【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物检测领域，更具体地说，它涉及一种用于检测心衰生物标志物nt-probnp的侧向层析纸基传感器。
技术介绍
1、心血管疾病是全球最常见的死亡原因，而心力衰竭是最普遍和最致命的心血管疾病之一。世界卫生组织估计，心力衰竭的患病人数预计到2030年将增加46％，到2034年将增加到157万，2035年心血管疾病医疗的成本将超过1万亿美元。
2、nt-probnp(n-末端脑钠肽前体)是一种非活性激素原，作为心衰的重要生物标志物，其检测对于心衰的诊断、病情评估及预后判断具有重要意义。通常，心力衰竭患者的nt-probnp水平高于心脏功能正常的患者。nt-probnp水平随心衰程度加重而显著升高，能反映心脏功能受损的严重程度，有助于早期识别心衰患者，并监测疾病进展。
3、nt-probnp检测已成为心衰临床管理的常规手段，广泛应用于急诊科、心内科等科室。然而，目前nt-probnp的检测主要通过血液样本进行，利用免疫学方法如电化学发光法、免疫荧光法或免疫比浊法等，在实验室中定量测定其浓度。这种检查复杂、耗时长，且需要依靠精准的实验仪器测量，极大程度的限制了其广泛的临床应用。
4、鉴于此，亟需提出一种能够方便、快捷的检测心衰生物标志物nt-probnp的方法。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本申请提供一种用于检测心衰生物标志物nt-probnp的侧向层析纸以及传感器。该侧向层析纸可实现肉眼对血清、血浆和尿液等样本中的心力衰竭生物标志物n
2、本申请提供如下的技术方案：
3、第一方面，本申请提供一种用于检测心衰生物标志物nt-probnp的侧向层析纸，该侧向层析纸由底板和沿样本层析方向顺次搭接粘贴于底板上的样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫组成；
4、所述结合垫包被有金纳米粒子偶联适配体1，所述适配体1是能够特异性结合nt-probnp的适配体；
5、所述检测垫通过在不同位置包被nt-probnp特异性抗体和适配体2，分别形成检测线和质控线，所述适配体2的核苷酸序列与所述适配体1的部分碱基互补，且所述适配体2偶联有链霉亲和素。
6、进一步地，上述适配体1的核苷酸序列如seq id no.1所示。
7、进一步地，上述适配体2的核苷酸序列如seq id no.2所示。
8、具体地，本申请中使用的核苷酸和抗体如表1所示：
9、表1.
10、
11、
12、进一步地，上述金纳米粒子偶联适配体1的制备方法如下：
13、将巯基化适配体1与还原剂混合孵育0.5-1.5h，得到活化的适配体1溶液；
14、将金纳米粒子溶液调节至碱性后，与活化后的所述适配体1溶液混合，孵育1.5-2.5h后加入三磷酸脱氧腺苷二钠，孵育0.5-1.5h。
15、在上述技术方案中，先利用还原剂将巯基化适配体1中的二硫键还原为巯基(-sh)，由于巯基与金表面之间有很强的亲和力，适配体1可以通过其巯基与aunps表面形成金-硫键，从而稳定地附着在aunps上。其后加入三磷酸脱氧腺苷二钠共孵育的目的是aunps上的datp残基通过含氮碱基有助于减少与颗粒的非特异性dna结合。datp对非特异性结合的减少有助于在随后的检测过程中实现对ssdna的适当取值。而且au-np表面的剩余空间可以用datp封闭。
16、其更容易与金纳米颗粒表面形成稳定的化学键。
17、进一步地，上述还原剂为三(2-羧乙基)膦，所述巯基化适配体1与所述还原剂的摩尔比为(45-55)：1。
18、进一步地，上述金纳米粒子与所述适配体1以及所述三磷酸脱氧腺苷二钠的摩尔比为1：(70-80)：1000。
19、进一步地，上述结合垫是通过将玻璃纤维用共轭缓冲液浸泡18-30h后，在55-65℃下干燥1-3h后获得，所述共轭缓冲液为含有1-10％ bsa、1-10％蔗糖和0.1-0.5％ tween20的pbs缓冲液。
20、进一步地，上述结合垫上包被的所述金纳米粒子偶联适配体1的含量为：0.002-0.003mmol。
21、第二方面，本申请还提供一种用于检测心衰生物标志物nt-probnp的传感器，其包括上述侧向层析纸、以及用于对所述侧向层析纸的检测结果进行图像采集和数据分析的元件。
22、进一步地，上述传感器对nt-probnp的检测范围为0.5-200ng/ml。
23、综上所述，本申请具有以下有益效果：
24、1、本申请提供的这种侧向层析纸，以金纳米粒子偶联适配体1来包被结合垫，并在检测垫的不同位置包被nt-probnp特异性抗体和适配体2，作为检测线和质控线，形成能够对心衰生物标志物nt-probnp进行特异性检测的侧向层析纸。其具有特异选择性、低成本效益和高效率，使其能够进行床旁(poc)分析，尤其是在短时间内需要得到尽可能精确的结果时使用(例如心血管事件)。
