【技术实现步骤摘要】
本专利技术是申请日为2021年6月24日、申请号为2021107042556、专利技术名称为“结合bcma和cd3的双特异性抗体及其制备方法与应用”的专利申请的分案申请。本专利技术涉及基因工程抗体，具体涉及结合bcma和cd3的双特异性抗体及其制备方法与应用。
技术介绍
1、单克隆抗体在临床上可用于肿瘤治疗、免疫性疾病治疗以及抗感染治疗。其中，肿瘤治疗是目前单克隆抗体应用最为广泛的领域，单克隆抗体治疗肿瘤是一种针对病变细胞特异靶点刺激免疫系统杀伤靶细胞的免疫疗法。在单克隆抗体的基础上，为了进一步提高药效和减少毒副作用，以单克隆抗体为基础的新的抗体药物，包括抗体药物偶联物（antibody drug conjugate, adc）、双特异性抗体（bispecific antibody， bsab）以及car-t (chimeric antigen receptor t cells)等新型蛋白和细胞药物的发展极为迅速。其中，基于双特异性性构建的细胞桥（cell-bridging）双抗，由于其连接免疫t细胞和癌靶细胞的能力，显著提高了杀伤活性和特异性，具有突破性的临床价值，受到了格外的关注。对于多发性骨髓瘤而言，靶向bcma的具有上述性质的细胞桥双抗是改善抗体治疗效果的发展方向之一，现已成为抗体工程研究领域的热点。
2、t细胞表面的cd3分子由4个亚基组成：δ、ε、γ、ζ，其分子质量分别为18.9k da，23.1kda，20.5kda和18.7kda，其长度分别为171、 207、182、164个氨基酸残基。它们共同组成
3、bcma（即b-细胞成熟抗原，tnfrsf17，cd269）是一种优先在分化的浆细胞中表达的属于肿瘤坏死（tnf）受体超家族成员的非糖基化i型跨膜蛋白，其参与b细胞成熟、生长和存活。bcma最初报道为人成熟b淋巴细胞的高尔基体内的整合膜蛋白，即作为细胞内蛋白，其表明bcma看起来在b-细胞发育和稳态中具有重要作用。
4、bcma的表达限于b-细胞谱系且主要存在于浆细胞和浆母细胞上（图1的b），并在一定程度上存在于记忆b-细胞上，但是实际上不存在于外周b-细胞上。bcma也在多发性骨髓瘤(mm)细胞上表达。bcma与其家族成员跨膜激活剂及亲环蛋白配体作用因子(taci)和tnf家族受体(baff-r)的b细胞活化因子一起调节体液免疫、b-细胞发育和稳态的不同方面。bcma是tnf超家族的两种配体的受体（图1的c）：april(增殖诱导配体，cd256，tnfsf13)，bcma的高亲和力配体，以及b细胞活化因子baff(thank，blys，b淋巴细胞刺激因子，tall-1和ztnf4)，bcma的低亲和力配体。april和baff显示出结构相似性以及重叠但不同的受体结合特异性。负调控因子taci也结合至baff和april两者。april和baff与bcma和/或taci的配位结合激活转录因子nf-κb并增加促存活bcl-2家族成员(例如，bcl-2、bcl-xl、bcl-w、mcl-1、a1)的表达并下调促凋亡因子(例如，bid、bad、bik、bim等)的表达，从而抑制细胞凋亡并促进存活。该组合作用促进b细胞分化、增殖、存活和抗体产生。bcma的表达出现在b-细胞分化作用的较后期并有利于浆母细胞和浆细胞在骨髓中的长期存活。
5、bcma是一个极其重要的b细胞生物标志物，广泛存在于mm细胞表面，是mm和其他血液系统恶性肿瘤的热门免疫治疗靶点。在连续3届asco年会上，bcma都是行业瞩目的焦点。美国癌症研究所（cri）的最新分析显示，bcma已成为继cd19之后第二大最受欢迎的抗癌细胞疗法靶点。mm是一种异质性疾病并且多数是由t(11；14)、t(4；14)、t(8；14)、del(13)、del(17)(除其他外)的染色体易位引起的。mm受累患者可能经历因骨髓浸润、骨质破坏、肾衰竭、免疫缺陷以及癌症诊断的心理负担而经历多种与疾病相关的症状。
6、对于mm，化疗和干细胞移植的治疗方法虽然能够提高生存率，但是常常伴有有害的副作用，因此mm仍然难以治疗。尽管在化疗、蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂沙利度胺衍生物和cd38靶向抗体方面取得了很大进展，但几乎所有患者最终仍会复发。因此，该领域对新药的需求仍然迫切。迄今为止，对于多发性骨髓瘤患者而言两种最常用的治疗选择是类固醇、沙利度胺、来那度胺、硼替佐米或多种细胞毒素试剂的组合，以及对于较年轻的患者采用高剂量化疗理念配合自体干细胞移植。多数的移植为自体型，即使用患者自身的细胞。这种移植，尽管不具有治愈性，但其显示延长选定患者的生命。其可在新诊断的患者中作为初始疗法或在复发时进行。有时为了适当的控制疾病，可能会建议选定患者采用一种以上的移植。用于治疗该疾病的化疗试剂是环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和美法仑，与免疫调节剂如沙利度胺来那度胺硼替佐米和皮质类固醇(如地塞米松)的组合疗法已经成为用于治疗新确诊患者和化疗或移植均失败的疾病晚期患者中骨髓瘤的重要选择。
