本发明专利技术属于植物生物技术领域，具体涉及一种用于培养人参干细胞的组培培养基和组培方法。本发明专利技术提供了一种用于培养人参干细胞的组培培养基和组培方法，所述组培培养基包括萌发培养基、生长培养基、诱导培养基和增殖培养基。本发明专利技术提供的组培培养基，在NAA、2,4‑D、6‑BA、KT、赤霉素GA<subgt;3</subgt;、酸水解酪蛋白、碳纳米管、活性炭、还原型谷胱甘肽和维生素C共同作用下利于诱导愈伤组织、增殖，并进一步转变成干细胞，有效防止愈伤组织褐化。实施例结果表明：利用本发明专利技术的组培培养基可以在短时间内诱导人参种子萌发出芽，且褐化率为10％，褐化率低，可以快速获得大量的人参干细胞，为人参干细胞的应用奠定基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物生物，具体涉及一种用于培养人参干细胞的组培培养基和组培方法。
技术介绍
1、人参(panaxginseng)是五加科人参属多年生草本植物。人参株高可达60厘米；主根纺锤形；叶为掌状复叶，3～6轮生茎顶；伞形花序单生于茎顶，花序直径约1.5厘米，具30～50朵小花；总花柄通常比较叶片长，柄长15～30厘米，有纵纹；花淡黄绿色。果实扁球形，为鲜红色，直径6～7毫米；种子呈肾形，乳白色。
2、人参在我国分布于辽宁东部、吉林东半部和黑龙江东部。一般生于海拔数百米的落叶阔叶林或针叶阔叶混交林下。人参喜质地疏松、通气性好、排水性好、养料肥沃的砂质壤土；人参喜阴，凉爽而湿润的气候对其生长有利；耐低温，忌强光直射，喜散射较弱的光照。
3、人参的肉质根为强壮滋补药，适用于调整血压、恢复心脏功能、神经衰弱及身体虚弱等症，也有祛痰、健胃、利尿、兴奋等功效。人参的茎、叶、花，果以及加工副产品都是轻工业的原料。人参栽培是农民多种经营的重要项目，能给国家提供大量的税金和利润。
4、干细胞(stem cell)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。现有技术中通常以人参根为外植体，并且脱分化比较困难。
技术实现思路
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p>1、本专利技术提供了一种用于培养人参干细胞的组培培养基和组培方法，应用本专利技术的组培培养基能够以人参种子为外植体组培培养得到人参干细胞。2、为了解决以上技术问题，本专利技术提出了以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种用于培养人参干细胞的组培培养基，所述组培培养基包括萌发培养基、生长培养基、诱导培养基和增殖培养基；
4、所述萌发培养基以ms或1/2ms为基本培养基，还包括2.0～4.0mg/l ga3、0.5～2.0g/l活性炭、30g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；
5、所述生长培养基以b5为基本培养基，还包括1.0～3.0mg/l 6-ba，0.3～0.5mg/lnaa、30g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；
6、所述诱导培养基以b5或ms为基本培养基，还包括0.2～0.5mg/l kt、1.5～2.5mg/l2,4-d、0.5～1.0g/l酸水解酪蛋白、1.0～2.0mg/l碳纳米管、30g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；
7、所述增殖培养基以b5为基本培养基，还包括0.5～0.8mg/lkt、2.0～3.0mg/l2,4-d、1.0～2.0mg/l碳纳米管、酸水解酪蛋白0.5～2.0g/l、0.2～1.5g/l还原型谷胱甘肽、0.5～1.0g/l维生素c、0.5～2.0g/l活性炭、30g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂。
8、优选的，所述萌发培养基的ph值为5.75～5.85，所述生长培养基的ph值为5.75～5.85，所述诱导培养基的ph值为5.75～5.85，所述增殖培养基的ph值为5.75～5.85。
9、本专利技术提供了一种人参干细胞的组培方法，所述组培方法采用上述技术方案所述的组培培养基，包括以下步骤：
10、将人参种子接种至萌发培养基中进行萌发培养，得到发芽种子；所述人参种子为春化处理后的种子；
11、将所述发芽种子转接于生长培养基中进行幼苗生长培养，得到高度5.0～8.0cm的无菌苗；
12、切取所述无菌苗的茎段转接于诱导培养基上进行诱导培养，得到愈伤组织；
13、将所述愈伤组织转接于增殖培养基上进行增殖培养，得到人参干细胞。
14、优选的，所述人参种子为去皮种子且含有胚和胚乳。
15、优选的，所述人参种子在接种前还包括进行清洗和消毒，所述消毒包括先用75％的酒精消毒30～45s，无菌水冲洗2～3次；再用有效氯含量2.0％～3.0％的次氯酸钠溶液消毒6～9min，无菌水冲洗4～5次。
16、优选的，所述萌发培养、幼苗生长培养、诱导培养和增殖培养的温度均为25±1℃。
17、优选的，所述萌发培养为黑暗培养；所述幼苗生长培养和增殖培养均在光暗交替条件下进行；所述诱导培养可以在光暗交替条件下或黑暗条件下进行。
18、优选的，所述光暗交替的光照培养的时间为12～16h/d；所述光照培养的强度为800～1200lx；所述光暗交替的黑暗培养的时间为8～12h/d。
19、优选的，所述萌发培养的时间为15～32d；所述幼苗生长培养的时间为35～60d；所述诱导培养的时间为28～45d；所述增殖培养的时间为60～80d。
