【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及西瓜育种分子生物学，特别是涉及一种检测西瓜果皮光泽性状的kasp标记引物组合及其应用。
技术介绍
1、西瓜是重要的园艺作物，我国是西瓜产销第一大国，产量一直保持世界第一，在世界园艺产业中占有重要地位。果皮光泽度是西瓜果实品质评价及种质改良的重要经济性状，对西瓜的商品性具有较高影响。研究表明，具有高光泽的植物具有良好的品质，表现为果实质地紧实、耐盐碱、抗旱等。因此，选育高光泽的西瓜品种是西瓜育种工作者的重要目标之一。
2、在西瓜果皮光泽研究方面，1988年，corey和schlimme对两个西瓜品种在果实成熟过程中的果皮光泽变化进行了分析，发现果皮光泽与西瓜果肉成熟度相关，当成熟期西瓜可溶性固形物含量和果肉颜色变化趋于稳定时，“查尔斯顿”西瓜品种的果皮光泽值开始下降。同时发现，果皮光泽在不同品种之间存在差异，推测其可能也与果皮表面蜡粉的数量和结构有关。因此提出，果皮光泽值可以作为果实成熟的收获标准。开展果皮光泽度与果皮表面蜡粉的定量和结构变化果肉质地的相关性研究，可以为在收获和分级操作中选择高品质西瓜提供一种无损检测技术。随后，研究人员分别通过遗传定位、文库构建、rna-seq等技术对西瓜果皮色泽相关基因进行了筛选和克隆。但是这些研究都主要以果皮颜色的形成为研究目标，比如，黄色果皮和绿色果皮颜色的差异基因、深绿色果实条纹和浅绿色果实条纹的差异基因等，没有开展果皮光泽的相关研究。
3、综上，目前对西瓜果皮光泽性状的鉴定仍限于目测，用于鉴定西瓜果皮光泽性状分子标记还未见报道。因此需要提供一种能够快
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种检测西瓜果皮光泽性状的kasp标记引物组合及其应用，以解决上述现有技术存在的问题。应用本专利技术的kasp标记引物组合可以准确快速的鉴定西瓜果皮光泽性状。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、技术方案一：所述kasp标记引物组合包括上游引物1、上游引物2和下游引物1；所述上游引物1的核苷酸序列如seq id no.1所示；所述上游引物2的核苷酸序列如seq idno.2所示；所述下游引物1的核苷酸序列如seq id no.3所示。
4、优选的，与西瓜果皮光泽性状紧密连锁的分子标记，为西瓜基因组8号染色体上27993083bp位置处发生的t向a的突变，针对西瓜果皮光泽性状突变设计的引物如下：
5、fam荧光标记的上游引物1(cla_27993083-f1)：5’-gaaggtgaccaagttcatgctctctatgaatgcaaaattctacaaact-3’(seq id no.1)；
6、vic荧光标记的上游引物2(cla_27993083-f2)：5’-gaaggtcggagtcaacggattctctatgaatgcaaaattctacaaaca-3’(seq id no.2)；
7、下游引物1(cla_27993083-r)：5’-aaacacaaggtaggagtgggct-3’(seq id no.3)。
8、优选的，cla_27993083-f1、cla_27993083-f2两条引物5’端分别连接了fam和vic荧光接头序列，fam信号：gaaggtgaccaagttcatgct(seq id no.4)；vic信号：gaaggtcggagtcaacggatt(seq id no.5)。
9、优选的，所述的分子标记对应的基因型为：a:a为果皮有光泽的纯合基因型；t:t为果皮无光泽的纯合基因型；t:a为果皮无光泽的杂合基因型。
10、进一步地，所述kasp标记引物组合以kasp分子标记cla_27993083作为检测靶标；所述cla_27993083位于西瓜8号染色体第27993083bp位碱基处。
11、技术方案二：一种鉴定西瓜果皮光泽性状的方法，包括以下步骤：
12、提取待鉴定西瓜基因组dna；以所述待鉴定西瓜基因组dna为模板，采用所述的kasp标记引物组合进行pcr扩增；根据pcr荧光信号的差异，鉴别出待鉴定西瓜样品的基因型；所述基因型包括a:a基因型、t:t基因型和t:a基因型。
13、进一步地，所述pcr扩增的体系包括：2.5μl 2×kaspmaster mix、引物混合1.25μl和dna模板1.25μl；所述引物包括上游引物1、上游引物2和下游引物1；所述引物混合是将所述上游引物1、所述上游引物2和所述下游引物1按照体积比为1:1:3的体积比混合。
14、进一步地，所述pcr扩增的程序为：95℃预变性2min；95℃变性20s，61-55℃退火和延伸60s，每个循环降低0.6℃，10个循环；95℃变性20s，55℃退火和延伸60s，27个循环。