7、目前对于mm所用疗法是通常非治愈性的。因为高龄、其它严重疾病的存在或其它身体上的限制，干细胞移植可能不适用于多数患者的选择。化疗仅能部分控制多发性骨髓瘤，且极少达到完全缓解。因此，迫切需要新的创新疗法。
8、拮抗型bcma-特异性抗体可阻止与在正常和恶性b-细胞中强效促存活信号转导通路有关的nf-κb活化。
9、在对抗血源性肿瘤或自身免疫性障碍方面的其它方法专注于baff和april(即tnf配体超家族的配体)与其由baff和/或april活化的受体taci、baff-r和bcma之间的相互作用。例如，通过将人免疫球蛋白的fc-结构域与zymogenetics公司的taci融合产生了阿塞西普(taci-ig)，来中和这两种配体并阻止受体的活化。阿塞西普目前正处于用于治疗系统性红斑狼疮(sle，第iii期)多发性硬化症(ms，第ii期)及类风湿性关节炎(ra，第ii期)的临床试验中，以及处于用于治疗b细胞恶性肿瘤慢性淋巴细胞白血病(cll)、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)及mm的第i期临床试验中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.结合BCMA和CD3的双特异性抗体，其特征在于，包括：
2.权利要求1所述的结合BCMA和CD3的双特异性抗体或编码所述双特异性抗体的核酸或含有所述核酸的生物材料的以下任一种应用：
3.结合BCMA和CD3的双特异性抗体或编码所述双特异性抗体的核酸或含有所述核酸的生物材料的以下任一种应用：
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述第一结构域的重链可变区具有SEQ IDNO.17、19-21任一所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO.18、22-27任一所示的氨基酸序列；
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述第一结构域为2个通过二硫键连接的完整的轻链-重链对；
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述第一结构域的重链具有SEQ ID NO.32所示的氨基酸序列，轻链具有SEQ ID NO.33所示的氨基酸序列，
7.根据权利要求3~6任一项所述的应用，其特征在于，所述第二结构域的重链可变区具有SEQ ID NO.28所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO.2
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述第二结构域包含2个单链抗体，所述双特异性抗体为通过如下任意一种方式连接而成的对称结构：
9.根据权利要求3~8任一项所述的应用，其特征在于，所述第一结构域的重链与所述第二结构域经连接肽连接后具有SEQ ID NO.34或35所示的氨基酸序列，轻链具有SEQ IDNO.33所示的氨基酸序列，
10.根据权利要求2~9任一项所述的应用，其特征在于，所述生物材料包括重组DNA、表达盒、载体、宿主细胞、工程菌或细胞系。
...【技术特征摘要】
1.结合bcma和cd3的双特异性抗体，其特征在于，包括：
2.权利要求1所述的结合bcma和cd3的双特异性抗体或编码所述双特异性抗体的核酸或含有所述核酸的生物材料的以下任一种应用：
3.结合bcma和cd3的双特异性抗体或编码所述双特异性抗体的核酸或含有所述核酸的生物材料的以下任一种应用：
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述第一结构域的重链可变区具有seq idno.17、19-21任一所示的氨基酸序列，轻链可变区具有seq id no.18、22-27任一所示的氨基酸序列；
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述第一结构域为2个通过二硫键连接的完整的轻链-重链对；
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述第一结构域的重链具有seq id no.32所示...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁清安，孟庆武，白丽莉，赵立坤，李艺嘉，李延虎，
申请(专利权)人：益科思特北京医药科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：
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