【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农产品深加工，涉及一种具有黑色素抑制活性的王浆蛋白酶解物的制备方法。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
的信息旨在增加对本专利技术总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、蜂王浆是蜜蜂工蜂咽下腺和上颚腺分泌的浆状物质，具有免疫调节、抗菌、抗氧化、抗衰老等生物学活性，被广泛应用于保健品、化妆品等领域。蜂王浆中富含蛋白质，其蛋白含量约占新鲜蜂王浆的9-18%，蜂王浆干物质的30%-50%，是蜂王浆的重要活性成分，具有抗氧化、抗菌、抗炎、免疫调节、伤口愈合、抗衰老等生物活性。尽管蜂王浆蛋白具有显著的生物活性，但其存在分子量大，不易被人体皮肤吸收利用，且存在易致敏等缺点。因此，增加蜂王浆蛋白的吸收率和功效，减小过敏反应对其产品的开发具有重要意义。蛋白酶解技术可将蛋白质分解为小分子的肽段，与原蛋白相比具有安全性高、生物活性强、易吸收、靶向特异性高等特点，能够有效提升蜂王浆蛋白的生物学活性和产品附加值。
3、王浆蛋白的酶解物由于制备工艺的差异会获得不同功能的小分子肽段。如，cn113647591 a中公开了一种蜂王浆酶解物，是蜂王浆经蛋白酶m-p001酶解得到的酶解物；所述蛋白酶m-p001来源于结核分枝杆菌( mycobacterium tuberculosis)。酶解条件为：用蛋白酶m-p001酶解蜂王浆水溶液，蜂王浆水溶液中蜂王浆浓度为5-20％；以1500-2500u/g(以蜂王浆原料计)的添加量添加蛋白酶
4、皮肤内黑色素含量是决定皮肤颜色的主要因素，黑色素能够保护皮肤免受紫外线灼伤。然而，黑色素过度产生会导致黄褐斑、雀斑甚至黑色素瘤等皮肤疾病。目前许多传统的黑色素抑制剂如曲酸、对苯二酚等会引起皮肤炎症，具有皮肤渗透性低、不稳定等缺点，因此开发新型、安全、高效的天然黑色素抑制剂具有重要意义。
技术实现思路
1、针对目前缺少安全、高效的黑色素抑制剂的问题，本专利技术提供一种安全有效的天然黑色素生成抑制剂，其源于蜂王浆，采用蛋白酶水解获得，产品安全性好。
2、本专利技术的另一目的是提供一种上述黑色素抑制剂在化妆品、食品或药品中的应用。
3、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案。
4、一种王浆蛋白酶解物的制备方法，包括以下步骤：
5、（1）将可溶性王浆蛋白溶液以胃蛋白酶酶解后获得酶解液；
6、（2）将酶解液超滤分离获得分子量小于3kda的多肽溶液；
7、所述可溶性王浆蛋白溶液的浓度为1.5%-2%，蛋白酶的添加量为可溶性王浆蛋白的5%-7%；酶解时间为4h-5h，ph为2.0-3.0。优选地，ph为2.0。
8、所述可溶性王浆蛋白的制备方法，包括以下步骤：
9、（i）将蜂王浆溶解后离心，获得上清液i；
10、（ii）将上清液i再次离心，获得上清液ii；
11、（iii）将上清液ii冻干获得可溶性王浆蛋白。
12、步骤（i）中，蜂王浆和溶剂的料液比为1:8（g/ml）。溶剂选自水或ph7.0的磷酸盐缓冲液；所述缓冲液的浓度为50mm。
13、优选地，为了使王浆蛋白更好的溶解，提高可溶性王浆蛋白的得率，步骤（i）中，溶剂为磷酸盐缓冲液。相应地，为了提高可溶性王浆蛋白的纯度，步骤（iii）中，冻干前还可包括透析的步骤。
14、为了辅助蜂王浆溶解，可采用超声波助溶，超声的功率为180w，时间为40min。
15、步骤（ii）和（iii）中，离心的速率为10000-12000rpm，离心时间为20-40min，离心的温度为4℃。
16、优选地，上述制备方法中，步骤（2）后还包括将多肽溶液浓缩或干燥的步骤。
17、一种上述制备方法获得的王浆蛋白酶解物。
18、上述王浆蛋白酶解物可作为美白活性成分，添加于食品、保健食品、药品或化妆品中。
19、一种包含上述王浆蛋白酶解物的食品、保健食品、化妆品或药物。
20、本专利技术具有以下优点：
21、本专利技术以蜂王浆为原料，通过提取蜂王浆蛋白，利用蛋白酶酶解工艺和超滤分离技术制备获得低分子量王浆蛋白酶解物（＜3kda），并通过体外实验、小鼠黑色素瘤细胞（b16-f10）实验以及斑马鱼实验证明低分子量王浆蛋白酶解物具有良好的黑色素生成抑制活性，可以减少小鼠黑色素瘤细胞以及斑马鱼黑色素的生成。该抑制剂来自于天然食品蜂王浆，绿色安全，且制备过程条件可控，提取方便，不需人工合成，有望应用于具有美白功效的食品、药物或化妆品中。
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1.一种王浆蛋白酶解物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，酶解的pH为2.0；
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述可溶性王浆蛋白的制备方法，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（i）中，蜂王浆和溶剂的料液比为1:8（g/mL）；溶剂选自水或pH7.0的磷酸盐缓冲液。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（i）中，溶剂为磷酸盐缓冲液；所述缓冲液的浓度为50mM；步骤（iii）中，冻干前还包括透析的步骤。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（i）中，蜂王浆溶解为超声波助溶；超声的功率为180W，时间为40min；
7.一种如权利要求1-6任一所述的制备方法获得的王浆蛋白酶解物。
8.一种如权利要求7所述的王浆蛋白酶解物在制备食品、保健食品、化妆品或药物中的应用，其特征在于，王浆蛋白酶解物作为美白活性成分。
9.一种包含如权利要求7所述的王浆蛋白酶解物的食品、保健食品
...【技术特征摘要】
1.一种王浆蛋白酶解物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，酶解的ph为2.0；
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述可溶性王浆蛋白的制备方法，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（i）中，蜂王浆和溶剂的料液比为1:8（g/ml）；溶剂选自水或ph7.0的磷酸盐缓冲液。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（i）中，溶剂为磷酸盐缓冲液；所述缓冲液的浓...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓慧，梁嘉仪，王瑞明，李丕武，李志文，冯洁，邢鸿扬，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学山东省科学院，
类型：发明
国别省市：
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