【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程领域，涉及一种重组人源化vii型胶原蛋白及其表达载体和基因工程菌。
技术介绍
1、vii型胶原蛋白(type vii collagen)是一种主要存在于皮肤基底膜中的重要结构蛋白，在皮肤中扮演着关键角色，尤其是在皮肤的强度和弹性方面。vii型胶原蛋白通过在真皮-表皮交界处形成锚定纤维(anchoring fibrils)，将表皮固定到真皮上，防止表皮从真皮分离，为皮肤提供额外的机械支撑，从而确保皮肤在外部应力下保持稳定性和抗张强度。此外，它还存在于其他组织中，如口腔粘膜、食道、结肠等部位的基底膜区域。当皮肤损伤时，vii型胶原蛋白可以促进伤口愈合，帮助恢复组织的完整性。有研究发现，vii型胶原蛋白的缺陷或突变与多种遗传性疾病有关，最常见的是营养不良性大疱性表皮松解症(deb，dystrophic epidermolysis bullosa)，deb是一种罕见的遗传性皮肤疾病，患者vii型胶原蛋白基因(col7a1)的突变会导致锚定纤维数量减少或缺失，由于表皮和真皮不能牢固连接，皮肤极易发生分离，形成大面积的水疱和糜烂。由于vii型胶原蛋白与皮肤疾病的密切关联，科学家们正在积极探索其在皮肤修复中的应用，利用异源生物合成的方法生产重组vii型胶原蛋白用于开发治疗药物或组织工程材料，以促进伤口愈合或治疗皮肤病。另外，随着年龄的增长，vii型胶原蛋白的合成和功能也会下降，这会导致皮肤的弹性和抗损伤能力减弱，表现为皮肤老化、皱纹和松弛等，因此，vii型胶原蛋白在抗衰老研究中也是一个重要目标。
2、皮肤中的
技术实现思路
1、本专利技术通过筛选人vii型胶原蛋白中与细胞整合素结合的功能域，获得2段具有潜在高活性的功能肽段，并将其串联重复10次分别构成重组人源化vii型胶原蛋白jyc701和jyc702，经密码子优化后扩增克隆到ppic9k载体中，酶切线性化后转化到毕赤酵母细胞中，通过g418抗性梯度筛选高拷贝重组子，从而获得能分别表达重组人源化vii型胶原蛋白jyc701和jyc702的高拷贝毕赤酵母基因工程菌株。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、一种功能短肽，其氨基酸序列与人vii型胶原蛋白具有100％一致性，且具有与细胞整合素结合的功能位点，其氨基酸序列如seq id no.1或seq id no.2所示。
4、重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702，其由10个串联重复的氨基酸序列如seq id no.1或seq id no.2所示的功能短肽构成，其氨基酸序列如seq id no.3或seq idno.4所示。
5、编码上述重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702的基因，其核苷酸序列如seqidno.5或seq id no.6所示。
6、一种重组表达载体，其为含有上述编码重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702的基因的重组表达载体。在本专利技术具体实施方式中，以含有上述编码重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702的基因的重组表达载体ppic9k-jyc701或ppic9k-jyc702为例。
7、上述重组表达载体的构建方法，具体步骤如下：
8、对seq id no.5或seq id no.6所示的编码重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702的基因序列进行高保真pcr扩增，将胶回收纯化后的目标片段通过无缝克隆到ppic9k空载体的α-mating因子分泌信号肽下游，经菌落pcr和测序验证正确后富集，获得重组表达载体ppic9k-jyc701或ppic9k-jyc702。
9、生产上述重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702的毕赤酵母基因工程菌，其含有上述重组表达载体ppic9k-jyc701或ppic9k-jyc702。
10、上述毕赤酵母基因工程菌的构建方法，步骤如下：
11、将上述重组表达载体ppic9k-jyc701或ppic9k-jyc702酶切线性化后转化到毕赤酵母gs115感受态细胞中，挑选阳性转化子，通过g418抗性梯度筛选高拷贝重组子，获得生产重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702的毕赤酵母基因工程菌。
12、上述重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702的制备方法，步骤如下：
13、将上述生产重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702的毕赤酵母基因工程菌接种到bmmy诱导培养基中，经甲醇诱导表达，对发酵上清液进行纯化，获得高纯度的重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702。
14、一种组合物，其包含上述重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702，所述的组合物包括但不限于护肤品、药物组合物等。
15、一种制品，其包含上述重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702，所述的制品包括但不局限于医疗器械、生物材料、组织工程产品等。
16、与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
17、本专利技术通过筛选人vii型胶原蛋白中与细胞整合素结合的功能域，获得两种具有潜在高活性的功能短肽序列，并将其分别串联重复10次获得了具有促进细胞粘附、增殖和迁移功能的重组人源化vii型胶原蛋白jyc701和jyc702。细胞实验发现，重组人源化vii型胶原蛋白jyc701和jyc702均表现出优异的促进人成纤维细胞和表皮细胞粘附、增殖和迁移的功效，且重组人源化vii型胶原蛋白jyc701的功效优于jyc702。此外，本专利技术通过将重组人源化vii型胶原蛋白jyc701和jyc702的编码基因序列根据毕赤酵母的密码子偏好性进行密码子优化，分别构建重组表达载体，并将其分别转本文档来自技高网...
【技术保护点】
1. 一种功能短肽，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。
2. 重组人源化VII型胶原蛋白JYC701或JYC702，其特征在于，其由10个串联重复的氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的功能短肽构成，其氨基酸序列如SEQ IDNo.3或SEQ ID No.4所示。
3. 编码权利要求2所述的重组人源化VII型胶原蛋白JYC701或JYC702的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.5或SEQ ID No.6所示。
4.一种重组表达载体，其特征在于，为含有权利要求3所述的编码重组人源化VII型胶原蛋白JYC701或JYC702的基因的重组表达载体。
5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，为含有权利要求3所述的编码重组人源化VII型胶原蛋白JYC701或JYC702的基因的重组表达载体pPIC9K-JYC701或pPIC9K-JYC702，通过以下步骤构建：
6.生产权利要求2所述的重组人源化VII型胶原蛋白JYC701或JYC70
7.根据权利要求6所述的毕赤酵母基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤如下：
8.权利要求2所述的重组人源化VII型胶原蛋白JYC701或JYC702的制备方法，其特征在于，步骤如下：
9.一种组合物或制品，其特征在于，其包含权利要求2所述的重组人源化VII型胶原蛋白JYC701或JYC702。
10.根据权利要求9所述的组合物或制品，其特征在于，所述的组合物为护肤品或药物组合物，所述的制品为医疗器械、生物材料或组织工程产品。
...【技术特征摘要】
1. 一种功能短肽，其特征在于，氨基酸序列如seq id no.1或seq id no.2所示。
2. 重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702，其特征在于，其由10个串联重复的氨基酸序列如seq id no.1或seq id no.2所示的功能短肽构成，其氨基酸序列如seq idno.3或seq id no.4所示。
3. 编码权利要求2所述的重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702的基因，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.5或seq id no.6所示。
4.一种重组表达载体，其特征在于，为含有权利要求3所述的编码重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或jyc702的基因的重组表达载体。
5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，为含有权利要求3所述的编码重组人源化vii型胶原蛋白jyc701或...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵健烽，周洁，朱逸丽，季乐，王菊，谭成龙，
申请(专利权)人：浙江诸暨聚源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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