【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及山药脱毒，具体为一种佛手山药组培脱毒方法。
技术介绍
1、山药是薯蓣科，及其近缘种植物地下块茎的总称，为一年生或多年生的单子叶缠绕性藤本植物。山药在中国种植广泛，河南、安徽、山东、湖北、江西、湖南、贵州、云南北部、四川、甘肃东部和陕西南部等地均有种植，佛手山药是典型的地方品种之一。佛手山药是地下块茎作物，主要通过块茎无性繁殖留种。由于佛手山药主产区常年种植山药，品种混杂，品系不纯，营养繁殖单一，导致佛手山药主产区病害积累、产量下降、品种退化、商品性差，严重制约了佛手山药产业的发展。
2、佛手山药经过多年种植，其种芋上病毒常年积累，致使山药藤蔓矮小，叶片卷缩，地下块茎畸形，皮毛易出现黑斑，产量逐年递减，严重影响佛手山药市场价值。而现有的山药脱毒方法由于缺少对植物离体组织进行无菌培养和高温脱毒，无法稳定有效的获得佛手山药脱毒苗。
3、因此，我们提出了一种佛手山药组培脱毒方法，以便于解决上述中提出的问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种佛手山药组培脱毒方法，以解决上述
技术介绍
提出的目前市场上的佛手山药经过多年种植，其种芋上病毒常年积累，致使山药藤蔓矮小，叶片卷缩，地下块茎畸形，皮毛易出现黑斑，产量逐年递减，严重影响佛手山药市场价值。而现有的山药脱毒方法由于缺少对植物离体组织进行无菌培养和高温脱毒，无法稳定有效的获得佛手山药脱毒苗。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种佛手山药组培脱毒方法，方法具体步骤如下：
3、步骤1：准备实验材料
4、以田间生长的佛手山药茎蔓为实验材料，从佛手山药顶端取出约10cm长的幼嫩茎段，在将其剪成3cm左右的带节茎段，从而获取最初的无菌苗材料；
5、步骤2：酒精消毒
6、将剪切好的带节茎段首先通过自来水将表面进行冲洗，随后用75%纯度的酒精浸泡30-60s，随后再取出无菌水，将浸泡好的带节茎段放在超净工作台上进行一次冲洗；
7、步骤3：消毒剂消毒
8、使用消毒剂对带节茎段进行处理，而消毒剂的成分分别为0.1%升汞和3%次氯酸钠溶液，消毒处理时间为8-15min，随后将带节茎段取出，通过无菌水冲洗五次；
9、步骤4：放入培养基进行暗培和光培
10、带节茎段在冲洗后，将其放置在超净工作台上，将茎段切成1cm左右仅带1个节的小段，将切好的茎段小节放置于ms+6-ba（0.4-0.5mg/l）+naa（0.01-0.10mg/l），ph5.8的培养基中培养；培养温度为25℃，先暗培养1周后，再转移到1000-1500lx，16h/d的光照条件下培养2周；比较不同消毒剂不同时间处理对佛手山药幼嫩茎段的消毒效果；
11、步骤5：无菌苗热处理
12、将生根无菌苗置于逐步升温条件下（25→38℃）培养2周，随后在高温条件下（39-40℃）继续培养3周，接着在逐步降温条件下（39→25℃）培养1-2周；
13、步骤6：茎尖培养脱毒苗
14、切取热处理后的无菌苗茎尖，转接至ms+6-ba（0.1-0.5mg/l）+naa（0.01-0.05mg/l）+蔗糖30g/l+琼脂5g/l，ph5.8的培养基中培养，获得佛手山药组培脱毒苗。
15、由于对佛手山药植物组织的组培脱毒，从而解决了佛手山药组培易于褐化的难题，完善了佛手山药的无菌组织培养体系，且在进行下一步的实验或对比时，有着充分的实验资料，从而可以有效的减少佛手山药内部和外部的毒素，使其在生长的过程中，可以更好的避免枯死或其他意外情况，增加了佛手山药的存活率、无菌率和出芽率。
16、2.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述佛手山药幼嫩茎段的无菌率和出芽率公式为：
17、无菌率=(无菌材料数/外植体总数)×100%
18、成活率=(成活材料率/外植体总数)×100%。
19、采用上述技术方案能够使使用者通过公式来判断计算佛手山药茎段的成活率和无菌率，从而增加了实验数据的准确性。
20、作为本专利技术的优选技术方案，步骤3中佛手山药茎段在0.1%升汞和3%次氯酸钠溶液的消毒剂中的消毒时间越长，无菌材料便也会随之增加，但3%的次氯酸钠消毒时间过长材料的成活数就随之减少，所以消毒的时间过长茎段产生的毒素不利于外植体的生长；采用上述技术方案能够使佛手山药茎段在延长消毒时间后，可以增加无菌材料，且通过控制消毒的时间，便可以控制茎段产生的毒素。
21、作为本专利技术的优选技术方案，步骤3中佛手山药茎段在相同的处理时间0.1%升汞明显比3%次氯酸钠获得的无菌材料要多，成活率也相对较高；说明0.1%升汞消毒效果较好。
22、作为本专利技术的优选技术方案，步骤3中佛手山药茎段消毒若采用0.1%升汞消毒15min，便可以达到优化消毒的效果,而在调试消毒剂的过程中，可根据不同用量来进行调整。
23、作为本专利技术的优选技术方案，步骤4中，将已经消毒切成1cm左右的带节茎段放置在ph5.8～6.2的不同组分的培养基上培养时；15天左右后，茎段腋芽处便会出现白色愈伤组织，随着愈伤组织的生长，培养基逐步褐化，愈伤组织也随着出现了褐化。
24、作为本专利技术的优选技术方案，步骤4中，在1/2ms，1/5ms不添加任何激素的情况下，1/2ms，1/5ms都有利于根系的产生，并且1/2ms产生的根系最早，根系相对于1/5ms来说比较健壮，这说明1/2ms更有利于佛手山药的生根；从消毒的带节茎段不定芽分化率来看ms+6-ba0.4 mg/l +naa0.01 mg/l和ms+6-ba 0.4 mg/l +naa 0.04 mg/l芽分化率在这组试验中相对较好。
