【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种基于rcd46和re2单抗的bvdv抗原捕获elisa的方法及其试剂盒。
技术介绍
1、牛病毒性腹泻(bovineviraldiarrhea,bvd)又称为牛病毒性腹泻-黏膜病，是由牛病毒性腹泻病毒引起的一种在世界范围内广泛流行的疾病。bvd主要引起牛的发热、黏膜糜烂溃疡、白细胞减少、犊牛腹泻、母牛流产等临床症状，给世界养牛产业带来了巨大的危害。由于bvd在临床上并没有特异性的症状，而且通常伴有免疫抑制的发生，这给bvd的诊断和防治带来了巨大的困难，对畜牧业造成了巨大的威胁。
2、目前bvd病原的检测主要通过qpcr，rt-pcr和elisa的方法进行，准确快速的检测病原对bvd的预防至关重要，但目前所有的检测方法都存在缺陷，传统的检测方法如细胞培养，检测周期长，操作繁琐，不适用于大规模的检测；pcr方法具有高灵敏度和特异性，但操作需要专门的设备和熟练的人员，增加了检测成本，且只能检测核酸，不能检测活的病原。因此，急需一种基于rcd46和re2单抗的bvdv抗原捕获elisa的方法及其试剂盒。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种基于rcd46和re2单抗的bvdv抗原捕获elisa的方法及其试剂盒。
2、一方面，一种bvdv受体rcd46表达菌种rbcd46，所述表达菌种于2024年7月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmcc no：31440。
3、在另外一个方
4、在另外一个方面，一种阳性杂交瘤细胞株单克隆抗体，所述阳性杂交瘤细胞株单克隆抗体是由所述的单抗杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。
5、所述的单抗杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体在bvdv捕获elisa试剂盒中的应用。
6、一种基于rcd46和re2单抗的bvdv抗原捕获elisa的试剂盒，所述试剂盒包括酶标板以及所述的单克隆抗体；所述酶标板是已包被所述bvdv受体rcd46的固相载体。
7、一种基于rcd46和re2单抗的bvdv抗原捕获elisa方法，包括以0.5μg/ml bvdv受体rcd46蛋白浓度,100μl/孔进行抗原包被，4℃包被12h，hrp标记特异性re2单抗为检测抗体。
8、进一步地，包括以0.5μg/ml rcd46蛋白浓度100μl/孔进行抗原包被，4℃包被12h；pbst洗1次，封闭液选择5％鱼明胶，200μl/孔在37℃下进行封闭2h；pbst洗3次，阳性血清和阴性血清按照1:1进行稀释，每孔加入100μl，37℃作用1h；pbst洗3次，酶标单抗按照1:1000进行稀释，每孔加入100μl，37℃下作用1h；pbst洗3次，拍干，每孔加入100μl tmb，室温作用10min；显色结束后，加入50μl/孔终止液后酶标仪测定od450nm值。
9、进一步地，所述试剂盒的od临界值为0.23。
10、本专利技术采用上述技术方案与现有技术相比，最大的特点在于：
11、本专利技术以bvdv受体rcd46蛋白为包被抗原，hrp标记特异性re2单抗为检测抗体，通过条件优化，建立了bvdv抗原捕获elisa检测方法。
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1.一种BVDV受体rCD46表达菌种rbCD46，其特征在于，所述表达菌种于2024年7月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO：31440。
2.单抗杂交瘤细胞株E2mAb株，其特征在于，所述细胞株E2mAb株于2024年10月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.：46055。
3.一种单抗杂交瘤细胞株单克隆抗体E2mAb，其特征在于：所述单抗杂交瘤细胞株单克隆抗体是由权利要求2所述的单抗杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。
4.根据权利要求2所述的单抗杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体在制备检测BVDV抗原捕获ELISA试剂盒中的应用。
5.一种基于rCD46和rE2单抗的BVDV抗原捕获ELISA的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括酶标板以及如权利要求3所述的单抗杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体；所述酶标板是如权利要求1已包被所述BVDV受体rCD46的固相载体。
6.一种基于rCD46和rE2单抗的BVDV抗原捕获ELISA方法，其特征在于
7.根据权利要求6所述的一种基于rCD46和rE2单抗的BVDV抗原捕获ELISA方法，其特征在于，以0.5μg/mL蛋白浓度100μL/孔进行抗原包被，4℃包被12h；PBST洗1次，封闭液选择5％鱼明胶，200μL/孔在37℃下进行封闭2h；PBST洗3次，阳性血清和阴性血清按照1:1进行稀释，每孔加入100μL，37℃作用1h；PBST洗3次，酶标单抗按照1:1000进行稀释，每孔加入100μL，37℃下作用1h；PBST洗3次，拍干，每孔加入100μL TMB，室温作用10min；显色结束后，加入50μL/孔终止液后酶标仪测定OD450nm值。
8.根据权利要求6所述的一种基于rCD46和rE2单抗的BVDV抗原捕获ELISA方法，其特征在于，所述试剂盒的OD临界值为0.23。
...【技术特征摘要】
1.一种bvdv受体rcd46表达菌种rbcd46，其特征在于，所述表达菌种于2024年7月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmcc no：31440。
2.单抗杂交瘤细胞株e2mab株，其特征在于，所述细胞株e2mab株于2024年10月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmcc no.：46055。
3.一种单抗杂交瘤细胞株单克隆抗体e2mab，其特征在于：所述单抗杂交瘤细胞株单克隆抗体是由权利要求2所述的单抗杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。
4.根据权利要求2所述的单抗杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体在制备检测bvdv抗原捕获elisa试剂盒中的应用。
5.一种基于rcd46和re2单抗的bvdv抗原捕获elisa的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括酶标板以及如权利要求3所述的单抗杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体；所述酶标板是如权利要求1已包被所述bvdv受体rcd46的固相载体。
6.一种基...
【专利技术属性】
技术研发人员：范学政，秦彤，丁家波，张宜宸，蒋卉，沈青春，张广智，鑫婷，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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