25、2、本申请提供的这种传感器，利用上述侧向层析纸，以及智能设备上的图像采集和数据分析应用程序，可通过对检测后的侧向层析纸进行图像采集，通过对图像上检测线的颜色强度进行分析，可获得生物样品中nt-probnp在动态范围内的准确浓度。
26、3、相比于价格昂贵、免疫原性有限、批次差异大的体内制备的抗体，本申请采用的核酸适配体具有易于生成、靶点范围广、易于修饰、结合亲和力高、特异性高、结构灵活、化学合成可修饰、生物相容性好、稳定性高等显著优势。尽管所有报道的nt-probnp检测方法都使用了抗体，但在本专利技术中，设计了一种新的方法，该方法试图最大限度地减少抗体的使用量，仅在测试线中使用抗体作为捕获探针，将适配体与aunps结合使用，并且还用作对照垫中的互补dna，具有很大的优点。
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1.一种用于检测心衰生物标志物NT-proBNP的侧向层析纸，其特征在于，所述侧向层析纸由底板和沿样本层析方向顺次搭接粘贴于底板上的样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫组成；
2.根据权利要求1所述的用于检测心衰生物标志物NT-proBNP的侧向层析纸，其特征在于，所述适配体1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求2所述的用于检测心衰生物标志物NT-proBNP的侧向层析纸，其特征在于，所述适配体2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.根据权利要求1所述的用于检测心衰生物标志物NT-proBNP的侧向层析纸，其特征在于，所述金纳米粒子偶联适配体1的制备方法如下：
5.根据权利要求4所述的用于检测心衰生物标志物NT-proBNP的侧向层析纸，其特征在于，所述还原剂为三(2-羧乙基)膦，所述巯基化适配体1与所述还原剂的摩尔比为(45-55)：1。
6.根据权利要求4所述的用于检测心衰生物标志物NT-proBNP的侧向层析纸，其特征在于，所述金纳米粒子与所述适配体1以及所述三磷酸脱氧腺苷二钠的摩尔比为
7.根据权利要求1所述的用于检测心衰生物标志物NT-proBNP的侧向层析纸，其特征在于，所述结合垫是通过将玻璃纤维用共轭缓冲液浸泡18-30h后，在55-65℃下干燥1-3h后获得，所述共轭缓冲液为含有1-10％BSA、1-10％蔗糖和0.1-0.5％Tween 20的PBS缓冲液。
8.根据权利要求1所述的用于检测心衰生物标志物NT-proBNP的侧向层析纸，其特征在于，所述结合垫上包被的所述金纳米粒子偶联适配体1的含量为：0.002-0.003mmoL。
9.一种用于检测心衰生物标志物NT-proBNP的传感器，其特征在于，其包括如权利要求1-8任一项所述的侧向层析纸、以及用于对所述侧向层析纸的检测结果进行图像采集和数据分析的元件。
10.根据权利要求9所述的用于检测心衰生物标志物NT-proBNP的传感器，其特征在于，所述传感器对NT-proBNP的检测范围为0.5-200ng/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测心衰生物标志物nt-probnp的侧向层析纸，其特征在于，所述侧向层析纸由底板和沿样本层析方向顺次搭接粘贴于底板上的样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫组成；
2.根据权利要求1所述的用于检测心衰生物标志物nt-probnp的侧向层析纸，其特征在于，所述适配体1的核苷酸序列如seq id no.1所示。
3.根据权利要求2所述的用于检测心衰生物标志物nt-probnp的侧向层析纸，其特征在于，所述适配体2的核苷酸序列如seq id no.2所示。
4.根据权利要求1所述的用于检测心衰生物标志物nt-probnp的侧向层析纸，其特征在于，所述金纳米粒子偶联适配体1的制备方法如下：
5.根据权利要求4所述的用于检测心衰生物标志物nt-probnp的侧向层析纸，其特征在于，所述还原剂为三(2-羧乙基)膦，所述巯基化适配体1与所述还原剂的摩尔比为(45-55)：1。
6.根据权利要求4所述的用于检测心衰生物标志物nt-probnp的侧向层析纸，其特征在于，所述金纳米...
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