【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及啤酒检测，具体涉及一种检测啤酒腐败菌的培养基及其制备方法、应用。
技术介绍
1、啤酒行业因其生产流程长、生产环节复杂，容易进入除生产酵母菌以外的有害微生物，啤酒有害菌的存在给啤酒工业造成巨大的损害，尤其是对啤酒质量具有危害作用、且不需要有氧条件繁殖的啤酒腐败菌；虽然啤酒中含有的啤酒花化合物可以充当质子离子载体和分散跨膜ph梯度来发挥抗菌作用，阻止革兰氏阳性菌(包括大多数乳酸菌)在啤酒中生长，但是腐败菌携带的hora和horc还赋予其啤酒花抗性，这对啤酒微生物的控制提出了新的挑战，只有快速准确的检测出啤酒中的腐败菌，才能解决和减少啤酒腐败菌，进而提高啤酒的品质。
2、现有技术中，在造成啤酒腐败变质的厌氧性微生物中，乳酸菌被认为是主要的破坏者，乳酸菌常用的检测方法为分子生物学方法和培养基法。其中，分子生物学法的检测是运用16srrna基因序列分析方法在分子生物学水平上对其进行检测鉴定，但是该方法对技术人员要求高，操作困难。培养基法一般采用nbb-a固体培养基对啤酒滤样进行厌氧培养，通过观察nbb-a固体培养基的颜色变化来判断是否为乳酸菌阳性，但是，啤酒特殊的环境、尤其是啤酒花化合物的存在，可能会导致一些乳酸菌在短时间内难以生长至检测限，因此，培养基法可能会漏检一些生长困难的乳酸菌；这些特点导致乳酸菌的定性检测缺少一个准确性高、技术要求低、便于推广的方法。另外，啤酒中除了乳酸菌之外，还含有多种复杂的其它啤酒腐败菌，其生长会产生过多的乙酸、丁酸或乳酸等多种严重影响啤酒风味的物质，使得啤酒发生污染和变质，但是，现
技术实现思路
1、鉴于
技术介绍
中存在的技术问题，本申请提供了一种检测啤酒腐败菌的培养基及其制备方法、应用，旨在解决现有技术中啤酒腐败菌检测方法难以检测多种复杂腐败菌、且检测精准度差的技术问题。
2、第一方面，本申请实施例提供了一种检测啤酒腐败菌的培养基，每1l培养基中包括如下组分：蛋白胨8～12g、牛肉膏8～12g、酵母粉2～6g、k2hpo41～3g、柠檬酸二铵1～3g、三水乙酸钠7～10g、吐温80 0.5～1.5ml、mgso4·7h2o0.3～0.5g、mnso40.3～0.5g、适量的葡萄糖、果糖、苹果酸、丙酮酸、过氧化氢酶、甲基红-溴甲酚绿。
3、本申请实施例的技术方案中，通过在培养基中加入苹果酸与丙酮酸，起到了调控腐败菌hora和horc基因的作用，增加了其啤酒花化合物抗性，进而提高了腐败菌在同样环境下的生长能力，避免了现有培养基法存在漏检一些生长困难有害菌的问题，增加了检测的精准度。
4、在一些实施例中，所述培养基中苹果酸与丙酮酸的含量分别为0.1～0.3g，优先为0.2g。所述培养基的基础液为去离子水与啤酒的混合液，所述去离子水与啤酒的体积比为1:(0.8～1.2)。所述培养基中过氧化氢酶的浓度为50～80u/ml。所述葡萄糖与果糖含量分别为8～12g。所述甲基红-溴甲酚绿由0.1～0.3g/l的甲基红与0.2～0.4g/l溴甲酚绿混合配制而成。
5、该实施例中，通过在培养基中添加葡萄糖和果糖，增加了腐败菌生长代谢消耗的碳源种类，为多种腐败菌提供了生长能源。同时过氧化氢酶的添加，还激活了啤酒腐败菌的生长特性，使部分在啤酒苛刻环境中处于可代谢不可生长状态的腐败菌，变为可代谢可生长的状态；三水乙酸钠的加入可抑制大肠杆菌的生长，减少检测结果假阳性的可能。
6、第二方面，本申请实施例提供了一种检测啤酒腐败菌的培养基的制备方法，将蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、k2hpo4、柠檬酸二铵、三水乙酸钠、吐温80、mgso4·7h2o、mnso4、葡萄糖、果糖、苹果酸、丙酮酸、甲基红-溴甲酚绿、去离子水及啤酒按不同含量进行混合，并进行灭菌处理，再加入过氧化氢酶，制得检测啤酒腐败菌的培养基。
7、在本申请实施例的技术方案中，通过采用灭菌的啤酒代替培养基中的部分去离子水，为啤酒腐败菌提供了与原始生长相近的环境；培养基从源头上提高了多种啤酒腐败菌的生长速度，扩大了检测范围，使得该检测方法在48h内可在无纺布表面观察到菌落的变化，缩短了啤酒腐败菌的检测时间。
8、第三方面，本申请实施例提供了一种检测啤酒腐败菌的培养基的应用，采用滤菌膜过滤待检测的啤酒后，将所述滤菌膜紧密贴合于含有培养基的亲水无纺布的上表面，进行不少于48h的厌氧培养，并在培养过程中观察无纺布颜色变化，判断待检测的啤酒中是否含有腐败菌；所述亲水无纺布的亲水性接触角为0～40°，吸水率为1500％～1700％。
9、在本申请实施例的技术方案中，因采用了上述检测啤酒腐败菌的培养基，因而提高了啤酒腐败菌的生长速度，从而提高了检测效率，为啤酒中腐败菌的检测提供了新方法。另外，应用该培养基进行啤酒腐败菌的检测时，利用了吸附性优异的亲水无纺布，在饱和浸润培养基后，使得培养基均匀充满于无纺布中，为啤酒腐败菌提供了有利的生长环境，且亲水无纺布的结构提高了为菌落供给营养的速度；无纺布的亲水纤维结构起到了锁住腐败菌在生长过程中产生的酸的作用，进而提高了变色指示剂的灵敏度，还减少了培养基的用量，节约了检测成本。滤菌膜紧密贴合于亲水性无纺布的表面，对啤酒腐败菌起到富集的作用，同样有利于菌落的快速生长。
10、在一些实施例中，培养过程中观察到所述亲水无纺布的颜色由绿色变为黄色，则待检测的啤酒含有啤酒腐败菌，若颜色一直为绿色，则待检测的啤酒中不含有啤酒腐败菌。所述亲水无纺布的纤维直径为3～7cm；所述滤菌膜为纳米纤维膜，孔径大小为200～250nm，所述滤菌膜的纤维直径为3～7cm；所述亲水无纺布包括棉无纺布、聚氨酯无纺布、涤棉混纺无纺布中的一种。
