【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种携带mrna靶向的工程化囊泡及在提高成纤维细胞功能性上的应用。
技术介绍
1、细胞外囊泡(extracellularvesicles，evs)是细胞分泌到细胞外环境中的双层膜球状结构，通过内体途径和非内体途径分泌。研究者们通常将细胞外囊泡分为三类：外泌体、微囊泡和凋亡小体，外泌体的直径为30-150nm，微囊泡的直径为150-1000nm，凋亡小体的直径为1-5μm。细胞外囊泡可携带多种生物分子，如蛋白质、脂质、核酸和代谢产物，并作为细胞间通讯手段，影响目标细胞。evs作为细胞间通讯的重要媒介，近年来在携带mrna方面的研究取得了显著进展。evs不仅能够携带蛋白质、脂质和代谢产物，还能包裹并传递mrna分子。这一特性使得evs在基因表达调控、疾病诊断和治疗等领域展现出广阔的应用前景。目前的研究表明，细胞外囊泡携带的mrna可以在接收细胞中翻译成功能性蛋白质，进而影响接收细胞的生理状态。因此，探索细胞外囊泡在携带mrna方面的潜力，不仅推动了基础生物学研究的发展，还为开发新型诊断和治疗手段提供了重要的科学依据。真皮成纤维细胞分为2个亚群，即乳头状成纤维细胞和网状成纤维细胞，他们主要的功能是合成胶原蛋白，弹性蛋白和蛋白多糖以保持皮肤及其功能的完整，并参与创伤修复。在皮肤衰老的过程中，以光致衰老为例，紫外线诱导皮肤氧化应激增强，激活tnf-α和nf-κb信号通路，使mmp上调而导致胶原蛋白降解衰老和并抑制tgfbeta使得新胶原的合成减少，以至皮肤发生衰老。
2、整合素是一类由两个亚单位组成
3、irgd多肽在最近的研究中发现，成纤维细胞内的nrp-1与在成纤维细胞中有着高表达，且在肿瘤的转移上发挥作用，总结出irgd多肽能与纳米载体结合有效的靶向具有整合素的细胞，因此在未来的治疗研究有着重要的意义
4、ms2衣壳蛋白可以与ms2噬菌体的rna中的结构动态区域相互作用，与ms茎环特异性结合，因此我们可以将目的rna上带上ms茎环与ms2衣壳蛋白特异性结合并富集。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术的不足，提供一种携带mrna靶向的工程化囊泡来解决现有技术中无法特异性靶向成纤维细胞以及mrna载量较少的问题。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种携带mrna靶向的工程化囊泡，同时携带irgd多肽、lamp2b膜蛋白、ms2衣壳蛋白。
4、优选地，所述工程化囊泡能够将mrna安全地且高效率地递送至受体细胞。
5、优选地，所述工程化囊泡通过hek-293t细胞分泌。
6、优选地，所述irgd多肽、lamp2b膜蛋白、ms2衣壳蛋白在hek-293t细胞中同时表达。
7、一种携带mrna靶向的工程化囊泡，包括以下步骤提取得到：
8、步骤(1)、构建目的质粒；
9、选取质粒载体：pcdna3.1-ha-irgd-10-lamp2b质粒和pcdna3.1-10-lamp2b-ha质粒；
10、1.1获取目标基因；
11、根据构建的质粒需求以及引物设计原则，设计出相应的引物，质粒的引物的dna序列和lamp2b膜蛋白、irgd多肽、ms2衣壳蛋白的氨基酸序列如下：
12、pcdna3.1-ha-irgd-10-lamp2b质粒的上游引物序列如seq id no.1所示：
13、tgtcgtggtgacaaaggtcccgactgtggcagtggatctggatccggt gg；
14、pcdna3.1-ha-irgd-10-lamp2b质粒的下游引物序列如seq id no.2所示：
15、ggacctttgtcaccacgacatccactgcccatagtcgagttacctgc；pcdna3.1-10-lamp2b-ha质粒的上游引物序列如seq id no.3所示：
16、ggcagtggaggcagtggatctggatccggtgg；
17、pcdna3.1-10-lamp2b-ha质粒的下游引物序列如seq id no.4所示：
18、tccactgcctccactgcccatagtcgagttacctgc；
19、lamp2b膜蛋白的氨基酸序列如seq id no.5所示：
20、mnftvryettnktyktvtisdhgtvtyngsicgddqngpkiavqfgpgfswianftkaastysidsvsfsyntgdnttfpdaedkgiltvdellairiplndlfrcnslstlekndvvqhywdvlvqafvqngtvstneflcdkdktstvaptihttvpsptttptpkekpeagtysvnngndtcllatmglqlnitqdkvasvininpntthstgscrshtallrlnsstikyldfvfavknenrfylkevnismylvngsvfsiannnlsywdaplgssymcnkeqtvsvsgafqintfdlrvqpfnvtqgkystaqecsldddtilipiivgaglsgliiviviayvigrrksyagyqtl；
21、irgd多肽的氨基酸序列如seq id no.6所示：
22、crgdkgpdc；
23、ms2衣壳蛋白的氨基酸序列如seq id no.7所示：
24、asnftqfvlvdnggtgdvtvapsnfangvaewissnsrsqaykvtcsvr qssaqkrkytikvevpkvatqtvggvelpvaawrsylnmeltipifatnsdcel ivkamqgllkdgnpipsaiaansgiy；
25、1.2重组反应；
26、1.3重组反应产物转化、涂板和挑取单克隆；
27、1.4质粒提取；
28、步骤(2)、细胞转染；
29、步骤(3)、囊泡提取。
30、优选地，一种如上所述的携带mrna靶向的工程化囊泡本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种携带mRNA靶向的工程化囊泡，其特征在于，同时携带iRGD多肽、lamp2b膜蛋白、MS2衣壳蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种携带mRNA靶向的工程化囊泡，其特征在于，所述工程化囊泡通过HEK-293T细胞分泌。
3.根据权利要求2所述的一种携带mRNA靶向的工程化囊泡，其特征在于，所述iRGD多肽、lamp2b膜蛋白、MS2衣壳蛋白在HEK-293T细胞中同时表达。
4.根据权利要求1所述的一种携带mRNA靶向的工程化囊泡，其特征在于，包括以下步骤提取得到：
5.根据权利要求4所述的一种携带mRNA靶向的工程化囊泡，其特征在于，所述步骤(1)中获取目标基因时，还包括PCR反应；
6.一种如根据权利要求1-5任一项所述的携带mRNA靶向的工程化囊泡在提高成纤维细胞功能性上的应用。
7.根据权利要求6所述的携带mRNA靶向的工程化囊泡在提高成纤维细胞功能性上的应用，其特征在于，所述利用携带mRNA靶向的工程化囊泡提高成纤维细胞功能性的方法，包括以下步骤：
8.根据权利要求6所述的携带mR
...【技术特征摘要】
1.一种携带mrna靶向的工程化囊泡，其特征在于，同时携带irgd多肽、lamp2b膜蛋白、ms2衣壳蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种携带mrna靶向的工程化囊泡，其特征在于，所述工程化囊泡通过hek-293t细胞分泌。
3.根据权利要求2所述的一种携带mrna靶向的工程化囊泡，其特征在于，所述irgd多肽、lamp2b膜蛋白、ms2衣壳蛋白在hek-293t细胞中同时表达。
4.根据权利要求1所述的一种携带mrna靶向的工程化囊泡，其特征在于，包括以下步骤提取得到：
5.根据权利要求4所述的一种携带mrna靶...
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