一种载脂蛋白B检测试剂盒及其使用方法技术

技术编号：44498859 阅读：0 留言：0更新日期：2025-03-04 18:07

本发明专利技术提供一种载脂蛋白B检测试剂盒及其使用方法，其包括R1试剂和R2试剂，其中R1试剂包括的成分为：HEPES缓冲液40‑80mmo l/L，聚乙二醇6000为1g/L至5g/L；NaC l为5g/L至9g/L；防腐剂为1g/L至5g/L，表面活性剂为1g/L至5g/L；R1试剂的pH为7.0至7.5；本发明专利技术在R1试剂中通过pH为7.0至7.5，从而使得pH在载脂蛋白B的等电点以下，这样当两者混合之后，能够使得检测样本中的蛋白呈现弱负电荷性质；相应地，R2试剂中加入了透明质酸，透明质酸能够与试剂中的抗人APOB抗体形成弱共价键结合的一体物质，并且透明质酸带有正电荷，因此通过电荷的吸引力，能够快速使得载脂蛋白B与抗人APOB抗体结合，这样避免了需要长时间孵育的问题，缩短检测时间，并且保证检测结果准确性。

全部详细技术资料下载

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测技术，具体涉及一种载脂蛋白b检测试剂盒及其使用方法。

技术介绍

1、载脂蛋白b(apolipoprotein b，简称apob)是一种关键的脂蛋白，主要在肝脏和肠道合成，负责转运和代谢体内的脂类物质，包括胆固醇和甘油三酯。

2、载脂蛋白b的检测具有多种方法，其中酶联免疫吸附测定(elisa)是非常常见的一种。酶联免疫吸附测定(elisa)用于定量测定apob的浓度。这是一种常用的实验室技术，具有高灵敏度和特异性。

3、然而，在现有的用于载脂蛋白b检测的试剂盒中，通常采用载脂蛋白b与抗人apob抗体结合后形成浊度，并且通过仪器完成检测测定浓度；然而，载脂蛋白b与抗人apob抗体的结合过程依赖于蛋白本有的特性，没有予以额外加速，这样就造成蛋白结合过程缓慢或者结合不彻底的问题，这样容易造成检测结果的失真和检测过程的缓慢。

技术实现思路

1、为解决上述技术中存在的问题，本专利技术提供一种提高载脂蛋白b与apob抗体结合能力和速率的技术，以提高检测效果。

2、本专利技术首先提供的一种载脂蛋白b检测试剂盒，其包括r1试剂和r2试剂，其中r1试剂包括的成分为：hepes缓冲液40-80mmo l/l，聚乙二醇6000为1g/l至5g/l；nac l为5g/l至9g/l；防腐剂为1g/l至5g/l，表面活性剂为1g/l至5g/l；r1试剂的ph为7.0至7.5；

3、另外，r2试剂包括的成分为：抗人apob抗体为20mg/l至3

4、优选地，防腐剂为叠氮钠、proc l i n300、mi t和苯甲酸钠中的一种或多种。

5、优选地，表面活性剂选自吐温-20、曲拉通x-100和聚氧乙烯烷基醚emulgen 709中的一种或多种。

6、优选地，所述试剂r1与试剂r2的用量体积比为3:1。

7、本专利技术提供的所述的载脂蛋白b检测试剂盒的使用方法，其包括下面的步骤：

8、步骤1：测定r1试剂的吸光度为a1空白，将r1试剂和血清样本进行混合，在37℃环境孵育2min，测定吸光度为a1样本，将r1试剂和已知浓度的校准品进行混合，混合均匀，测定吸光度为a1校准；

9、步骤2：测定r2试剂的吸光度为a2空白，将r1试剂、r2试剂、血清样本进行混合，混合均匀后在37℃孵育2min，测定吸光度为a2样本，将r1试剂、r2试剂、已知载脂蛋白b的浓度的校准品进行混合，混合均匀，测定其吸光度为a2校准；

10、步骤3：血清样本中载脂蛋白b含量为δa0/δas*cs，其中：以空白管吸光度为对照的样本管吸光度δa0＝(a2样本-a1样本)-(a2空白-a1空白)，以空白管吸光度为对照的校准品吸光度δas＝(a2校准-a1校准)-(a2空白-a1空白)；cs：校准品中载脂蛋白b的浓度。

11、本专利技术的有益效果为：本专利技术在r1试剂中通过ph为7.0至7.5，从而使得ph在载脂蛋白b的等电点以下，这样当两者混合之后，能够使得检测样本中的蛋白呈现弱正电荷性质；相应地，r2试剂中加入了透明质酸，透明质酸能够与试剂中的抗人apob抗体形成结合物质；并且透明质酸带有负电荷，因此通过静电电荷的吸引力，能够快速使得载脂蛋白b与抗人apob抗体结合，这样避免了需要长时间孵育的问题，缩短检测时间，并且保证检测结果准确性。

12、另外，透明质酸本身具有防腐性能，因此在r2试剂中就不需要额外添加防腐剂，这样节省成本，并且保证了试剂的防腐性，避免存放变质问题。

13、透明质酸在r2试剂中与抗人apob抗体结合的主要机理是基于空间结构和结合位点，即透明质酸的长链结构可在空间上提供多个结合位点，从而允许其与抗人apob抗体分子部分结合。透明质酸同时对于两种蛋白抗人apob抗体和载脂蛋白b具有吸附和结合能力，因此会加快两者的合体速度，从而提高检测速率。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种载脂蛋白B检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂，其中R1试剂包括的成分为：HEPES缓冲液40-80mmol/L，聚乙二醇6000为1g/L至5g/L；NaCl为5g/L至9g/L；防腐剂为1g/L至5g/L，表面活性剂为1g/L至5g/L；R1试剂的pH为7.0至7.5；

2.根据权利要求1所述的载脂蛋白B检测试剂盒，其特征在于，防腐剂为叠氮钠、proclin300、MIT和苯甲酸钠中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的载脂蛋白B检测试剂盒，其特征在于，表面活性剂选自吐温-20、曲拉通x-100和聚氧乙烯烷基醚EMULGEN 709中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的载脂蛋白B检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1与试剂R2的用量体积比为3:1。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的载脂蛋白B检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括下面的步骤：

【技术特征摘要】

1.一种载脂蛋白b检测试剂盒，其特征在于，包括r1试剂和r2试剂，其中r1试剂包括的成分为：hepes缓冲液40-80mmol/l，聚乙二醇6000为1g/l至5g/l；nacl为5g/l至9g/l；防腐剂为1g/l至5g/l，表面活性剂为1g/l至5g/l；r1试剂的ph为7.0至7.5；

2.根据权利要求1所述的载脂蛋白b检测试剂盒，其特征在于，防腐剂为叠氮钠、proclin300、mit和苯甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙文勇，董文勇，
申请(专利权)人：东软威特曼生物科技南京有限公司，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载我是这个专利的主人