【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物与医药，特别涉及一种msln特异性嵌合抗原受体、car-t细胞及其应用。
技术介绍
1、使用表达嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,car)的自体t细胞进行肿瘤细胞免疫治疗是一种很有前途的策略，靶向cd19的car-t细胞治疗b细胞恶性肿瘤证明了这一点。car是一种合成的受体，由抗原结合结构域组成，该抗原结合结构域通常是来自单克隆抗体的单链可变片段(single-chain fragment variable,scfv)，通过铰链或间隔子连接到跨膜结构域和来自t细胞受体复合体的胞内信号传导结构域，其中包含cd3 zeta(cd3ζ)和共刺激信号结构域。car-t细胞通过car-t的单链抗体与癌细胞表面的特定靶抗原结合来介导肿瘤细胞的杀伤，而无需在主要组织相容性复合体(majorhistocompatibility complex,mhc)呈递抗原。直接与特定的靶抗原结合后，car-t细胞通过胞内信号传导结构域的功能被激活。scfv作为抗原识别结构域，启动并决定t细胞激活的强度，以独立于mhc的方式提供特异性。一般来说，具有高亲和性scfv的car-t细胞具有更强的抗肿瘤活性。因此，制备高亲和力的scfv是构建car-t的基础。
2、间皮素(msln)是一种在细胞表面和血清中发现的糖蛋白，其基因编码一种69kda的前体蛋白，在成熟过程中被酶水解为保留c端约40kda的膜结合蛋白即为成熟的间皮素。水解后的n端约30kda为巨核细胞促进因子(mpf)的片断脱落并释放出细胞外存
3、目前，msln作为靶点在癌症治疗中的研究和应用仍然较少，尤其是结合嵌合抗原受体的应用以及其是否能够以及如何有效应用于更高效地治疗肿瘤和癌症仍待进一步开发。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种msln特异性嵌合抗原受体，其包含msln抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。
2、进一步地，所述msln抗原结合结构域包含如seq id no：1所示的氨基酸序列。
3、进一步地，所述跨膜结构域具有如seq id no：3所示的氨基酸序列。
4、进一步地，所述胞内信号传导结构域包含4-1bb共刺激信号分子和人cd3ζ信号传导结构域，所述4-1bb共刺激信号分子具有如seq id no：4所示的氨基酸序列，所述人cd3ζ信号传导结构域具有如seq id no：5所示的氨基酸序列。
5、进一步地，所述msln特异性嵌合抗原受体还包含连接所述msln抗原结合结构域和跨膜结构域的铰链区，所述铰链区具有如seq id no：6所示的氨基酸序列。
6、进一步地，所述msln特异性嵌合抗原受体在其n端还包含信号肽，所述信号肽具有如seq id no：7所示的氨基酸序列。
7、进一步地，所述msln特异性嵌合抗原受体具有如seq id no：8所示的氨基酸序列。
8、在另一个方面，本专利技术提供了一种分离的核酸分子，其编码如本文所述的msln特异性嵌合抗原受体。
9、在另一个方面，本专利技术提供了一种表达载体，其包含如本文所述的分离的核酸分子。
10、在另一个方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，其包含如本文所述的表达载体。进一步地，所述宿主细胞包括免疫细胞，进一步地，所述免疫细胞包括t细胞、b细胞、nk细胞、单核细胞、巨噬细胞或树突状细胞或其任意组合。
11、在另一个方面，本专利技术提供了如本文所述的msln特异性嵌合抗原受体、分离的核酸分子、表达载体、宿主细胞、药物组合物或试剂盒在制备用于预防和/或治疗过表达msln的癌症的药物中的用途。进一步地，所述过表达msln的癌症包括胃癌。
12、定义
13、如本文中所使用的，术语“嵌合抗原受体”或“car”通常是指一组多肽，在最简单的实施方案中通常有两种，其当在免疫效应细胞中时，提供细胞对靶细胞(通常为癌细胞)的特异性，并产生胞内信号。在一些实施方案中，car包含至少一个胞外抗原结合结构域(如vhh、scfv或其部分)，跨膜结构域和胞质信号传导结构域(本文中也称为“胞内信号传导结构域”)，其包含衍生自刺激分子和/或共刺激分子的功能性信号传导结构域。
14、如本文中所使用的，在嵌合抗原受体中使用的跨膜结构域不受限制，其可以是本领域熟知用于构建嵌合抗原受体的任何跨膜结构域。作为一个实例，跨膜结构域可以具有如seq id no：3所示的氨基酸序列。如本文中所使用的，在嵌合抗原受体中使用的胞内信号传导结构域不受限制，其可以是本领域熟知用于构建嵌合抗原受体的任何胞内信号传导结构域。作为一个实例，胞内信号传导结构域可以包含4-1bb共刺激信号分子和人cd3ζ信号传导结构域。进一步地，所述4-1bb共刺激信号分子可以具有如seq id no：4所示的氨基酸序列。进一步地，所述人cd3ζ信号传导结构域可以具有如seq id no：5所示的氨基酸序列。进一步地，所述嵌合抗原受体还可以包含连接胞外抗原结合结构域和跨膜结构域的铰链区。如本文中所使用的，在嵌合抗原受体中使用的所述铰链区不受限制，其可以是本领域熟知用于在嵌合抗原受体中连接胞外抗原结合结构域和跨膜结构域的任何铰链区。作为一个实例，铰链区可以具有如seq id no：6所示的氨基酸序列。进一步地，所述嵌合抗原受体在其n端还包含信号肽。如本文中所使用的，在嵌合抗原受体中使用的所述信号肽不受限制，其可以是本领域熟知用于嵌合抗原受体的任何信号肽。作为一个实例，所述信号肽可以具有如seq id no：7所示的氨基酸序列。
