【技术实现步骤摘要】
本申请属于核酸，具体涉及食管鳞癌细胞核酸适体的筛选及其应用。
技术介绍
1、食管癌（esophageal cancer）是世界上第九大最常见的消化道肿瘤。据2022年全球最新癌症数据统计显示2022年食管癌死亡病例数为44.51万，在全部癌症数中居于第七位。我国2022年食管癌发病数为22.4万，死亡病例数为18.75万，占全球食管癌死亡病例数的42.13%，同时食管癌还呈“高发病率、高死亡率”的趋势。食管癌按组织学特点可分为鳞癌、腺癌及其他类型。食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma, escc）约占中国食管癌的90%，恶性程度程度较高，预后较差，五年生存率为10%，并且早期症状不明显，被发现时大多数病人已是中晚期，超过75%的escc在iii期或iv期被诊断出来。目前escc临床上的治疗方法主要包括手术、放疗、化疗以及新辅助治疗，但是关于食管鳞癌靶向治疗的报道却很少，尚无有效靶向药物。
2、核酸适体（aptamer）是一段对特定靶标分子具有特异性结合能力的rna或单链dna，其碱基数目通常在几十到一百个，它们通过折叠形成不同的二级和三级结构。核酸适体可以结合广泛的靶标，包括小分子化合物、蛋白质、细胞和组织等，核酸适体与这些靶标分子之间的高特异性和高亲和性识别结合，使之成为具有发展为这些靶标的生物传感器和功能调控剂的前景。核酸适体与抗体相比，具有分子量小、易合成、易修饰、成本低、免疫原性低等优势，因此在新药研发、药物靶向载体、生物医学诊断（包括疾病诊断、分子成像）等医药
3、核酸适体的细胞筛选（cell-selex）是以整个活细胞为靶标，通过指数富集配体系统进化（systematic evolution of ligands by exponential enrichment，selex）技术筛选出一条或多条能够特异性识别靶细胞表面标志物的单链dna。细胞筛选无需了解靶标的相关信息，可以对存在于细胞表面的多种受体进行筛选，因此可以获得一组核酸适体探针，这些探针可以特异性识别癌细胞上的生物标志物，根据分子水平差异将它们与正常细胞区分开来。
技术实现思路
1、本申请要解决的技术问题是：如何获得特异性靶向食管鳞癌细胞的核酸适体，并用于制备识别、诊断食管鳞癌或食管鳞癌细胞的试剂。为解决该技术问题，本申请提供以下技术方案：
2、本申请提供组合物，所述组合物包括核酸适体escwl-7a、escwl-68a和escwl-75a中的至少两种，
3、所述核酸适体escwl-7a为核苷酸序列是seq id no.1的单链 dna 分子；
4、所述核酸适体escwl-68a为核苷酸序列是seq id no.2的单链 dna 分子；
5、所述核酸适体escwl-75a为核苷酸序列是seq id no. 3的单链 dna 分子。
6、本申请还提供核酸适体，所述核酸适体包括核酸适体escwl-7a、escwl-68a或escwl-75a中的任一种，
7、所述核酸适体escwl-7a为核苷酸序列是seq id no.1的单链 dna 分子；
8、所述核酸适体escwl-68a为核苷酸序列是seq id no.2的单链 dna 分子；
9、所述核酸适体escwl-75a为核苷酸序列是seq id no.3的单链 dna 分子。
10、本申请还提供核酸适体衍生物，所述核酸适体衍生物为对组成所述核酸适体escwl-7a、escwl-68a和escwl-75a中各个单一核酸适体进行如下操作后所得：对所述单一核酸适体的一端或中间连接荧光素、抗肿瘤药物、放射性元素、生物酶、生物素和/或纳米材料，得到与所述单一核酸适体具有相同功能的核酸适体衍生物。
11、进一步地，所述组合物、核酸适体、核酸适体衍生物用于区分肿瘤细胞和健康细胞。
12、进一步地，所述肿瘤细胞包括但不限于：人食管鳞癌细胞、人宫颈癌细胞、人乳腺癌细胞、人结直肠癌细胞、人膀胱癌细胞、人急性淋巴细胞白血病细胞。
13、进一步地，所述人食管鳞癌细胞包括人食管鳞癌细胞kyse510、人食管鳞癌细胞kyse30、人食管鳞癌细胞kyse150。
14、进一步地，所述人宫颈癌细胞包括人宫颈癌细胞hela。
15、进一步地，所述人乳腺癌细胞包括人乳腺癌细胞sum159。
16、进一步地，所述人结直肠癌细胞包括人结直肠癌细胞hct-8。
17、进一步地，所述人膀胱癌细胞包括人膀胱癌细胞yts-1。
18、进一步地，所述人急性淋巴细胞白血病细胞包括人急性淋巴细胞白血病细胞cem。
19、在本申请的一些实施方式中，是在所述单一核酸适体上连接了异硫氰酸荧光素（fitc）。
20、本申请还提供应用，所述应用为所述的组合物、所述的核酸适体和/或所述的核酸适体衍生物在如下任一所述的应用：
21、（b1）在制备用于鉴定或辅助鉴定肿瘤细胞的产品中的应用；
22、（b2）在鉴定或辅助鉴定肿瘤细胞中的应用；
