【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物成像，特别涉及一种用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签及其制备方法。
技术介绍
1、目前，国际流行的免疫分型方法流式细胞术，是基于荧光发射光谱的检测，但荧光基团发射光谱一般较宽，多参数检测时，不同荧光素发射光谱之间往往会发生重叠，这会导致两方面问题:①检测通量受限；②检测难度提高。为了保证数据精确，多参数检测时必须进行荧光补偿调节，大大增加了检测的复杂性，是传统荧光流式细胞术难以攻克的技术难题。质谱流式技术讲流式细胞术与质谱技术结合在一起，基于将专门设计的金属元素标签附着在抗体上，代替荧光标签，并利用了电感耦合等离子体飞行时间质谱法的高分辨率、灵敏度和分析速度进行分析测定。质谱流式可以使用多达上百种稳定金属同位素作为金属标签，通过量化与靶生物标志物结合的稳定金属同位素种类与强度，可以实现单细胞水平上多种蛋白质和基因转录物的同时检测。
2、质谱流式常用的金属标签为线性聚合物标签，通常为包含1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(dota)、二乙烯三胺五乙酸(dtpa)等含有多个能与三价金属离子配位的供氧、供氮配体的线性聚氨基甲酸酯，与单克隆抗体结合后可进行单细胞的识别、检测。但是这些线性聚合物每条聚合物链上配体含量只有20-50个左右，换言之，每个聚合物标签上只能结合20-50个左右金属离子。质谱探测器对注入仪器的镧系离子计数率为十万分之3到10，每个抗体偶联聚合物标签后可携带约100个金属原子，所以抗体结合100个标签才能产生一个检测信号。因而聚合物金属标签目前主
3、所以，现在有必要对现有技术进行改进，以提供更可靠的方案。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签及其制备方法。本专利技术提供了一种带有多个dota配体光接枝聚合物，聚合物一端带有马来酰亚胺基团，可以用来偶联抗体，聚合物内含多个乙二醇单元，可提高聚合物水溶性。聚合物标签偶联抗体后，接枝聚合物上配位的大量稀土金属离子可以提供质谱流式检测所需金属信号。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，包括以下步骤：
3、s1、制备光引发单体聚合物p1：
4、本专利技术所用的光引发单体聚合物p1主链是通过可逆加成断裂链转移聚合合成的，所用单体为2-(4-(2-羟基-2-甲基丙酰基)苯氧基)乙基丙烯酸酯(光引发单体)和n，n-二甲基丙烯酰胺(共聚单体，dma)，引发剂为偶氮二异丁腈(aibn)或偶氮二异戊腈(ambn)，链转移剂为二硫代苯甲酸叔丁酯。聚合反应溶剂为无水n,n-二甲基甲酰胺(dmf)或1,4-二氧六环。所得聚合物每条聚合物链中约含10～20个光引发单体(n＝10～20)及20～40个n，n-二甲基丙烯酰胺(m＝20～40)，聚合物链一端为二硫代苯甲酸酯基，另外一端为叔丁基。
5、合成路线如下：
6、
7、具体步骤包括：
8、s1-1、将n,n-二甲基丙烯酰胺、2-(4-(2-羟基-2-甲基丙酰基)苯氧基)乙基丙烯酸酯、引发剂、二硫代苯甲酸叔丁酯加入到聚合反应溶剂中；
9、s1-2、在氮气保护下加热搅拌反应；
10、s1-3、反应结束后使用乙醚沉淀聚合物，并洗去未反应的原料，得到光引发单体聚合物p1。
11、s2、制备光接枝聚合物p2：
12、本专利技术所用光接枝聚合物p2是通过紫外光照射光引发单体聚合物主链(p1)上的光单体单元产生自由基，进而引发聚合单体沿光单体聚合生成支链制备的，所用单体为n-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯(nas)、n，n-二甲基丙烯酰胺和乙二醇甲醚丙烯酸酯，紫外光波长为200nm-400nm，聚合反应溶剂为无水n,n-二甲基甲酰胺或1,4-二氧六环。所得聚合物每条支链中约含10～40个琥珀酰亚胺结构(y＝10～40)、10～20个n，n-二甲基丙烯酰胺结构(x＝10～20)及10～20个乙二醇甲醚丙烯酸酯结构(z＝10～20)，主体聚合物上约含100～400个琥珀酰亚胺结构(n*y＝100～400)。
13、合成路线如下：
14、
15、具体步骤包括：
16、s2-1、将n,n-二甲基丙烯酰胺、乙二醇甲醚丙烯酸酯、光引发单体聚合物p1、n-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯加入到聚合反应溶剂中；