15、如本文中所使用的，术语“互补决定区”或“cdr”是指抗体可变区中负责抗原结合的氨基酸残基。在抗体中含有三个cdr，命名为cdr1、cdr2和cdr3。这些cdr的精确边界可根据本领域已知的各种编号系统进行定义，例如可按照kabat编号系统、chothia编号系统或imgt编号系统中的定义。对于给定的抗体，本领域技术人员将容易地鉴别各编号系统所定义的cdr。并且，不同编号系统之间的对应关系是本领域技术人员熟知的。
16、如本文中所使用的，术语“特异性结合”是指两分子间的非随机的结合反应，如抗体和其所针对的抗原之间的反应。特异性结合相互作用的强度或亲和力可以由该相互作用的平衡解离常数(kd)表示。在本专利技术中，术语“kd”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数，其用于描述抗体与抗原之间的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种MSLN特异性嵌合抗原受体，其特征在于，包含MSLN抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，
2.根据权利要求1所述的MSLN特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域具有如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的MSLN特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述胞内信号传导结构域包含4-1BB共刺激信号分子和人CD3ζ信号传导结构域，所述4-1BB共刺激信号分子具有如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，所述人CD3ζ信号传导结构域具有如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的MSLN特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体还包含连接所述MSLN抗原结合结构域和跨膜结构域的铰链区，所述铰链区具有如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列，
5.根据权利要求1所述的MSLN特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体具有如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。
6.一种分离的核酸分子，其特征在于，编码根据权利要求1-5中任一项所述的MSLN特
7.一种表达载体，其特征在于，包含根据权利要求6所述的核酸分子。
8.一种宿主细胞，其特征在于，包含根据权利要求7所述的表达载体。
9.根据权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括免疫细胞，
10.根据权利要求1-5中任一项所述的MSLN特异性嵌合抗原受体、根据权利要求6所述的分离的核酸分子、根据权利要求7所述的表达载体或者根据权利要求8或9所述的宿主细胞在制备用于预防和/或治疗过表达MSLN的癌症的药物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种msln特异性嵌合抗原受体，其特征在于，包含msln抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，
2.根据权利要求1所述的msln特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域具有如seq id no：3所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的msln特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述胞内信号传导结构域包含4-1bb共刺激信号分子和人cd3ζ信号传导结构域，所述4-1bb共刺激信号分子具有如seq id no：4所示的氨基酸序列，所述人cd3ζ信号传导结构域具有如seq id no：5所示的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的msln特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体还包含连接所述msln抗原结合结构域和跨膜结构域的铰链区，所述铰链区具有如seq id no：6所示的氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：田晓丽，
申请(专利权)人：上海怡豪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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