-sepharose 6ff或q-beads 6ff。
33、优选地，步骤(3)中所述纯化的过程包括先将上清液经0.45μm滤头过滤除杂，再将5-10倍柱体积的上清液依次上样于阴离子交换柱和凝胶柱，并用0.3-0.9m的氯化钠溶液进行洗脱。
34、优选地，步骤(3)中所述洗脱液需通过截留分子量为2k-3k da的超滤膜进行浓缩，所述干燥为冷冻干燥或真空干燥。
35、本专利技术还提供了上述提取方法提取得到的鲜地龙提取物。
36、本专利技术还提供了一种鲜地龙提取物制剂，包含上述提取方法提取得到的鲜地龙提取物。
37、本专利技术还提供了上述提取方法提取得到的鲜地龙本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鲜地龙提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述Tris盐酸盐的pH＝7.4-7.8，所述海藻糖溶液的质量浓度为10-15％，所述鲜地龙和缓冲溶液的质量体积比为1kg:3-7L。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述浸泡的温度为20-35℃，浸泡的时间为30-60min，所述匀浆的速度为8000-10000rpm，匀浆的时间为20-30min，所述过滤采用截留分子量为30k-50k Da的超滤膜。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述硫酸铵在粗酶液中的质量浓度为30-40％，所述混合的温度为2-5℃，混合的时间为4-6h，所述混合结束后需以5000-8000rpm离心15-25min，所述透析的过程包括向沉淀中加入pH＝7.6-7.8的磷酸缓冲液，得混合物，再于pH＝7.6-7.8的磷酸缓冲液中进行透析。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述阴离子交换柱的型号为330弱碱性环氧阴离子交换柱，所述
6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述葡聚糖凝胶柱的型号为SephadexG-25或Sephadex G-75，所述Q凝胶柱的型号为Q-Sepharose 6FF或Q-Beads 6FF。
7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述纯化的过程包括先将上清液经0.45μm滤头过滤除杂，再将5-10倍柱体积的上清液依次上样于阴离子交换柱和凝胶柱，并用0.3-0.9M的氯化钠溶液进行洗脱，所述洗脱液需通过截留分子量为2k-3k Da的超滤膜进行浓缩，所述干燥为冷冻干燥或真空干燥。
8.一种如权利要求1-7任一项所述的提取方法提取得到的鲜地龙提取物。
9.一种鲜地龙提取物制剂，其特征在于，包含权利要求1-7任一项所述的提取方法提取得到的鲜地龙提取物或权利要求8所述的鲜地龙提取物。
10.一种如权利要求1-7任一项所述的提取方法提取得到的鲜地龙提取物或权利要求8所述的鲜地龙提取物在制备含鲜地龙提取物的药品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种鲜地龙提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述tris盐酸盐的ph＝7.4-7.8，所述海藻糖溶液的质量浓度为10-15％，所述鲜地龙和缓冲溶液的质量体积比为1kg:3-7l。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述浸泡的温度为20-35℃，浸泡的时间为30-60min，所述匀浆的速度为8000-10000rpm，匀浆的时间为20-30min，所述过滤采用截留分子量为30k-50k da的超滤膜。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述硫酸铵在粗酶液中的质量浓度为30-40％，所述混合的温度为2-5℃，混合的时间为4-6h，所述混合结束后需以5000-8000rpm离心15-25min，所述透析的过程包括向沉淀中加入ph＝7.6-7.8的磷酸缓冲液，得混合物，再于ph＝7.6-7.8的磷酸缓冲液中进行透析。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述阴离子交换柱的型号为330弱碱...
【专利技术属性】
技术研发人员：李超，
申请(专利权)人：云南永安制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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