23、（b3）在制备用于鉴定或辅助鉴定肿瘤患者样品的产品中的应用；
24、（b4）在鉴定或辅助鉴定肿瘤患者样品中的应用；
25、（b5）在制备用于对肿瘤细胞进行成像的产品中的应用
26、（b6）在用于对肿瘤细胞进行成像中的应用；
27、（b7）在制备用于对肿瘤患者样品进行成像的产品中的应用
28、（b8）在对肿瘤患者样品进行成像中的应用；
29、（b9）在制备用于肿瘤细胞和/或肿瘤患者分子分型或辅助分子分型的产品中的应用；
30、（b10）在肿瘤细胞和/或肿瘤患者分子分型或辅助分子分型中的应用；
31、（b11）在制备用于治疗肿瘤的产品中的应用；
32、（b12）作为药物在治疗肿瘤中的应用；
33、（b13）在肿瘤相关生理病理研究中的应用；
34、（b14）在制备肿瘤相关生理病理研究的产品中的应用。
35、进一步地，所述产品包括但不限于：检测试剂、成像试剂、药物、研究模型。
36、具体地，本申请中，（b1）和（b3）中所述的产品可为生物传感器。（b1）至（b4）应用的作用原理是核酸适体与目标物质发生特异性结合时，其构型会随之发生变化。利用这一特性开发基于核酸适体构型变化的电化学传感器，即e-ab（electrochemical aptamer-based）传感器。在医疗诊断等领域有广泛应用前景。
37、具体地，本申请中，（b5）和（b7）中所述的产品可为成像试剂。（b5）至（b8）应用的作用原理是核酸适体与目标物质结合后，通过荧光、化学发光等信号转导机制，实现对目标分子的实时监测和成像。
38本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.组合物，其特征在于，所述组合物包括核酸适体ESCwl-7a、ESCwl-68a和ESCwl-75a中的至少两种，
2.核酸适体，其特征在于，所述核酸适体包括核酸适体ESCwl-7a、ESCwl-68a或ESCwl-75a中的任一种，
3.核酸适体衍生物，其特征在于，所述核酸适体衍生物为对组成权利要求1或2中所述核酸适体ESCwl-7a、ESCwl-68a和ESCwl-75a中各个单一核酸适体进行如下操作后所得：对所述单一核酸适体的一端或中间连接荧光素、抗肿瘤药物、放射性元素、生物酶、生物素和/或纳米材料，得到与所述单一核酸适体具有相同功能的核酸适体衍生物。
4.应用，其特征在于，所述应用为权利要求1所述的组合物、权利要求2所述的核酸适体和/或权利要求3所述的核酸适体衍生物在如下任一所述的应用：
5.一种试剂，其有效成分包括权利要求1所述的组合物、权利要求2所述的核酸适体和/或权利要求3所述的核酸适体衍生物。
6.应用，其特征在于，所述应用为权利要求5所述的试剂在如下任一所述的应用：
7.根据权利要求4或6
8.一种鉴定或辅助鉴定肿瘤细胞的方法，所述方法包括用权利要求1所述的组合物、权利要求2所述的核酸适体、权利要求3所述的核酸适体衍生物和/或权利要求5所述的试剂与所述肿瘤细胞接触，以鉴定或辅助鉴定所述细胞是否为肿瘤细胞。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述肿瘤细胞包括但不限于人食管鳞癌细胞、人宫颈癌细胞、人乳腺癌细胞、人结直肠癌细胞、人膀胱癌细胞、人急性淋巴细胞白血病细胞。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述肿瘤细胞包括但不限于：人食管鳞癌细胞KYSE30、人食管鳞癌细胞KYSE150。
...【技术特征摘要】
1.组合物，其特征在于，所述组合物包括核酸适体escwl-7a、escwl-68a和escwl-75a中的至少两种，
2.核酸适体，其特征在于，所述核酸适体包括核酸适体escwl-7a、escwl-68a或escwl-75a中的任一种，
3.核酸适体衍生物，其特征在于，所述核酸适体衍生物为对组成权利要求1或2中所述核酸适体escwl-7a、escwl-68a和escwl-75a中各个单一核酸适体进行如下操作后所得：对所述单一核酸适体的一端或中间连接荧光素、抗肿瘤药物、放射性元素、生物酶、生物素和/或纳米材料，得到与所述单一核酸适体具有相同功能的核酸适体衍生物。
4.应用，其特征在于，所述应用为权利要求1所述的组合物、权利要求2所述的核酸适体和/或权利要求3所述的核酸适体衍生物在如下任一所述的应用：
5.一种试剂，其有效成分包括权利要求1所述的组合物、权利要求2所述的核酸适体和/或权利要求3所...
【专利技术属性】
技术研发人员：王玲，邴涛，王芳，於晶晶，蒋迪，岑佳盈，尹文娟，苏丹，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：
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