11、该实施例中，将指示剂直接加入培养基中，随着腐败菌的生长代谢，滤膜会缓慢变色，变色的整个过程可以观测，不管是生长较快还是生长能力较差的腐败菌均能被观测到，不会出现漏检的情况。
12、上述说明仅是本申请技术方案的概述，为了能够更清楚了解本申请的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本申请的上述和其它目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举本申请的具体实施方式。
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1.一种检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，每1L培养基中包括如下组分：蛋白胨8～12g、牛肉膏8～12g、酵母粉2～6g、K2HPO41～3g、柠檬酸二铵1～3g、三水乙酸钠7～10g、吐温80 0.5～1.5mL、MgSO4·7H2O 0.3～0.5g、MnSO40.3～0.5g、适量的葡萄糖、果糖、苹果酸、丙酮酸、过氧化氢酶、甲基红-溴甲酚绿。
2.根据权利要求1所述的检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，所述苹果酸与丙酮酸的含量分别为0.1～0.3g，优先为0.2g。
3.根据权利要求1所述的检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，所述培养基的基础液为去离子水与啤酒的混合液，所述去离子水与啤酒的体积比为1:(0.8～1.2)。
4.根据权利要求1所述的检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，所述培养基中过氧化氢酶的浓度为50～80U/mL。
5.根据权利要求1所述的检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，所述培养基中葡萄糖与果糖的含量分别为8～12g。
6.根据权利要求1所述的检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，所述甲基红-溴
7.一种权利要求1～6中任一项所述的检测啤酒腐败菌的培养基的制备方法，其特征在于，将蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、K2HPO4、柠檬酸二铵、三水乙酸钠、吐温80、MgSO4·7H2O、MnSO4、葡萄糖、果糖、苹果酸、丙酮酸、甲基红-溴甲酚绿、去离子水及啤酒按不同含量进行混合，并进行灭菌处理，再加入过氧化氢酶，制得检测啤酒腐败菌的培养基。
8.一种权利要求1～6中任一项所述的检测啤酒腐败菌的培养基的应用，其特征在于，采用滤菌膜过滤待检测的啤酒后，将所述滤菌膜紧密贴合于含有培养基的亲水无纺布的上表面，进行不少于48h的厌氧培养，并在培养过程中观察无纺布颜色变化，判断待检测的啤酒中是否含有腐败菌；所述亲水无纺布的亲水性接触角为0～40°，吸水率为1500％～1700％。
9.根据权利要求8所述的检测啤酒腐败菌的培养基的应用，其特征在于，培养过程中观察到所述亲水无纺布的颜色由绿色变为黄色，则待检测的啤酒含有啤酒腐败菌，若颜色一直为绿色，则待检测的啤酒中不含有啤酒腐败菌。
10.根据权利要求8所述的检测啤酒腐败菌的培养基的应用，其特征在于，所述亲水无纺布的纤维直径为3～7cm；所述滤菌膜为纳米纤维膜，孔径大小为200～250nm，所述滤菌膜的纤维直径为3～7cm；所述亲水无纺布包括棉无纺布、聚氨酯无纺布、涤棉混纺无纺布中的一种。
...【技术特征摘要】
1.一种检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，每1l培养基中包括如下组分：蛋白胨8～12g、牛肉膏8～12g、酵母粉2～6g、k2hpo41～3g、柠檬酸二铵1～3g、三水乙酸钠7～10g、吐温80 0.5～1.5ml、mgso4·7h2o 0.3～0.5g、mnso40.3～0.5g、适量的葡萄糖、果糖、苹果酸、丙酮酸、过氧化氢酶、甲基红-溴甲酚绿。
2.根据权利要求1所述的检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，所述苹果酸与丙酮酸的含量分别为0.1～0.3g，优先为0.2g。
3.根据权利要求1所述的检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，所述培养基的基础液为去离子水与啤酒的混合液，所述去离子水与啤酒的体积比为1:(0.8～1.2)。
4.根据权利要求1所述的检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，所述培养基中过氧化氢酶的浓度为50～80u/ml。
5.根据权利要求1所述的检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，所述培养基中葡萄糖与果糖的含量分别为8～12g。
6.根据权利要求1所述的检测啤酒腐败菌的培养基，其特征在于，所述甲基红-溴甲酚绿由0.1～0.3g/l的甲基红与0.2～0.4g/l溴甲酚绿混合配制而成。
7.一种权利要求1～6中任一项所述的检测...
【专利技术属性】
技术研发人员：王栋，刘姗，鲁振坦，向阳，周丰，高飞，刘轲，
申请(专利权)人：武汉纺织大学，
类型：发明
国别省市：
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