17、s2-2、氮气保护，在室温下使用紫外光源照射搅拌反应；
18、s2-3、反应结束后使用乙醚沉淀聚合物，并洗去未反应的原料，得到光接枝聚合物p2；
19、s3、制备可稀土金属配位光接枝聚合物p3：
20、s3-1、将光接枝聚合物p2溶于聚合反应溶剂中，在氮气保护下加入三乙胺，搅拌状态下加入含dota(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸)的聚合反应溶剂，氮气保护下搅拌反应；
21、s3-2、反应结束后减压蒸馏除去聚合反应溶剂，向所得产物中加入三氟乙酸，氮气下搅拌反应；
22、s3-3、减压蒸馏除去三氟乙酸，使用去离子水萃取产物；
23、s3-4、用超滤管对产物进行水洗，浓缩后抽干，得到可稀土金属配位光接枝聚合物p3；
24、s4、制备可抗体偶联的光接枝聚合物p4：
25、s4-1、将步骤s3所得可稀土金属配位光接枝聚合物p3溶解于含dl-二硫苏糖醇的磷酸缓冲液中，加热搅拌反应；
26、s4-2、反应结束后降至室温，调节溶液ph值，并使用超滤管对产物进行洗涤；
27、s4-3、将所得浓缩液溶于磷酸缓冲液中，再加入150mg 1,8-二(马来酰亚胺)-3,6-二氧杂辛烷的聚合反应溶剂，搅拌反应；
28、s4-14、过滤除去反应产生的沉淀，滤液使用超滤管水洗，所得浓缩液抽干，冻干，得到可抗体偶联的光接枝聚合物p4。
29、聚合物p3和聚合物p4的合成路线如下：
30、
31、本专利技术中，使用带氨基侧链dota与活化的nhs酯基沿聚合物支链缩合。聚合物主链上一端硫代酯衍生物在反应条件下将被裂解为一级硫醇。偶联物经三氟乙酸(tfa)处理除去保护基团得到支链上带有dota基团的接枝聚合物，聚合物上dota总数量为n*y＝100～400个。该接枝聚合物在还原性试剂dl-二硫苏糖醇存在条件下将上述反应中可能生成的二硫键还原为巯基，并通过加入双马来酰亚胺化合物将马来酰亚胺基团通过迈克加成反应修饰到接枝聚合物主链上，使其具备与抗体偶本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，步骤S1具体包括：
3.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，步骤S2具体包括：
4.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，步骤S3具体包括：
5.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，步骤S4具体包括：
6.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，引发剂为偶氮二异丁腈或偶氮二异戊腈。
7.根据权利要求6所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，聚合反应溶剂为无水N,N-二甲基甲酰胺或1,4-二氧六环。
8.根据权利要求7所述的用于质谱
9.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.一种用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签，其特征在于，其通过如权利要求1-9中任意一项所述的方法制备得到。
...【技术特征摘要】
1.一种用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，步骤s1具体包括：
3.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，步骤s2具体包括：
4.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，步骤s3具体包括：
5.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光接枝聚合物金属标签的制备方法，其特征在于，步骤s4具体包括：
6.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位光...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘志周，邱凌飞，白鹏利，
申请(专利权)人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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