【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体地，涉及一种吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针及其应用。
技术介绍
1、草地贪夜蛾(spodoptera frugiperda)隶属于鳞翅目(lepidoptera)夜蛾科(noctuidae)，又名秋黏虫，原产于美洲的热带及亚热带地区；其具有极快的迁飞速度，能够借助风力进行远距离的迁飞。草地贪夜蛾还具有食性杂、食量大和宿主范围广泛的特点，是一种多食性的农业害虫，能够取食玉米、水稻、甘蔗、高粱等76科约353种植物；同时草地贪夜蛾成虫还具有极强的繁殖能力，雌虫可进行多次交配并产卵，一生大约可产卵900～1000粒，最高可达2000粒，极大地促进了种群的繁衍。
2、在虫口爆发期，对于草地贪夜蛾的防治还是以化学防治为主，但是草地贪夜蛾目前对有机磷类、烟碱类和拟除虫菊酯类化学农药已产生明显抗性。
3、苦参碱(mat)是从苦参、山豆根或苦豆子中提取出一种水溶性生物碱，具有广泛的医用和农用活性，是多种生物碱的总称。研究发现，苦参碱及其衍生物显示出广泛的生物学特性，其在抗癌、抗心脑血管疾病、抗病毒、调节免疫系统、调节消化系统和抗肿瘤等方面有着重要的作用；此外苦参碱及其衍生物作为农药在农用领域中属于无残留低毒的农药产品，对绿色生态的发展、环境污染的控制以及农产品质量的提高都具有极其重要的意义。
4、为了提高苦参碱的生物活性，针对苦参碱进行相关结构的改造和修饰的研究越来越多，但因苦参碱及其衍生物的靶标蛋白尚未明确，且相关作用机制不清晰等原因，导致苦参碱及其衍生物的研究效率较低，合成
5、目前，急需能够识别草地贪夜蛾sf9细胞潜在靶标蛋白的分子探针，进而针对性的对苦参碱结构进行改造和修饰，从而合成杀虫活性更好的苦参碱衍生物农药。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针及其应用。
2、本专利技术的第一目的是提供一种吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针。
3、本专利技术的第二目的是提供上述吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针在确定苦参碱类农药的作用靶点中的应用。
4、本专利技术的第三目的是提供上述吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针在指导农业杀虫中的应用。
5、本专利技术的第四目的是提供一种确定苦参碱类农药的作用靶点的方法。
6、为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
7、一种吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针，所述吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针由活性基团和反应基团连接得到；
8、所述活性基团为苦参碱衍生物，所述反应基团为含有双吖丙啶基团和炔烃基团的物质；
9、所述苦参碱衍生物的化学式如式i所示，
10、
11、当r1为nh2时，r2为h；当r2为nh2时，r1为h。
12、优选地，所述苦参碱衍生物的化学式如式ii所示，
13、
14、优选地，所述含有双吖丙啶基团和炔烃基团的物质为炔烃-双吖丙啶-酸。
15、更优选地，所述吲哚苦参碱衍生物活性分子探针的化学式如式iii所示，
16、
17、本专利技术还请求上述任一所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针在确定苦参碱类农药的作用靶点中的应用。
18、优选地，所述作用靶点为actin muscle-type a2、histone h4、sfrice_009909、unconvertional myosin-xv和/或sulfatase d。
19、本专利技术还请求保护上述任一所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针在指导农业杀虫中的应用。
20、优选地，所述指导农业杀虫为指导合成靶向作用位点的农药。
21、更优选地，所述作用靶点为actin muscle-type a2、histone h4、sfrice_009909、unconvertional myosin-xv和/或sulfatase d。
22、更优选地，所述农药为苦参碱类农药。
23、更优选的，所述杀虫为杀草地贪夜蛾。
24、本专利技术还请求保护一种吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针的制备方法，包括以下步骤：
25、s11.利用michael加成反应在槐果碱的13位上引入4-硝基吲哚或5-硝基吲哚，接着进行氢化反应，得到如式i所示苦参碱衍生物；
26、s12.将活性基团和反应基团进行酰胺化反应，得到吲哚苦参碱衍生物亲和活性分子探针；
27、所述活性基团为步骤s11得到的苦参碱衍生物，反应基团为含有双吖丙啶基团和炔烃基团的物质；
28、
29、
30、步骤s11中引入4-硝基吲哚时，r1为nh2，r2为h；步骤s11中引入5-硝基吲哚时，r1为h，r2为nh2。
31、优选地，步骤s11为：利用michael加成反应在槐果碱的13位上引入4-硝基吲哚。