15、进一步地，所述鉴别出待鉴定西瓜样品的基因型，包括：读取pcr产物荧光信号值，若是a:a基因型，则判定为西瓜果皮有光泽的纯合单株；若是t:t基因型，则判定为西瓜果皮无光泽的纯合单株；若是t:a基因型，则判定为西瓜果皮无光泽的杂合单株。
16、技术方案三：所述的kasp标记引物组合在检测西瓜果皮光泽性状中的应用。
17、本专利技术公开了以下技术效果：
18、本专利技术利用gwas方法定位到一个控制西瓜果皮光泽的显著关联位点，根据该变异位点，开发了与西瓜果皮光泽相关联的kasp分子标记。应用本专利技术提供的检测西瓜果皮光泽的kasp标记进行西瓜果皮光泽性状的检测，一方面操作简便，用时少。传统肉眼观察需要一个生长季(大约4～5个月)在西瓜果实成熟期才能观察，使用该kasp标记检测仅需要1～2个小时。非常适合大群体多样品的批量检测。另一方面，传统的杂交选育需要5～6代才能得到性状稳定的育种材料，使用该kasp标记仅3代即可得到性状稳定的材料，极大地缩短了育种周期，提高了育种效率。总之，本专利技术针对西瓜果皮光泽性状鉴定技术缺乏的现象，提供一种鉴定西瓜果皮光泽的kasp标记引物组合，应用该kasp标记引物组合，可以准确快速的鉴定西瓜果皮光泽性状，为有光泽果皮西瓜材料的筛选、鉴定及有光泽果皮西瓜品种选育提供新的技术路径。
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1.一种检测西瓜果皮光泽性状的KASP标记引物组合，其特征在于，所述KASP标记引物组合包括上游引物1、上游引物2和下游引物1；所述上游引物1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述上游引物2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述下游引物1的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的KASP标记引物组合，其特征在于，所述KASP标记引物组合以KASP分子标记Cla_27993083作为检测靶标。
3.根据权利要求2所述的KASP标记引物组合，其特征在于，所述Cla_27993083位于西瓜8号染色体第27993083位碱基处。
4.一种鉴定西瓜果皮光泽性状的方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的体系包括：2.5μL 2×KASPmaster mix、引物混合1.25μL和DNA模板1.25μL；所述引物包括上游引物1、上游引物2和下游引物1；所述引物混合是将所述上游引物1、所述上游引物2和所述下游引物1按照体积比为1:1:3的体积比混合。p>
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：95℃预变性2min；95℃变性20s，61-55℃退火和延伸60s，每个循环降低0.6℃，10个循环；95℃变性20s，55℃退火和延伸60s，27个循环。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述鉴别出待鉴定西瓜样品的基因型，包括：读取PCR产物荧光信号值，若是A:A基因型，则判定为西瓜果皮有光泽的纯合单株；若是T:T基因型，则判定为西瓜果皮无光泽的纯合单株；若是T:A基因型，则判定为西瓜果皮无光泽的杂合单株。
8.权利要求1-3任一项所述的KASP标记引物组合在检测西瓜果皮光泽性状中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种检测西瓜果皮光泽性状的kasp标记引物组合，其特征在于，所述kasp标记引物组合包括上游引物1、上游引物2和下游引物1；所述上游引物1的核苷酸序列如seq id no.1所示；所述上游引物2的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述下游引物1的核苷酸序列如seq id no.3所示。
2.根据权利要求1所述的kasp标记引物组合，其特征在于，所述kasp标记引物组合以kasp分子标记cla_27993083作为检测靶标。
3.根据权利要求2所述的kasp标记引物组合，其特征在于，所述cla_27993083位于西瓜8号染色体第27993083位碱基处。
4.一种鉴定西瓜果皮光泽性状的方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的体系包括：2.5μl 2×kaspmaster mix、引物...
【专利技术属性】
技术研发人员：张曼，陈一帆，徐锦华，方思明，刘金秋，羊杏平，娄丽娜，徐建，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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