20、优选的，所述茎段的长度为1.5～2.5cm。
21、本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种用于培养人参干细胞的组培培养基和，所述组培培养基包括萌发培养基、生长培养基、诱导培养基和增殖培养基。
22、在本专利技术提供的组培培养基中，赤霉素(ga3)的主要作用是促进细胞伸长和胚状体的生长。活性炭可以模拟种子萌发的黑暗条件，同时还可以有效减少生长调节剂的氧化反应和污染，保证培养环境的纯净度，提高培养的成功率，降低褐化率。萘乙酸作为一种植物生长调节剂，促进细胞分裂，促进生长并增强抗性；6-苄氨基嘌呤是一种人工合成的细胞分裂素类植物生长调节剂，在组培培养基中起到促进细胞分裂，诱导芽的产生；2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-d)作为植物生长调节剂，刺激植物生长，2,4-d、kt、碳纳米管和酸水解酪蛋白能够促进愈伤组织的形成和增殖。还原型谷胱甘肽和维生素c可以降低愈伤组织的褐化率。
23、在基本培养基、naa、2,4-d、6-ba、kt、赤霉素ga3、酸水解酪蛋白、碳纳米管、活性炭、还原型谷胱甘肽和维生素c共同作用下利于诱导愈伤组织、增殖，并进一步转变成干细胞，有效防止愈伤组织褐化。实施例结果表明：利用本专利技术的组培培养基可以在短时间内诱导人参种子萌发出芽，获得人参干细胞，且降低褐化率。
24、本专利技术还提供了一种人参干细胞的组培方法，本专利技术的组培方法，经过低温和ga3处理的种子，两周后即可萌芽，种子的萌发率可达70％，所得幼苗的幼嫩茎段可用于愈伤组的诱导，愈伤组织的诱导率达90％，愈伤组织的褐化率低，固体培养基中愈伤组织的增殖系数约为5倍，从而可以快速获得大量的人参干细胞。
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【技术保护点】
1.一种用于培养人参干细胞的组培培养基，其特征在于，所述组培培养基包括萌发培养基、生长培养基、诱导培养基和增殖培养基；
2.根据权利要求1所述的组培培养基，其特征在于，所述萌发培养基的pH值为5.75～5.85，所述生长培养基的pH值为5.75～5.85，所述诱导培养基的pH值为5.75～5.85，所述增殖培养基的pH值为5.75～5.85。
3.一种人参干细胞的组培方法，其特征在于，所述组培方法采用权利要求1或2所述的组培培养基，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述人参种子为去皮种子且含有胚和胚乳。
5.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述人参种子在接种前还包括进行清洗和消毒，所述消毒包括先用75％的酒精消毒30～45s，无菌水冲洗2～3次；再用有效氯含量2.0％～3.0％的次氯酸钠溶液消毒6～9min，无菌水冲洗4～5次。
6.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述萌发培养、幼苗生长培养、诱导培养和增殖培养的温度均为25±1℃。
7.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述萌发培养为黑暗培养；所述幼苗生长培养和增殖培养均在光暗交替条件下进行；所述诱导培养可以在光暗交替条件下或黑暗条件下进行。
8.根据权利要求6所述的组培方法，其特征在于，所述光暗交替的光照培养的时间为12～16h/d；所述光照培养的强度为800～1200lx；所述光暗交替的黑暗培养的时间为8～12h/d。
9.根据权利要求7所述的组培方法，其特征在于，所述萌发培养的时间为15～32d；所述幼苗生长培养的时间为35～60d；所述诱导培养的时间为28～45d；所述增殖培养的时间为60～80d。
10.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述茎段的长度为1.5～2.5cm。
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【技术特征摘要】
1.一种用于培养人参干细胞的组培培养基，其特征在于，所述组培培养基包括萌发培养基、生长培养基、诱导培养基和增殖培养基；
2.根据权利要求1所述的组培培养基，其特征在于，所述萌发培养基的ph值为5.75～5.85，所述生长培养基的ph值为5.75～5.85，所述诱导培养基的ph值为5.75～5.85，所述增殖培养基的ph值为5.75～5.85。
3.一种人参干细胞的组培方法，其特征在于，所述组培方法采用权利要求1或2所述的组培培养基，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述人参种子为去皮种子且含有胚和胚乳。
5.根据权利要求3所述的组培方法，其特征在于，所述人参种子在接种前还包括进行清洗和消毒，所述消毒包括先用75％的酒精消毒30～45s，无菌水冲洗2～3次；再用有效氯含量2.0％～3.0％的次氯酸钠溶液消毒6～9min，无菌水冲洗4...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵兴增，杜建科，许梦洋，柳成航，贾晓东，王紫嫣，谭文玥，张林润，邓华，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：
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