32、优选地，步骤s11中所述氢化反应为pd/c加氢还原反应。
33、优选地，步骤s12中所述反应基团为炔烃-双吖丙啶-酸。
34、本专利技术还请求保护一种确定苦参碱类农药的作用靶点的方法，包括以下步骤：
35、s1.将上述任一所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针与目标细胞在共孵育，并在共孵育期间进行紫外光照射，裂解收集上清液，得到特异性结合目标细胞蛋白的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针；
36、所述目标细胞为苦参碱类农药的作用细胞；
37、s2.向步骤s1得到的特异性结合目标细胞蛋白的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针连接报告基团，得到连接有报告基因且特异性结合目标细胞蛋白的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针，并进行蛋白质组学检测，即可确定作用靶点。
38、优选地，步骤s1中所述共孵育的时间为30min。
39、优选地，所述目标细胞为sf9细胞。
40、优选地，步骤s2中所述报告基团为生物素、罗丹明和/或bodlpy。
41、更优选地，步骤s2中所述报告基团为生物素。
42、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
43、本专利技术提供了一种吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针，由活性基团和反应基团连接而成，所述活性基团为苦参碱衍生物，所述反应基团为含有双吖丙啶基团和炔烃基团的物质，所述苦参碱衍生物的化学式如式i所示。本专利技术所述吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针处理草地贪夜蛾sf9细胞72h后，抑制率能本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针，其特征在于，所述吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针由活性基团和反应基团连接得到；
2.根据权利要求1所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针，其特征在于，所述苦参碱衍生物的化学式如式II所示，
3.根据权利要求1所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针，其特征在于，所述含有双吖丙啶基团和炔烃基团的物质为炔烃-双吖丙啶-酸。
4.根据权利要求3所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针，其特征在于，所述吲哚苦参碱衍生物活性分子探针的化学式如式III所示，
5.权利要求1～4任一所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针在确定苦参碱类农药的作用靶点中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述作用靶点为actin muscle-type A2、histone H4、SFRICE_009909、unconvertional myosin-XV和/或sulfatase D。
7.权利要求1～4任一所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针在指导农业杀虫中的应用。>
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述指导农业杀虫为指导合成靶向作用位点的农药。
9.一种确定苦参碱类农药的作用靶点的方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述报告基团为生物素、罗丹明和/或BODLPY。
...【技术特征摘要】
1.一种吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针，其特征在于，所述吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针由活性基团和反应基团连接得到；
2.根据权利要求1所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针，其特征在于，所述苦参碱衍生物的化学式如式ii所示，
3.根据权利要求1所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针，其特征在于，所述含有双吖丙啶基团和炔烃基团的物质为炔烃-双吖丙啶-酸。
4.根据权利要求3所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针，其特征在于，所述吲哚苦参碱衍生物活性分子探针的化学式如式iii所示，
5.权利要求1～4任一所述的吲哚苦参碱衍生物光亲和活性分子探针在确定苦参碱类农药的作用靶点中的应...
【专利技术属性】
技术研发人员：程杏安，刘志聪，马孟雨，蒋旭红，吴跃华，
申请(专利权)人：仲恺农业工程学院，
类型：发明
国别省市：
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