25、作为本专利技术的优选技术方案，在步骤4中，消毒后的带节茎段在ms+6-ba0.4mg·l-1+naa0.01mg·l-1条件下的培养基中，大部分无菌材料直接由茎节分化成芽；而在ms+6-ba0.4 mg/l +naa 0.04 mg/l条件下，不仅出愈率高，出愈量也多，且茎段是先有愈伤组织，随后再产生不定芽；所以ms+6-ba 0.4 mg/l +naa 0.04 mg/l更利于佛手山药不定芽的形成。
26、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
27、1.由于对佛手山药植物组织的组培脱毒，从而解决了佛手山药组培易于褐化的难题，完善了佛手山药的无菌组织培养体系，且在进行下一步的实验或对比时，有着充分的实验资料，从而可以有效的减少佛手山药内部和外部的毒素，使其在生长的过程中，可以更好的避免枯死或其他意外情况，增加了佛手山药的存活率、无菌率和出芽率，并且通过无菌苗的热处理获得稳定的佛手山药组培脱毒苗；
28、2.通过使佛手山药茎段在不同的时间段内进行浸泡，可以得出那种的脱毒效果最佳，且可以使佛手山药无菌率增加，从而使使用者在进行实验比对时可以更加轻松。
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1.一种佛手山药组培脱毒方法，其特征在于方法具体步骤如下：
2.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述佛手山药幼嫩茎段的无菌率和出芽率公式为：
3.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述步骤3中佛手山药茎段在0.1%升汞和3%次氯酸钠溶液的消毒剂中的消毒时间越长，无菌材料便也会随之增加，但3%的次氯酸钠消毒时间过长材料的成活数就随之减少，所以消毒的时间过长茎段产生的毒素不利于外植体的生长。
4.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述步骤3中佛手山药茎段在相同的处理时间0.1%升汞明显比3%次氯酸钠获得的无菌材料要多，成活率也相对较高；说明0.1%升汞消毒效果较好。
5.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述步骤3中佛手山药茎段消毒若采用0.1%升汞消毒15min，便可以达到优化消毒的效果。
6.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述步骤4中，将已经消毒切成1cm左右的带节茎段放置在pH5.8-6.2的不同组分的培养基上培养
7.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述步骤4中，在1/2MS，1/5MS不添加任何激素的情况下，1/2MS，1/5MS都有利于根系的产生，并且1/2MS产生的根系最早，根系相对于1/5MS来说比较健壮，这说明1/2MS更有利于佛手山药的生根；从消毒的带节茎段不定芽分化率来看MS+6-BA 0.4 mg/L +NAA 0.01 mg/L和MS+6-BA 0.4 mg/L +NAA0.04 mg/L芽分化率在这组试验中相对较好。
8.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述步骤4中，带节茎段在MS+6-BA0.4 mg/L +NAA0.01 mg/L条件下，大部分无菌材料直接由茎节分化成芽；而在MS+6-BA 0.4 mg/L +NAA 0.04 mg/L条件下，不仅出愈率高，出愈量也多，且茎段是先有愈伤组织，随后再产生不定芽；所以MS+6-BA 0.4 mg/L +NAA 0.04 mg/L更利于佛手山药不定芽的形成。
...【技术特征摘要】
1.一种佛手山药组培脱毒方法，其特征在于方法具体步骤如下：
2.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述佛手山药幼嫩茎段的无菌率和出芽率公式为：
3.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述步骤3中佛手山药茎段在0.1%升汞和3%次氯酸钠溶液的消毒剂中的消毒时间越长，无菌材料便也会随之增加，但3%的次氯酸钠消毒时间过长材料的成活数就随之减少，所以消毒的时间过长茎段产生的毒素不利于外植体的生长。
4.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述步骤3中佛手山药茎段在相同的处理时间0.1%升汞明显比3%次氯酸钠获得的无菌材料要多，成活率也相对较高；说明0.1%升汞消毒效果较好。
5.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述步骤3中佛手山药茎段消毒若采用0.1%升汞消毒15min，便可以达到优化消毒的效果。
6.根据权利要求1所述的佛手山药组培脱毒方法，其特征在于，所述步骤4中，将已经消毒切成1cm左右的带节茎段放置在ph5.8-6.2的不同组分的培养基上培养时；15...
【专利技术属性】
技术研发人员：向发云，吕博，桂宝川，刘金华，过聪，陈锋，徐为，程剑，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院经济作物研究所，
类型：发明
国别省市：
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