【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及对遗传毒性物质的高通量筛查，特别涉及一种dna损伤诱导型启动子及其应用，具体涉及利用携带改造启动子的重组大肠杆菌检测遗传毒性物质。
技术介绍
1、近年来由于合成生物学的兴起，全细胞生物传感器受到越来越多的关注。基于细菌细胞的传感器已被研究用于各种应用，例如环境监测、疾病诊断和生物治疗、生物生产、矿物测量和地雷清除。但是这些性能不足以满足现实世界的检测要求，特别是在低灵敏度和检测限(lod)、受限的输入/输出动态方面范围。
2、sos/umu测试，就是一个利用全细胞生物传感器的检测方法，该方法在过去四十年间不断发展。最初的umu::lacz系统，利用sos反应诱导表达下游基因的能力，通过umudc启动子融合lacz报告基因表达实现检测遗传毒性。在这之后，通过改变报告基因，比如gfp等来提高灵敏度，添加外源代谢酶基因来提高化学品的响应范围，敲除宿主细胞基因来提高灵敏度以及改变宿主细胞来提高其检测性能等等。但是所使用的sos启动子普遍是天然的sos启动子，是从一个菌的sos系统中得到的启动子替换到另一个菌中。这些天然启动子的性能在灵敏度、检测限、输出范围等方面存在一定的局限性。
3、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的目的在于提供一种dna损伤诱导型启动子及其应用。该启动子是高灵敏度的大肠杆菌dna损伤诱导的特异性启动子，具有更高的灵敏度、更低的检测限以及更高的响应强度。
2、本专利技术
3、一种dna损伤诱导型启动子，其序列如seq id no.1所示或者其反向互补序列。
4、一种表达盒，含有上述dna损伤诱导型启动子。
5、进一步的，所述表达盒，还含有目标基因和终止子。
6、所述的目标基因为裂解基因或影响细菌(优选为大肠杆菌)菌株生长的毒蛋白基因等，但不限于此。
7、进一步的，所述的裂解基因为噬菌体裂解基因等；
8、更进一步的，所述噬菌体裂解基因，可为任意一种噬菌体裂解基因，优选为lambda噬菌体的裂解基因srrz，其基因序列为seq id no.4。
9、所述的终止子为大肠杆菌终止子，进一步为rrnb t1终止子和rrnb t2终止子等；
10、进一步的，所述的rrnb t1终止子的核苷酸序列如seq id no.5所示；所述的rrnbt2终止子的核苷酸序列如seq id no.6所示。
11、一种重组载体，含有上述dna损伤诱导型启动子或上述表达盒；
12、所述重组载体的出发载体可为任意一种大肠杆菌载体，如puc系列载体(如puc18、puc19)，pet系列载体(如pet30a(+))，prsf系列载体等；
13、进一步的，本专利技术实施例中以puc18为出发载体，构建重组载体puc-ata-sr。
14、一种重组菌株，含有上述dna损伤诱导型启动子或上述表达盒或上述重组载体。
15、进一步的，所述的重组菌株，是将上述表达盒整合至宿主菌中获得。
16、进一步的，所述的重组菌株，是将上述重组载体转化至宿主菌中得到。
17、进一步的，所述宿主菌为大肠杆菌；再进一步为含有t7rna聚合酶的大肠杆菌；更进一步为大肠杆菌e.coli bl21(de3)或e.coli bl21(de3)plyss等。
18、本专利技术实施例中以大肠杆菌e.coli bl21(de3)为宿主菌，构建重组大肠杆菌e.coli bl21(de3)/puc-ata-sr，可用于遗传毒性物质检测。
19、上述dna损伤诱导型启动子、表达盒、重组载体或重组菌株在检测遗传毒性物质中的应用。
20、进一步的，上述dna损伤诱导型启动子、表达盒、重组载体或重组菌株在高通量检测遗传毒性物质中的应用。
21、一种遗传毒性物质高通量检测方法，包括如下步骤：
22、利用上述重组菌株制备重组菌株检测液，将重组菌株检测液与待测样品在微孔板中孵育；同时设置添加相同体积纯溶剂的重组菌株检测液作为阴性对照，测量每小时的吸光度od600，根据吸光度计算菌体存活率，实现高通量检测。
23、所述待测样品为遗传毒性物质，包括但不限于过氧化氢异丙苯(chp)、萘啶酸(nal)、5-氟尿嘧啶(5-fu)、n-甲基-n'-硝基-n-亚硝基胍(mnng)和硫酸二甲酯(dms)等中的至少一种。
24、进一步的，所述的微孔板可选自96孔板、48孔板、24孔板等，本专利技术实施例中使用96孔板。
25、进一步的，所述的孵育的时间为4±1h。
26、本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
27、本专利技术的dna损伤诱导型启动子，是大肠杆菌(比如e.coli bl21(de3))特异的sos诱导型启动子，该启动子是利用t7启动子与sos诱导启动子的阻遏蛋白lexa的结合位点(sos box)所新构成的，将新构成的启动子ata与裂解基因srrz、终止子rrnb结合构成重组载体，并将该重组载体转入到大肠杆菌，得到大肠杆菌检测菌株。将该检测菌株应用于遗传毒性物质的检测，检测了5种直接遗传毒性物质并评价了该启动子的效果。与原始sos/umu体系相比，本体系更灵敏且方便。在本体系比较，本启动子与天然umudc启动子相比具有更低的检测限，更高的响应度，整体表现出更高的灵敏度。结合本检测体系的特点，可以更为直观地检测遗传毒性，在同样浓度的遗传毒性物质作用下，本启动子比天然umudc启动子诱导了更多srrz裂解蛋白的表达，导致菌体的裂解程度更大，菌体存活率更低，从表观来看就是菌液更加澄清透明。该体系可为水、食品等样品的遗传毒性初筛提供技术支持。
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1.一种DNA损伤诱导型启动子，其特征在于：其序列如SEQ ID No.1所示或者其反向互补序列。
2.DNA损伤诱导型启动子相关的生物材料，其特征在于：为下述生物材料中的任意一种或多种组合：
3.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于：
5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于：
6.根据权利要求2～5任一项所述的生物材料，其特征在于：
7.根据权利要求6所述的生物材料，其特征在于：
8.权利要求1所述DNA损伤诱导型启动子或权利要求2～7任一项所述的生物材料的应用，其特征在于：在检测遗传毒性物质中的应用；进一步的，在高通量检测遗传毒性物质中的应用。
9.一种遗传毒性物质高通量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
10.根据权利要求9所述的遗传毒性物质高通量检测方法，其特征在于：
【技术特征摘要】
1.一种dna损伤诱导型启动子，其特征在于：其序列如seq id no.1所示或者其反向互补序列。
2.dna损伤诱导型启动子相关的生物材料，其特征在于：为下述生物材料中的任意一种或多种组合：
3.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于：
5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于：
6.根据权利要求2～5任一项...
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